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一个新的尖吻蝮蛇类凝血酶对血液活性的研究 被引量：16
1
作者 唐松山 滕达 王晓华 《徐州医学院学报》 CAS 2005年第4期308-312,共5页
目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间... 目的研究蛇毒类凝血酶Agacutin的止血效果。方法新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察新西兰白兔的血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果。结果静脉注射Agacutin0.01～0.05U·kg-1剂量后,各剂量组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30min药效达高峰,药效持续24h。与给药前比较,各实验组兔血纤维蛋白原含量和血黏度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致。试验结果显示,Agacutin对活化部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性。腹腔注射Agacutin0.5～2.0U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%)。结论Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白和不激活凝血因子Ⅱ和,当有伤口时,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成不溶性纤维蛋白和血栓的形成。所有实验结果显示,Agacutin是一个有效的潜在止血剂。 展开更多
关键词 类凝血酶 止血剂 尖吻蝮蛇 蛇毒 血液凝固 Agacutin 药效学
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文) 被引量：15
2
作者 杨青 胡学军 +4 位作者 许小明 高晓蓉 安利佳 苏志国 J.C.JANSON 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期390-393,共4页
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇... 根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 . 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 分离纯化
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蛇毒类凝血酶的研究进展 被引量：12
3
作者 李民 杨青 +2 位作者 包永明 许小明 安利佳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第S1期61-66,共6页
已在40余种蛇毒中发现类凝血酶成份,其有效的体内抗凝、体外促凝作用逐渐受到关注.对它的性质结构及制备纯化的研究取得重要成果.在揭示酶的功能与结构关系以及临床抗血栓应用方面前景广阔.
关键词 蛇毒 类凝血酶 丝氨酸蛋白酶 功能与结构
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降纤酶研究进展 被引量：13
4
作者 罗晓清 杨化新 金少鸿 《中国药事》 CAS 2008年第11期1008-1013,共6页
降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的... 降纤酶(Defibrase)是从尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus和长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys ussuriensis蛇毒中提取分离得到的一种类凝血酶。具有显著的去纤、降粘、溶栓等作用,广泛地应用于临床治疗和预防心脑血管血栓性疾病。对降纤酶的生化性质与结构、生产制备、药理作用与临床应用以及质量分析与控制等方面的研究进行了综述。 展开更多
关键词 降纤酶 类凝血酶 结构 生产 质量分析
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蛇毒类凝血酶的分子生物学研究进展及其应用 被引量：8
5
作者 袁盛凌 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期419-421,共3页
蛇毒类凝血酶在体外可以作用于纤维蛋白原使其凝固,具有类似凝血酶的功能。但在体内却表现出抗凝、降纤的功能。本文概述了蛇毒类凝血酶对纤维蛋白原的识别和作用、序列同源性特点、cDNA克隆的表达以及在临床中的应用。
关键词 蛇毒 类凝血酶 分子生物学 序列同源性 克隆 表达
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尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化 被引量：12
6
作者 翟宁 陈正杰 +1 位作者 冯军 赵文杰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期601-603,共3页
用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.... 用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分。经Superdex75HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%。SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k。该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ。EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用。结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶。 展开更多
关键词 类凝血酶 尖吻蝮蛇毒 柱色谱
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蛇毒类凝血酶Calobin cDNA的设计合成与克隆 被引量：5
7
作者 袁盛凌 段海清 张兆山 《生物技术通讯》 CAS 2003年第5期357-360,共4页
人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并... 人工合成了朝鲜蝮蛇(Agkistrodoncaliginosus)类凝血酶Calobin的编码序列。在设计引物时选择大肠杆菌和酵母菌的偏爱密码子,通过相互搭桥的方式,将全长为789bp的编码序列分成14个片段,每个片段长度为78个碱基左右,采用“核心模板法”并加以改进,通过4次PCR延伸反应,得到了全长基因。经扩增后回收目的片段,双酶切后连接到克隆载体,将得到的转化子酶切鉴定后,任意选择6个克隆进行双向测序,得到了全序列正确的3个克隆。本工作为类凝血酶在大肠杆菌和酵母系统中的高效表达奠定了基础,也为长度为700～900bp片段的合成提供了帮助。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 基因合成 聚合酶链式反应 序列分析
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长白山白眉蝮蛇毒类凝血酶的分离纯化 被引量：8
8
作者 牟萍 尹家荣 +1 位作者 侯瑞鹏 于鸿儒 《锦州医学院学报》 2005年第5期39-42,共4页
目的建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法。方法将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析。提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定。测定酶的N-末端... 目的建立一种分离纯化长白山白眉蝮蛇蛇毒类凝血酶的方法。方法将长白山白眉蝮蛇蛇毒溶解后离心,取上清进行阴离子交换层析,所得蛋白进行分子筛层析。提纯的蛋白用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定及相对分子量测定。测定酶的N-末端氨基酸序列。结果经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一区带,相对分子量为35.5kDa。N-末端氨基酸序列分析表明其N-末端氨基酸序列与立止血中巴曲酶N-末端氨基酸序列基本一致。提取率约为5mg类凝血酶/g蛇毒。结论用上述方法可制得高纯度的类凝血酶。 展开更多
关键词 长白山白眉蝮蛇 类凝血酶 纯化
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长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅱ——理化、酶学性质的鉴定 被引量：7
9
作者 王晓辉 何宝俊 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第3期167-171,共5页
长白白眉蝮蛇类凝血酶分子量为39 000,是一种糖蛋白。氨基酸组成分析表明,此酶共含303个氨基酸残基,其中酸性氨基酸含量较高,等电点为4.25。该酶对BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)水解活力的最适pH值为8左右,Km为3.53×10^(-4)mol/L,其... 长白白眉蝮蛇类凝血酶分子量为39 000,是一种糖蛋白。氨基酸组成分析表明,此酶共含303个氨基酸残基,其中酸性氨基酸含量较高,等电点为4.25。该酶对BAEE(苯甲酰-L-精氨酸乙酯)水解活力的最适pH值为8左右,Km为3.53×10^(-4)mol/L,其活性可被DFP(二异丙基氟磷酸)及PMSF(苯甲基磺酰氟)所抑制。催化降解纤维蛋白原过程中,只释放纤肽A,不释放纤肽B,形成的纤维蛋白可被5 mol/L尿素液溶解。 展开更多
关键词 蛇毒 类凝血酶 长白白眉蝮蛇 鉴定
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蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性 被引量：8
10
作者 薛伟明 郭春腾 +2 位作者 陈天豹 李光毅 饶平凡 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2001年第1期112-115,共4页
蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ... 蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 . 展开更多
关键词 蛇毒 凝血酶样酶 灌注色谱 蕲蛇 分离纯化 凝血酶活力 精氨酸酯酶 金属蛋白 出血活性
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新的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin止血作用的实验研究 被引量：8
11
作者 唐松山 王晓华 +3 位作者 张娟辉 杨志勇 刘菁 祁荣 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第7期781-786,共6页
目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均... 目的:研究类凝血酶Agacutin的止血效果.方法:新西兰白兔静脉注射Agacutin,观察血凝和纤溶指标;小鼠皮下注射Agacutin,采用小鼠剪尾试验测定其止血效果.结果:静脉注射Agacutin 0.01～0.05U·kg-1后,各组全血凝固时间与给药前相比均有不同程度的缩短(44.9%～60.5%),给药后30 min药效达高峰,药效持续24h.与给药前比较,各组兔血纤维蛋白原含量和血粘度在给药后有不同程度的降低,这与血液凝固时间缩短一致.试验结果显示,Agacutin对部分凝血活酶时间、血小板数量、血小板释放活性、血小板体外聚集、优球蛋白凝固时间均无明显影响,但对优球蛋白溶解时间有不同的缩短,显示有弱的溶栓活性.腹腔注射Agacutin0.5～2 U·kg-1剂量后,小鼠剪尾出血时间有不同程度的缩短(24%～66%).结论:Agacutin在血管内引起较高浓度的可溶性纤维蛋白且不激活凝血因子Ⅱ和XIII,在伤口部位加速止血,在正常的血管内,不会造成血栓形成. 展开更多
关键词 类凝血酶 止血剂 尖吻蝮蛇蛇毒 Agacutin
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蛇毒类凝血酶基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化 被引量：5
12
作者 李民 杨青 +3 位作者 包永明 雷旭宇 许建强 安利佳 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第2期22-25,共4页
将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞... 将大连蛇岛蝮蛇毒类凝血酶(Gloshedobin)基因克隆到载体pET32-a(+)上,在T7lac启动子下以N端融合硫氧还蛋白的形式在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,诱导条件为:30℃诱导6 h,IPTG浓度为1 mmol/L.利用固定化金属离子(Ni2+)亲和层析分别对胞内可溶物和变性条件下的包涵体进行纯化.通过SDS-PAGE检测融合蛋白的纯度,采用点杂交和纤维蛋白凝结活性检测分析,显示纯化产物具有较高生物活性. 展开更多
关键词 类凝血酶 固定化金属亲和层折 融合表达 大肠杆菌
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蝮蛇蛇毒类凝血酶的研究 被引量：6
13
作者 谭述军 刘艳明 +3 位作者 贲松彬 郭旭 宋杰 夏盛强 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1998年第1期19-21,共3页
为研制蝮蛇抗栓酶的换代产品，开发单一组分的类凝血酶制剂。采用离子交换和亲和层析等现代纯化方法，从东北白眉蝮蛇蛇毒中分离出了单一组分的类凝血酶。半成品经高效液相色谱凝胶柱测定，纯度大于90％，最高可达97.94％，分子量38200D... 为研制蝮蛇抗栓酶的换代产品，开发单一组分的类凝血酶制剂。采用离子交换和亲和层析等现代纯化方法，从东北白眉蝮蛇蛇毒中分离出了单一组分的类凝血酶。半成品经高效液相色谱凝胶柱测定，纯度大于90％，最高可达97.94％，分子量38200D，SDS－PAGE电泳测定为一条带，分子量为42100D，活性为1137BU／mg，比活性为1705BU／mg·pro，不含出血毒和神经毒，冻干成品制剂全部符合注射用品标准。 展开更多
关键词 类凝血酶 蝮蛇毒 制剂 研究
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长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅰ——纯化方法的研究 被引量：6
14
作者 王晓辉 何宝俊 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第2期114-120,共7页
采用四种纯化方法,对长白白眉蝮蛇类凝血酶的纯化途径进行研究。结果,阴阳离子交换柱、分子筛柱层析法周期较长,收率较低。羟基磷灰石柱法。对类凝血酶有较好的分离效果,但要求样品量小且纯度较高。亲和层析法分离类凝血酶,具有操作简... 采用四种纯化方法,对长白白眉蝮蛇类凝血酶的纯化途径进行研究。结果,阴阳离子交换柱、分子筛柱层析法周期较长,收率较低。羟基磷灰石柱法。对类凝血酶有较好的分离效果,但要求样品量小且纯度较高。亲和层析法分离类凝血酶,具有操作简便、纯化周期短、回收率高、处理样品量大等特点。 展开更多
关键词 长白白眉蝮蛇 类凝血酶 纯化
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蕲蛇蛇毒中一个新的类凝血酶的分离纯化与表征 被引量：6
15
作者 赖伟苹 郭春腾 +3 位作者 邓文汉 卢菀华 宁千年 饶平凡 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第1期64-67,共4页
使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝... 使用DEAE SephadexA 5 0、POROS 5 0HS及POROS 2 0PI等色谱分离技术 ,从蕲蛇粗毒中分离提纯得到 1个具有凝血活力的组分 ,经SDS PAGE和PAGE检测均为一条带 ,非还原条件下相对分子质量 2 4 .3kDa,还原条件下相对分子质量 33.0kDa ;其凝血活力为 91 .0NIHu mg.该组分不具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,肝素不影响该组分的凝血活性 ,EDTA部分抑制其活性 ,苯甲基磺酰氟 (PMSF)则会产生不可逆抑制作用 .该酶N 末端氨基酸序列为VIGGNGXDINEHRFLVAFF 。 展开更多
关键词 蕲蛇蛇毒 类凝血酶 分离纯化 表征 N-末端氨基酸序列
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蛇毒类凝血酶calobin在毕赤酵母中的表达 被引量：6
16
作者 袁盛凌 王芃 +5 位作者 陶好霞 展德文 王艳春 王令春 刘纯杰 张兆山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期526-532,共7页
蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中... 蛇毒类凝血酶是临床上防治血栓栓塞性疾病的有效药物。参照朝鲜蝮蛇(Agkistrodon caliginosus,Korean Viper)类凝血酶calobin基因序列(GenBank AccessionNo.U32937.1),将人工合成的calobin基因克隆到酵母表达载体pPICZαA,于毕赤酵母中表达,得到了分子量约为32kD的重组calobin蛋白,经甲醇诱导培养,表达产物可获得3.5g/L的高表达量。重组蛋白经过阴离子交换柱Q-Sepharose Fast Flow和分子筛Sephacryl-S-100凝胶过滤层析等纯化步骤进行了初步纯化。纯化后的重组calobin可以在纤维蛋白原平板上形成水解圈,经SDS-PAGE实验显示,重组蛋白能水解纤维蛋白原的Aα链,产生一条约40kD左右的降解带。在实验中未能发现重组calobin对纤维蛋白原的凝固作用。 展开更多
关键词 蛇毒类凝血酶 毕赤酵母 calobin 纤维蛋白原
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定点突变巴曲酶在毕赤酵母中的克隆与表达 被引量：5
17
作者 王宏英 徐梅 +5 位作者 兰海英 杨宇 张宏杰 李娜 薛雁 薛百忠 《蛇志》 2011年第2期105-110,共6页
目的为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的巴曲酶的降解。利用重叠PCR方法对巴曲酶基因进行定点突变,将巴曲酶基因第45位的Arg突变为Lys。方法将突变后的基因克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后... 目的为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的巴曲酶的降解。利用重叠PCR方法对巴曲酶基因进行定点突变,将巴曲酶基因第45位的Arg突变为Lys。方法将突变后的基因克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入巴斯德毕赤酵母细胞,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的定点突变巴曲酶,经SDS-PAG电泳、免疫印迹确定其分子量为32 kD。结果发酵罐的表达量达到52 KU/ml发酵液,较重组天然巴曲酶的表达量提高了73.3%。结论定点突变巴曲酶的表达量比重组天然巴曲酶的表达量有显著提高,表达的突变巴曲酶同样具有凝血活性。 展开更多
关键词 突变巴曲酶 类凝血酶 巴斯德毕赤酵母 克隆和表达 偏好密码子 套叠PCR
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尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin的亚基的拆分和氨基酸残基测序 被引量：5
18
作者 唐松山 唐治华 +1 位作者 李红枝 游娟 《广东药学院学报》 CAS 2009年第4期392-396,共5页
目的测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序。方法通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单... 目的测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序。方法通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单亚基样品,后者通过Edman降解法,测定了亚基N端15个氨基酸残基序列。结果大亚基(16kDa)的序列为:DCSSGWSSYEEHQYY,小亚基(15kDa)序列为DSSGWSSYEGHEYYV。结论测序结果经NCBI数据库检索发现,Agacutin为新的蛇毒类凝血酶。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇蛇毒 类凝血酶 亚基拆分 蛋白N端测序
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硫酸铵盐析在蕲蛇毒凝血酶样酶分离中的应用 被引量：3
19
作者 郭春腾 宁千年 +2 位作者 薛伟明 傅蓉 饶平凡 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2002年第1期122-125,共4页
探讨了硫酸铵沉降对蕲蛇毒中凝血酶样酶的初步分离效果的影响 ,确定出最佳处理条件 :2 .0 %的蕲蛇毒在pH 5 .0及 4 5 %饱和度的硫酸铵溶液中盐析沉降蕲蛇毒中非凝血酶样酶杂蛋白 。
关键词 蕲蛇毒 凝血酶样酶 硫酸铵盐析 色谱分离 沉淀量 凝历活力 PH值
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巴曲酶在毕赤酵母中的高效表达 被引量：5
20
作者 薛雁 徐梅 +2 位作者 薛百忠 王宏英 兰海英 《蛇志》 2009年第1期1-5,共5页
目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichia pastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-33,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血... 目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichia pastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-33,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的巴曲酶。经SDS-PAGE电泳确定其分子量为33.0kDa,免疫印迹证明重组巴曲酶具有天然巴曲酶的免疫活性。结果经发酵条件的优化,发酵罐的表达量达到25000Ku/L发酵液,从每升发酵液中可纯化出11.0mg重组巴曲酶。结论巴曲酶毕氏酵母菌成功的构建,为重组巴曲酶止血药的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 重组巴曲酶 类凝血酶 巴斯德毕赤酵母 偏好密码子
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