表达β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶基因的转基因烟草及其抗真菌病的研究 被引量：84

1

作者 蓝海燕 张丽华 +4 位作者 王兰岚 陈正华 田颖川 陈正华 王长海 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第1期70-77,共8页

利用烟草碱性β－１，３－葡聚糖酶及菜豆碱性几丁质酶基因构建了组成型表达的双价植物 表达载体ｐＢＬＧＣ，利用农杆菌介导法转化了烟草，并得到了转基因植株。对其进行分子生物 学分析的结果表明，部分转基因植株在所有检测中都显示... 利用烟草碱性β－１，３－葡聚糖酶及菜豆碱性几丁质酶基因构建了组成型表达的双价植物 表达载体ｐＢＬＧＣ，利用农杆菌介导法转化了烟草，并得到了转基因植株。对其进行分子生物 学分析的结果表明，部分转基因植株在所有检测中都显示较强的阳性反应，这说明外源基因 已整合到烟草基因组中并得到正确表达。活体接菌实验初步表明，转基因植株与对照相比，对 赤星病的侵染具有较强的抵抗能力。 展开更多

关键词 β-1 3-葡聚糖酶基因 转基因烟草 抗真菌病

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使用双抗真菌蛋白基因提高水稻抗病性的研究 被引量：49

2

作者 冯道荣 许新萍 +3 位作者 卫剑文 李宝健 杨祁云 朱小源 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第11期1187-1191,共5页

将含有串联的RC24基因和β-1，3－Glu基因的pGB12质粒与含有hpt基因的p35H质粒用基因枪法同时导入华南地区一优良籼稻（OryzasativaL．ssp．indica）品种“七丝软占”中。Southernblot分析证明获得17个同时整合有RC24基因和β-1，3－Gl... 将含有串联的RC24基因和β-1，3－Glu基因的pGB12质粒与含有hpt基因的p35H质粒用基因枪法同时导入华南地区一优良籼稻（OryzasativaL．ssp．indica）品种“七丝软占”中。Southernblot分析证明获得17个同时整合有RC24基因和β-1，3－Glu基因的转基因系。而Northernblot分析表明在不同的转基因系中两基因的表达量存在很大差异。对R1及R2代转基因植株的分子分析表明，这两个基因已稳定遗传到R1、R2代，并在RNA水平上持续表达。转基因植株苗期抗稻瘟病试验表明，部分R1代转基因植株苗对广东省稻瘟病菌（Magnaphorthagrisea）中的5个代表菌株表现出不同程度的抗性提高。而其中18株抗性提高的R1代转基因植株的R2代各苗对广东省稻瘟病菌优势生理小种中的3个代表菌株表现出一致的抗性提高，结合分子分析，初步证明获得10株整合有RC24和β-1，3－Glu双基因的稻瘟病抗性提高的R1代转基因纯系植株。且这些转基因纯系植株的离体叶片对纹枯病菌（RhizoctoniaSolaniKuhn的抗性也明显提高。 展开更多

关键词 转基因 水稻 碱性几丁质酶 基因 纹枯病菌

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获得抗稻瘟病和纹枯病的转多基因水稻 被引量：43

3

作者 冯道荣 许新萍 +3 位作者 范钦 李宝健 雷财林 凌忠专 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期293-300,共8页

将多个抗真菌病基因连同筛选基因 hpt一起导入一水稻品种中 ,共获得 4 9个独立的整合有 1～ 4个抗真菌病基因的转基因植株系。转基因植株中几丁质酶的酶活均高于非转化对照植株 ,且转多个几丁质酶基因或与 β- 1,3-葡聚糖酶基因一起的... 将多个抗真菌病基因连同筛选基因 hpt一起导入一水稻品种中 ,共获得 4 9个独立的整合有 1～ 4个抗真菌病基因的转基因植株系。转基因植株中几丁质酶的酶活均高于非转化对照植株 ,且转多个几丁质酶基因或与 β- 1,3-葡聚糖酶基因一起的转基因植株较转单个几丁质酶基因的植株有更高的酶活性。抗病试验表明 ,这些不同组合的 R2 代转基因植株对纹枯病和稻瘟病的抗性较非转化原种对照都有了提高。 展开更多

关键词 水稻 几丁质酶基因 β-1 3-葡聚糖酶基因 稻瘟病 纹枯病 抗生 转基因植株

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农杆菌介导法将β-1,3-葡聚糖酶基因导入油菜的研究初报 被引量：35

4

作者 蓝海燕 王长海 +1 位作者 陈正华 田颖川 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期6-10,共5页

将克隆的烟草 β-1 ,3 -葡聚糖酶基因插入双子叶植物高效表达载体 p Bin4 3 8中 ,构建了植物表达载体 p BLG。利用农杆菌介导法 ,将此抗真菌基因导入甘蓝型双低油菜品种 H1 65中 ,得到了抗卡那霉素的再生植株 ,并探讨了影响油菜分化的... 将克隆的烟草 β-1 ,3 -葡聚糖酶基因插入双子叶植物高效表达载体 p Bin4 3 8中 ,构建了植物表达载体 p BLG。利用农杆菌介导法 ,将此抗真菌基因导入甘蓝型双低油菜品种 H1 65中 ,得到了抗卡那霉素的再生植株 ,并探讨了影响油菜分化的几个要素。结果表明 :乙酰丁香酮及硝酸银等物质对油菜分化及绿苗的形成具有重要作用 ;油菜对卡那霉素十分敏感 ,提高卡那霉素浓度有可能将一部分转化体淘汰。对 8株再生植株进行了 PCR检测 ,其中 4株表现为阳性。进一步的点杂交分析表明 ,有 3株表现出较强的杂交信号 。 展开更多

关键词 β1 3-葡聚糖酶 基因 农杆菌介导 抗真菌病 油菜

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转几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因提高棉花对枯萎病和黄萎病的抗性 被引量：44

5

作者 程红梅 简桂良 +7 位作者 倪万潮 杨红华 王志兴 孙文姬 张保龙 王晓峰 马存 贾士荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1160-1166,共7页

枯、黄萎病是世界棉花生产中的两大重要病害。传统育种缺乏抗源,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶是植物防御体系中的两种防卫因子,两者之间存在协同增效作用。据此构建了4个单价和2个双价基因(分别定位于细胞内或细胞外)的植物表达载体,通过... 枯、黄萎病是世界棉花生产中的两大重要病害。传统育种缺乏抗源,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶是植物防御体系中的两种防卫因子,两者之间存在协同增效作用。据此构建了4个单价和2个双价基因(分别定位于细胞内或细胞外)的植物表达载体,通过花粉管通道法转化棉花,经PCR和Southern杂交检测以及1996～2000年温室及病圃多代筛选鉴定,已培育出对枯、黄萎病抗性提高的转基因棉花株系。将抗病基因导入国产抗虫棉品种GK19中,还获得了兼抗病、虫的转基因优系。 展开更多

关键词 几丁质酶 黄萎病 葡聚糖酶基因 β-1 抗性 枯萎病 Southern 3-葡聚糖酶 协同增效作用 植物表达载体 花粉管通道法 2000年 转基因棉花 抗虫棉品种 棉花生产 传统育种 防御体系 双价基因 筛选鉴定 杂交检测 GK19 基因导入

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几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因研究进展 被引量：37

6

作者 李春娟 单世华 +1 位作者 许婷婷 宫清轩 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期502-505,共4页

几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶是重要的水解酶,实践证明,转几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因植物能比较有效地抵抗真菌侵染。本文综述了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶结构分类、抗真菌机理,及其近年来在抗黄曲霉病研究中的应用研究,并对今后的... 几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶是重要的水解酶,实践证明,转几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因植物能比较有效地抵抗真菌侵染。本文综述了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶结构分类、抗真菌机理,及其近年来在抗黄曲霉病研究中的应用研究,并对今后的研究及应用进行了预测。 展开更多

关键词 几丁质酶 β-1 3-葡聚糖酶基因 黄曲霉病 侵染 水解酶 植物 抗真菌 研究进展 综述 抵抗

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几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因导入甘蔗 被引量：30

7

作者 顾丽红 张树珍 +4 位作者 杨本鹏 蔡文伟 黄东杰 王文治 李娇 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第2期277-280,共4页

将含有经过修饰的烟草(Nicotiana tabacumL.)Ⅰ类几丁质酶基因和Ⅰ类β-1,3-葡聚糖酶基因的双价植物表达载体pCG-Ⅱ在农杆菌介导下转化甘蔗优良品种ROC10和ROC22,获得抗G418的转化植株52株,经PCR检测33株呈阳性;对部分经PCR检测呈阳性... 将含有经过修饰的烟草(Nicotiana tabacumL.)Ⅰ类几丁质酶基因和Ⅰ类β-1,3-葡聚糖酶基因的双价植物表达载体pCG-Ⅱ在农杆菌介导下转化甘蔗优良品种ROC10和ROC22,获得抗G418的转化植株52株,经PCR检测33株呈阳性;对部分经PCR检测呈阳性的转化植株进行Southern杂交和黑穗病抗病性的体外抑菌实验,结果显示这两个基因均已整合到部分甘蔗的基因组中,且它们对甘蔗黑穗病的抗性均有不同程度的提高。 展开更多

关键词 甘蔗 几丁质酶基因 β-1 3-葡聚糖酶基因 转基因

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转几丁质酶-葡聚糖酶基因水稻稻瘟病抗谱分析 被引量：16

8

作者 许明辉 李成云 +5 位作者 李进斌 谭学林 田颖川 陈正华 唐祚舜 田文忠 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期307-310,共4页

用来源于云南各地属于 2 4个稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)生理小种的 3 3个菌株 ,对受体品种南 2 9及其 4个转几丁质酶 β 1,3 葡聚糖酶串联基因水稻T5 代品系进行了温室接种鉴定。结果表明 ,不能侵染受体品种南 2 9的 13个菌株也不... 用来源于云南各地属于 2 4个稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)生理小种的 3 3个菌株 ,对受体品种南 2 9及其 4个转几丁质酶 β 1,3 葡聚糖酶串联基因水稻T5 代品系进行了温室接种鉴定。结果表明 ,不能侵染受体品种南 2 9的 13个菌株也不能侵染转基因品系 ,可侵染受体品种南 2 9的 2 0个菌株一般不能侵染转基因品系 ,转基因水稻对稻瘟病菌抗性范围较受体对照扩大 ,证明转几丁质酶 葡聚糖酶基因水稻对稻瘟病具有一定的广谱抗性 ;诱发条件下 ,转基因品系大田叶瘟病情指数为 0～ 1级 ,穗瘟发病率为 0 .3 %～ 10 .2 3 % ,抗性较受体对照大幅度提高 ,表明这些品系在稻瘟病抗病育种中是有应用潜力的。 展开更多

关键词 几丁质酶-葡聚糖酶基因 水稻 稻瘟病 抗谱 转基因

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双价抗真菌基因表达载体的构建及转基因西瓜的研究 被引量：15

9

作者 张志忠 吴菁华 +1 位作者 吕柳新 何承坤 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期369-374,共6页

构建了同时含有番茄几丁质酶基因(Chi3)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体,以西瓜(Citrulluslanatus)子叶块为外植体,采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法,将Chi3和Glu-Ac同时导入西瓜栽培种“中... 构建了同时含有番茄几丁质酶基因(Chi3)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体,以西瓜(Citrulluslanatus)子叶块为外植体,采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法,将Chi3和Glu-Ac同时导入西瓜栽培种“中育一号”,共获得46株抗性再生植株。经PCR、Southernblot和RT-PCR检测,表明外源基因已成功整合到西瓜基因组中,并在转录水平得到表达。利用尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusariumoxysporum)对转基因植株进行离体叶片抗病性检测,表明转基因植株对枯萎病的抗性均有不同程度的增强。 展开更多

关键词 几丁质酶基因 β-1 3-葡聚糖酶基因 西瓜 遗传转化 抗病性

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低温条件下相关关键酶活性对棉纤维比强度形成的影响 被引量：19

10

作者 卞海云 王友华 +2 位作者 陈兵林 束红梅 周治国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期1235-1241,共7页

【目的】研究低温对纤维比强度形成的影响。【方法】通过设置大田分期播种试验,使相同果枝部位棉铃可以处于不同的温度条件下发育,研究低温对棉纤维发育关键酶活性及相关基因表达的影响。【结果】低温影响纤维素的累积速率并最终影响纤... 【目的】研究低温对纤维比强度形成的影响。【方法】通过设置大田分期播种试验,使相同果枝部位棉铃可以处于不同的温度条件下发育,研究低温对棉纤维发育关键酶活性及相关基因表达的影响。【结果】低温影响纤维素的累积速率并最终影响纤维比强度的形成,其原因是在不同水平上影响了纤维发育关键酶的活性。在生化水平上,低温(铃龄0～50d日均温<23.0℃,铃龄25～50d日均温<21.0℃)提高了纤维中β-1,3-葡聚糖酶的活性、降低了蔗糖合成酶的活性,且前者对温度更为敏感。在基因表达水平上,低温使Expansin、蔗糖合成酶基因的表达量增加,β-1,3-葡聚糖酶基因的表达与此相反,低温下Expansin到达表达峰值时间推后且维持高表达的时间延长,低温可导致15d铃龄纤维β-1,3-葡聚糖酶基因表达量显著降低,而蔗糖合成酶基因表达量显著升高。【结论】在纤维品质形成上,低温导致棉纤维伸长期及伸长高峰推后,低温下纤维素累积量、纤维比强度的变化特征与纤维蔗糖合成酶活性及β-1,3-葡聚糖酶基因表达的变化特征高度一致,与β-1,3-葡聚糖酶活性及蔗糖合成酶基因表达受低温影响的规律相反。 展开更多

关键词 低温 EXPANSIN β-1 3-葡聚糖酶 蔗糖合成酶 基因表达 纤维发育 纤维比强度

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转几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因烟草的研究 被引量：8

11

作者 黎定军 赵开军 +1 位作者 周清明 罗宽 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期211-213,共3页

为选育出高抗真菌病害的烟草新品种 ,利用叶盘法 ,通过农杆菌介导 ,将来自芥菜和橡胶的抗真菌蛋白基因几丁质酶基因和 β 1,3 葡聚糖酶基因转入烟草品种K32 6和红花大金元 ,在含卡那霉素的MS培养基 (MS +NAA0 .1mg/L +6 BA 1.0mg/L为... 为选育出高抗真菌病害的烟草新品种 ,利用叶盘法 ,通过农杆菌介导 ,将来自芥菜和橡胶的抗真菌蛋白基因几丁质酶基因和 β 1,3 葡聚糖酶基因转入烟草品种K32 6和红花大金元 ,在含卡那霉素的MS培养基 (MS +NAA0 .1mg/L +6 BA 1.0mg/L为芽诱导培养基 ,根诱导培养基为不含激素的MS)上进行不定芽和根诱导 ,共获耐卡那霉素再生苗 10 1株 .经PCR扩增检测 ,TB 1等 5 7株呈阳性 ,即已成功导入外源目的基因 .初步接种炭疽病菌和黑胫病菌结果表明 ,转基因植株后代具有良好的抗病能力 . 展开更多

关键词 烟草 几丁质酶基因 β-1 3-葡聚糖酶基因 抗病

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番茄灰霉病高效拮抗菌株的鉴定及通过导入β-1,3-葡聚糖酶基因提高其生防效果 被引量：14

12

作者 李桂霞 马汇泉 +1 位作者 刘婧 董瑾 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期44-49,共6页

从淄博温室土壤中分离到菌株B-04,对灰霉病菌表现较高的拮抗作用。采用形态特征观察、生理生化特性测定以及16SrDNA序列分析对其进行鉴定,为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。从质粒puc1940得到含有β-1,3-葡聚糖酶基因的4.1kb片段,将该... 从淄博温室土壤中分离到菌株B-04,对灰霉病菌表现较高的拮抗作用。采用形态特征观察、生理生化特性测定以及16SrDNA序列分析对其进行鉴定,为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。从质粒puc1940得到含有β-1,3-葡聚糖酶基因的4.1kb片段,将该基因与大肠杆菌-芽孢杆菌穿梭质粒pBE2和pHY300PLK连接,获得重组质粒PBE2-glu和pHY300PLK-glu,转入B-04菌株,获得工程菌株B-04-glu。与野生菌株相比,平板拮抗试验表明工程菌株对番茄灰霉病(Botrytis cinerea)抑菌效果明显增强。 展开更多

关键词 蜡样芽孢杆菌 β-1 3-葡聚糖酶基因 灰霉病

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转β-1,3-葡聚糖酶基因和几丁质酶基因棉花 被引量：4

13

作者 崔百明 祝建波 +4 位作者 肖璐 王爱英 朱新霞 乐锦华 陈正华 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第4期1-2,共2页

为了提高棉花的抗枯、黄萎病的能力 ,用花粉管通道法 ,将烟草 β - 1 ,3-葡聚糖酶基因和菜豆几丁质酶基因导入棉花 ,获得了抗卡那霉素的转化植株。经PCR、PCR -SouthernBlot检测 。

关键词 棉花 β-1 3-葡聚糖酶 几丁质酶 转基因

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抗真菌和抗除草剂基因多价植物表达载体构建及对烟草遗传转化的研究 被引量：12

14

作者 贾小霞 张金文 +2 位作者 王汉宁 马怀义 梁慧光 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期86-93,共8页

利用基因重组技术,将木霉几丁质酶基因(Chi)和-β1,3-葡聚糖酶基因(Glu)进行融合并将其引入含bar基因的载体pAHC25中,成功构建了由Ubiquitin启动子分别驱动Chi-linker-Glu和bar的中间载体,然后将其上的Ubi-Chi-linker-Glu-nos和Ubi-bar-... 利用基因重组技术,将木霉几丁质酶基因(Chi)和-β1,3-葡聚糖酶基因(Glu)进行融合并将其引入含bar基因的载体pAHC25中,成功构建了由Ubiquitin启动子分别驱动Chi-linker-Glu和bar的中间载体,然后将其上的Ubi-Chi-linker-Glu-nos和Ubi-bar-nos表达盒引入pBI121中,获得兼具除草剂抗性基因bar和真菌抗性基因Chi与Glu的三价植物表达载体pBIb-CG,并对烟草进行遗传转化,经PCR及Southern检测,共获得转基因烟草32株。外源基因已整合到烟草基因组中。离体抑菌试验表明转基因烟草叶片提取液对木霉菌和镰刀菌表现出一定的抗性。 展开更多

关键词 融合基因 几丁质酶 β—1 3葡聚糖酶 BAR基因 植物表达载体

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链格孢菌侵染采后甜瓜果实组织几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因表达分析 被引量：11

15

作者 白羽嘉 张培岭 +2 位作者 黄伟 冯作山 李梦 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期185-191,共7页

以伽师瓜(抗病性强)和86-1甜瓜(抗病性一般)果实为实验材料,研究链格孢菌(Alternaria alternata)侵染后几丁质酶(chitinase,CHT)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,GLU)基因表达规律。甜瓜果实接种A.alternata,7℃贮藏,测定病斑大小,... 以伽师瓜(抗病性强)和86-1甜瓜(抗病性一般)果实为实验材料,研究链格孢菌(Alternaria alternata)侵染后几丁质酶(chitinase,CHT)和β-1,3-葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,GLU)基因表达规律。甜瓜果实接种A.alternata,7℃贮藏,测定病斑大小,荧光定量聚合酶链式反应测定CmCht1、CmCht2和CmGlu相对表达量。结果表明:伽师瓜和86-1甜瓜接种A.alternata,在侵染9 d时出现病斑,9~24 d病斑直径不断扩大,86-1甜瓜病斑直径大于伽师瓜,侵染24 d时86-1甜瓜病斑直径是伽师瓜的1.12倍,伽师瓜对A.alternata侵染的抵抗能力要强于86-1甜瓜。在侵染期间,伽师瓜和86-1甜瓜CmCht1、CmCht2和CmGlu相对表达量显著提高,呈先升高后降低的变化趋势,伽师瓜和86-1甜瓜CmCht1、CmCht2和CmGlu相对表达量最高峰出现时间分别相差3、6、3 d,伽师瓜CmCht1、CmCht2相对表达量始终高于86-1甜瓜,CmGlu相对表达量在侵染12~24 d高于86-1甜瓜。在侵染期间CmCht1、CmCht2和CmGlu表达规律存在差异,侵染前期CmCht1、CmCht2相对表达量较高,侵染中期和后期CmGlu相对表达量较高;A.alternata侵染前期主要诱导了CHT基因的表达,中期和后期主要诱导了GLU的基因表达,CHT和GLU的基因协同表达,起到抗病性的作用。伽师瓜抗病性强于86-1甜瓜与CHT和GLU的基因的表达密切相关。 展开更多

关键词 甜瓜 链格孢菌 几丁质酶 β-1 3-葡聚糖酶 基因表达

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毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆及序列分析(英文) 被引量：10

16

作者 张艳 高健 徐有明 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第3期533-541,共9页

β-1,3-葡聚糖酶是一种植物病程相关蛋白,在植物抵御病害中有重要作用。本研究以毛竹为实验材料,利用RACE技术,克隆毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的外显子序列,并在β-1,3-葡聚糖酶基因的编码区两端设计引物,以毛竹基因组DNA为模版扩增该基... β-1,3-葡聚糖酶是一种植物病程相关蛋白,在植物抵御病害中有重要作用。本研究以毛竹为实验材料,利用RACE技术,克隆毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的外显子序列,并在β-1,3-葡聚糖酶基因的编码区两端设计引物,以毛竹基因组DNA为模版扩增该基因的内含子序列。序列结果表明,该基因全长1693bp,包含两个外显子和一个内含子,命名为PheGLU(GenBank登录号GU238236)。该基因包含1个996bp的开放阅读框,编码332个氨基酸,相对分子质量为3.541×104Da,其等电点pI为6.389,是一个酸性蛋白且分泌到胞外;其中,该蛋白的二级结构中包含35.15%的α-螺旋,21.82%的β-转角,43.03%的延伸链和无规则卷曲等;三级结构同源建模预测显示,它与大麦β-1,3-葡聚糖酶(PDB number:1ghsA)具有80.4%的同源性;聚类分析显示,该基因序列与已报道的其它植物具有较的高氨基酸序列同源性。本研究为进一步鉴定毛竹β-1,3-葡聚糖酶基因的抗真菌病害能力奠定了基础。 展开更多

关键词 毛竹 β-1 3-葡聚糖酶基因 基因克隆 序列分析 表达载体

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花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子的克隆及功能分析 被引量：10

17

作者 王合春 陈新利 +3 位作者 隋炯明 毕英娜 王晶珊 乔利仙 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期864-870,共7页

植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-G... 植物β-1,3-葡聚糖酶属于一种重要的植物病程相关蛋白(PR蛋白),容易受到激发子的诱导而积累。用1.5 mmol/L水杨酸(SA)对花生品种花育20号幼苗进行诱导处理0.5、12、24、36、48和72 h后,提取RNA进行荧光定量检测β-1,3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu)的表达量。结果表明,经诱导24 h后β-1,3-葡聚糖酶基因的表达量达到最高,是未经SA诱导的1.8倍。根据前期已克隆的花生β-1,3-葡聚糖酶基因序列(GenBank JQ801335),在其5'端设计3个嵌套的特异性引物扩增其上游启动子序列。以花育20号基因组DNA为模板,利用TAIL-PCR方法,扩增得到973 bp的花生β-1,3-葡聚糖酶基因启动子片段,在NCBI网站注册序列号为GenBank KC290400,并命名为Ah-Glu-Pro。PLACE和PlantCARE在线预测分析表明,Ah-Glu-Pro序列中含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,还含有病原菌及水杨酸响应的顺式调控元件。根据Ah-Glu-Pro序列设计上下游引物,采用普通PCR法从花育20号扩增得到931 bp的启动子序列,命名为Ah-Glu-P。将Ah-Glu-P取代pCAMBIA1301质粒中的CaMV35S启动子,构建植物表达载体pCAMBIA1301-Ah-Glu-P。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1301-Ah-Glu-P转化洋葱表皮细胞,经5 mmol/L SA诱导处理48 h后进行GUS染色。结果表明:经SA诱导后的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色显示为蓝色,未经SA诱导的洋葱表皮细胞GUS组织化学染色未显示蓝色,说明Ah-Glu-P是一个可被诱导的启动子,可能含有对SA响应的顺式调控元件。 展开更多

关键词 花生 β-1 3-葡聚糖酶基因(Ah-Glu) 诱导型启动子 染色体步移 表达载体

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转基因水稻对稻瘟病的抗性研究 被引量：8

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作者 杨祁云 许新萍 +2 位作者 朱小源 冯道荣 李宝健 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期162-166,共5页

采用苗期初筛、复筛、抗谱测定和田间自然诱发试验等不同鉴定方法,对经分子检测证明已整合有碱性几丁质酶基因和β-1,3-葡聚精酶基因的22个转化系的转基因水稻植株进行稻瘟病抗性鉴定研究,筛选出对稻瘟病的抗性比原种对照七丝软占有明... 采用苗期初筛、复筛、抗谱测定和田间自然诱发试验等不同鉴定方法,对经分子检测证明已整合有碱性几丁质酶基因和β-1,3-葡聚精酶基因的22个转化系的转基因水稻植株进行稻瘟病抗性鉴定研究,筛选出对稻瘟病的抗性比原种对照七丝软占有明显提高的一系列转基因水稻品系,其中表现高抗的有来自F4-9转化株系的7个品系。高抗材料的R7代品系,经室内抗谱测定及田间病圃试验结果,仍然表现高抗稻瘟病。本研究通过转基因技术,成功地将优质感病品种改良成高抗品系,研究结果证明了利用基因工程手段培育抗病水稻新品种是一个非常有希望的育种途径。 展开更多

关键词 转基因水稻 稻瘟病 抗性 转基因技术 品种改良 新品种 育种

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指天蕉β-1,3-葡聚糖酶基因全长cDNA的克隆及序列分析 被引量：8

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作者 翟国会 阮小蕾 +2 位作者 吴丽婷 谭小勇 李华平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期3134-3141,共8页

【目的】克隆植物中主要的防卫基因β-1,3-葡聚糖酶基因,为该基因功能研究和有效利用提供理论依据。【方法】通过分析芭蕉科植物的β-1,3-葡聚糖酶基因,据其保守区域设计一对简并引物,通过RACE法从野生指天蕉中克隆得到一个β-1,3-葡聚... 【目的】克隆植物中主要的防卫基因β-1,3-葡聚糖酶基因,为该基因功能研究和有效利用提供理论依据。【方法】通过分析芭蕉科植物的β-1,3-葡聚糖酶基因,据其保守区域设计一对简并引物,通过RACE法从野生指天蕉中克隆得到一个β-1,3-葡聚糖酶基因的全长cDNA——glu。【结果】glu全长为1 114 bp,其推导的氨基酸序列与GenBank中其它来源的β-1,3-葡聚糖酶蛋白序列的相似性为54%—71%。其中,与芭蕉科植物Grand Nain的β-1,3-葡聚糖酶蛋白序列的相似性最高(71%)。【结论】在芭蕉类作物中克隆了一个新的β-1,3-葡聚糖酶基因,为进一步研究该基因的功能并应用于作物转基因抗病育种研究奠定了基础。 展开更多

关键词 指天蕉 β-1 3-葡聚糖酶 基因克隆 序列分析

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白菜型冬油菜β-1,3-葡聚糖酶基因在低温胁迫下的表达 被引量：8

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作者 马骊 孙万仓 +8 位作者 袁金海 刘自刚 武军艳 方彦 许耀照 蒲媛媛 白静 董小云 何辉立 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期568-578,共11页

为探明β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase)对油菜(Brassica campestris)抵御低温胁迫能力的作用,通过蛋白质谱分析得到β-1,3-葡聚糖酶蛋白,采用RT-PCR技术克隆白菜型冬油菜(B.rapa)陇油6号和天油4号β-1,3-葡聚糖酶的c DNA序列;并... 为探明β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase)对油菜(Brassica campestris)抵御低温胁迫能力的作用,通过蛋白质谱分析得到β-1,3-葡聚糖酶蛋白,采用RT-PCR技术克隆白菜型冬油菜(B.rapa)陇油6号和天油4号β-1,3-葡聚糖酶的c DNA序列;并对该序列进行生物信息学分析;进而采用实时荧光定量PCR及半定量PCR检测β-1,3-葡聚糖酶基因在低温胁迫下的表达模式。结果获得长度为1 032 bp的陇油6号β-1,3-葡聚糖酶基因开放阅读框,编码343个氨基酸,相对分子量为38.102k Da,理论等电点为6.63,其与菜心(B.rapa subsp.chinensis)和甘蓝型油菜(B.napus)的蛋白质氨基酸序列同源性高达93.94%。该基因编码的酶是一个主要由α-螺旋组成的亲水性稳定蛋白,含有1个信号肽,存在2个跨膜结构域。该基因在进化上高度保守,其保守序列属于植物的糖基水解酶家族17特有的保守结构域。β-1,3-葡聚糖酶基因表达模式分析显示,4°C时该基因上调表达,继续低温(–4°C)胁迫处理,该基因上调表达至峰值,至–8°C时其表达下调。研究表明从白菜型冬油菜中克隆的β-1,3-glucanase在冬油菜品种陇油6号抗寒过程中发挥作用。 展开更多

关键词 β-1 3-葡聚糖酶基因 低温 分子克隆 表达分析

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