文摘目的:探讨灵杞黄斑颗粒含药血清对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤的保护作用。方法:运用血清药理学方法制备灵杞黄斑颗粒含药血清,用过氧化氢(500μmol/L)诱导RPE细胞建立体外氧化应激模型。实验分为正常对照组、模型组、空白血清组、低剂量药物血清组和高剂量药物血清组。分别采用原位末端转移酶标记技术(teminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)和流式细胞仪对各组RPE细胞的凋亡进行检测,并采用蛋白质印迹法检测各组细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)及Bcl-XL蛋白表达的变化。结果:流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、模型组、空白血清组、低剂量药物血清组、高剂量药物血清组各组凋亡率分别为(4.85±0.26)%、(20.02±1.37)%、(21.84±0.94)%、(13.56±0.55)%、(8.58±0.39)%;含药血清组的凋亡率比模型组明显减少(P<0.05)。TUNEL检测结果显示,凋亡细胞核呈现黄色着染,低剂量药物血清组中散见凋亡细胞,数量明显少于模型组,高剂量药物血清组中凋亡细胞进一步减少。Caspase-3和Bcl-XL表达检测显示,模型组caspase-3蛋白表达上调,高于高剂量药物血清组(P<0.05);而Bcl-XL蛋白表达下调,显著低于低剂量药物血清组和高剂量药物血清组(P<0.01)。结论:灵杞黄斑颗粒含药血清对兔RPE细胞氧化损伤具有一定的保护作用,该作用可能是通过清除自由基,下调caspase-3并上调Bcl-XL的表达实现的。
