12个非综合征型遗传性耳聋家系mtDNA12SrRNA,tRNA^(Leu(UUR)),tRNA^(Ser(UCN))及16SrRNA基因序列分析 被引量：8

1

作者 李为民 韩东一 +4 位作者 袁慧军 王幼勤 曹菊阳 杨伟炎 姜泗长 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2001年第6期415-420,共6页

目的　探讨 mt DNA突变与遗传性耳聋的关系 ,以及突变家系对氨基糖甙类抗生素(aminoglycoside antibiotic,Am An)耳毒敏感性差异的原因。方法　调查了 12个非综合征型耳聋家系 ;抽取外周血 ,提取 DNA;PCR扩增线粒体 DNA(mitochondrial D... 目的　探讨 mt DNA突变与遗传性耳聋的关系 ,以及突变家系对氨基糖甙类抗生素(aminoglycoside antibiotic,Am An)耳毒敏感性差异的原因。方法　调查了 12个非综合征型耳聋家系 ;抽取外周血 ,提取 DNA;PCR扩增线粒体 DNA(mitochondrial DNA,mt DNA)目的片段 ,分别以 Alw2 6 、Apa 及 Xba 限制性内切酶检测 15 5 5 G、32 43G及 744 5 G 点突变 ;行 mt DNA 12 S r RNA、t RNALeu(UUR) 、t RNASer(UCN)及 16 S r RNA基因序列测定。结果　经酶切及测序证实 12个家系具有 mt DNA突变 ,形式为 :15 5 5 G突变家系 10个 ,744 5 G突变家系 2个 ,未发现 32 43G 突变家系。基因测序显示 mt DNA 16 S r RNA基因序列变化形式为 :2 2 30 G点突变、2 2 30 AG插入、2 2 43AG插入及 2 2 30 AA插入突变 ,它们在家族性 Am An耳毒敏感性家系中被发现 ,且呈母系遗传 ;在 Am An不敏感家系中未被发现。结论　单纯 15 5 5 G或 744 5 G突变家系表现为无诱因的渐进性遗传性耳聋或先天性聋 ;15 5 5 G或 744 5 G突变合并 16 S r RNA基因突变者对Am An高度敏感 ,表现为家族性敏感致聋。 展开更多

关键词 线粒体DNA 基因突变 非综合征型耳聋 限制性内切酶酶切分析 基因测序 母系遗传 遗传性耳聋

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马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析 被引量：5

2

作者 邢力 彭大新 +2 位作者 刘秀梵 张如宽 吴艳涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期317-320,共4页

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据... 将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 B抗原 限制性酶切分析 PCR

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多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体 被引量：6

3

作者 梁超 成思佳 +3 位作者 王聪 初亚男 奚涛 周国华 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第1期141-145,77,共6页

背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝... 背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法:通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果:检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论:多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。 展开更多

关键词 多重环介导核酸等温扩增技术 限制性酶切分析 血液病原体检测

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柯萨奇B组病毒3种检测方法的比较 被引量：5

4

作者 孙寒 张淑芹 +2 位作者 刘志屹 张福明 孙非 《中国地方病防治》 CAS 北大核心 2008年第3期176-178,共3页

目的探讨限制性内切酶分析法检测柯萨奇B组病毒的特异性和重现性。方法收集500例疑似病毒性心肌炎的患者血清,分别采用限制性内切酶分析法、ELISA法、RT-PCR法3种检测方法进行检测,每种方法在相同条件下连续重复3次,然后将其结果进行比... 目的探讨限制性内切酶分析法检测柯萨奇B组病毒的特异性和重现性。方法收集500例疑似病毒性心肌炎的患者血清,分别采用限制性内切酶分析法、ELISA法、RT-PCR法3种检测方法进行检测,每种方法在相同条件下连续重复3次,然后将其结果进行比较。结果ELISA法的3次检测的结果差别较大,阳性率分别为55.4%、58.4%、60.6%;RT-PCR法的3次检测的结果差别相对较小,阳性率分别为51.1%、51.6%、52.8%;限制性内切酶分析法的3次检测结果完全一致。结论限制性内切酶分析法是一种特异性强、重现性好,明显优于ELISA法和RT-PCR法的新的病毒检测方法。 展开更多

关键词 柯萨奇B组病毒 ELISA法 RT-PCR法 限制性内切酶分析法

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广西崇左市葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变型研究 被引量：5

5

作者 钟志娟 罗建明 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2013年第5期217-221,共5页

目的研究广西崇左市葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发生率及基因突变类型。方法对广西崇左市510例病例采用四氮唑蓝定量法筛查G6PD活性。对诊断为G6PD缺乏的病例采用PCR/限制性内切酶消化试验检测出G1376T、G1388A、A95G、G871A和C1... 目的研究广西崇左市葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症的发生率及基因突变类型。方法对广西崇左市510例病例采用四氮唑蓝定量法筛查G6PD活性。对诊断为G6PD缺乏的病例采用PCR/限制性内切酶消化试验检测出G1376T、G1388A、A95G、G871A和C1024T 5种常见G6PD基因突变类型,用DNA直接测序法检测未确定突变类型的标本。结果在广西崇左市510名居民中筛查出52例G6PD缺乏症,其缺乏率为10.20%。在52例G6PD缺乏症标本中,检出G1376T突变14例、G1388A突变12例、A95G突变13例、G871A突变6例、C1024T突变1例,C1360T突变1例、C519T突变1例,未定型4例。结论 G6PD缺乏症在广西崇左市的发病率为10.20%。G1388A、G1376T、A95G也是广西崇左市G6PD缺乏症最常见的基因突变。发现G6PDUnion 1例,很可能属于零星分布。 展开更多

关键词 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症 基因突变 限制性内切酶分析 广西崇左市

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油桐尺蠖核型多角体病毒(羊楼洞株)基因组特性 被引量：2

6

作者 梁布锋 刘明富 梁钧 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期6-9,共4页

用多种限制性内切酶单酶切、双酶切分析了油桐尺蠖核型多角体病毒（羊楼洞株）基因组DNA，同时用[α－32p）－dATP对几种酶的酶切产物进行末端标记。结果表明，此株病毒基因组约129kb，组成比较单一。与国内其它分离株基因组大小及酶切... 用多种限制性内切酶单酶切、双酶切分析了油桐尺蠖核型多角体病毒（羊楼洞株）基因组DNA，同时用[α－32p）－dATP对几种酶的酶切产物进行末端标记。结果表明，此株病毒基因组约129kb，组成比较单一。与国内其它分离株基因组大小及酶切电泳图谱均有较大差别。 展开更多

关键词 昆虫病毒 油桐尺蠖 核型多角体病毒 基因组

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质粒及限制酶分析和外膜蛋白测定对新生儿血培养不动杆菌阳性的研究 被引量：1

7

作者 张万明 吴仕孝 刘官信 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 1994年第5期257-259,共3页

研究目的探讨新生儿血培养不动杆菌高阳性率的原因及败血症的诊断。研究方法疑诊新生儿败血症者，在不同部位取双份血作细菌培养，用K—B纸片扩散法做药敏试验。用改良Birnboim法快速提取质粒，并进行质粒分析，用HindⅢ和EcoRⅠ两种限... 研究目的探讨新生儿血培养不动杆菌高阳性率的原因及败血症的诊断。研究方法疑诊新生儿败血症者，在不同部位取双份血作细菌培养，用K—B纸片扩散法做药敏试验。用改良Birnboim法快速提取质粒，并进行质粒分析，用HindⅢ和EcoRⅠ两种限制酶对35株流行株的质粒DNA进行酶切。用SDS—聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法测定外膜蛋白（OMP）。结果血培养不动杆菌阳性患儿51例，而污染者高达35例（68．6％），败血症仅16例（31．4％）。54．8％（57／104）菌株对12种以上药物耐药。189株细菌中165株（87．3％）含质粒，经HindⅢ酶切为6个DNA片段（1．9、2、4、5、8．5、18Kb），经EcoRⅠ酶切为6个DNAH段（2、2．6、3．2、6．3、22Kb），表明来自同一克隆。流行株含10条主要OMP，而非流行株含11条OMP，多1条25Kd带。具有上述质粒谱、限制酶谱和OMP谱的不动杆菌仅见于空气及治疗盘针头。结论新生儿血培养不动杆菌高阳性率的主要原因是污染。确诊败血症必须通过细菌培养、质粒分析、质粒DNA限制酶分析及OMP测定并结合病史、临床表现。 展开更多

关键词 新生儿 败血症 质粒 限制酶 外膜蛋白 不动杆菌

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犬Ⅱ型腺病毒DNA的快速提取及限制性酶切分析

8

作者 赵永军 殷震 +1 位作者 童光志 白丽萍 《兽医大学学报》 CSCD 1992年第2期119-122,共4页

按常规方法培养大肾传代细胞(MDCK),待细胞长成单层后,以2%的量接种犬Ⅱ型腺病毒弱毒株(MV-CAV_2).当绝大多数细胞出现病变时(约35～40h),直接从感染细胞培养物中提取CAV_2 DNA.以该法提取CAV_2 DNA,不仅操作简便、耗费少,而且产量也比... 按常规方法培养大肾传代细胞(MDCK),待细胞长成单层后,以2%的量接种犬Ⅱ型腺病毒弱毒株(MV-CAV_2).当绝大多数细胞出现病变时(约35～40h),直接从感染细胞培养物中提取CAV_2 DNA.以该法提取CAV_2 DNA,不仅操作简便、耗费少,而且产量也比常规的先纯化病毒再提取DNA的方法高2～3倍.该法可普遍用于从感染细胞中提取与蛋白共价结合的所有病毒核酸.采用电泳洗脱法纯化上述CAV_2 DNA,以Eco RI、Bam HI、Pst I、Sac I、Nsi I和Sph I酶切,电泳分离,建立了该病毒DNA的6种限制性内切酶图谱.本实验结果为该病毒DNA的分子克隆奠定了基础. 展开更多

关键词 犬 Ⅱ型腺病毒 DNA 限制性酶切

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IBV广东地方株D41S1基因PCR产物的酶切分析及其意义

9

作者 王林川 刘福安 廖丽春 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期62-64,共3页

对广东肾变病型鸡中分离致弱的ＩＢＶＤ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物作了ＨａｅⅢ酶切分析，发现其酶切产物与ＩＢＶＭ４１的一样，而与美国肾变型标准株Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ不同。根据国外用ＲＦＬＰ区分ＩＢＶ血清型的判定标准，Ｄ４１... 对广东肾变病型鸡中分离致弱的ＩＢＶＤ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物作了ＨａｅⅢ酶切分析，发现其酶切产物与ＩＢＶＭ４１的一样，而与美国肾变型标准株Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ不同。根据国外用ＲＦＬＰ区分ＩＢＶ血清型的判定标准，Ｄ４１株应归属于马萨诸塞血清型；综合此分离株的其它特性。 展开更多

关键词 BV PCR 酶切分析

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三种鸡形目鸟类线粒体DNA的研究

10

作者 李菁菁 阳建春 +2 位作者 谢力 林惠莲 黄韧 《中山大学学报论丛》 1997年第1期18-22,共5页

采用１２种限制性内切酶分析了家鸡（Ｇａｌｕｓｇａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、雉鸡（Ｐｈａｓｉａｎｕｓｃｏｌｃｈｉｃｕｓ）和普通珍珠鸡（Ｎｕｍｉｄａｍｅｌｅａｇｒｉｓ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）。结果：①５个不同品种... 采用１２种限制性内切酶分析了家鸡（Ｇａｌｕｓｇａｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、雉鸡（Ｐｈａｓｉａｎｕｓｃｏｌｃｈｉｃｕｓ）和普通珍珠鸡（Ｎｕｍｉｄａｍｅｌｅａｇｒｉｓ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）。结果：①５个不同品种家鸡ｍｔＤＮＡ具有相同的限制性类型，进一步说明家鸡ｍｔＤＮＡ种内遗传变异程度很低；②雉鸡ｍｔＤＮＡ的ＢｇｌⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＨｉｎｄⅢ和ＰｖｕⅡ等４种限制性酶的酶切类型与云南环颈雉不相同，说明雉鸡存在ｍｔＤＮＡ种内差异；③比较家鸡、雉鸡和珍珠鸡间ｍｔＤＮＡ的ＲＦＬＰ，计算他们之间的遗传距离，家鸡与珍珠鸡的遗传距离较近（Ｐ＝０．０９６），家鸡与雉鸡以及雉鸡与珍珠鸡的遗传距离较远，分别为０．２１５和０．２２９，初步结果表明珍珠鸡是距雉科的家鸡和雉鸡亲缘关系较近的种类，和家鸡的关系相当密切。 展开更多

关键词 线粒体DNA 家鸡 雉鸡 珍珠鸡 限制性内切酶分析 遗传分化

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我国部分省区鸡传染性法氏囊病病毒的分子流行病学研究 被引量：27

11

作者 阳秀英 韦平 +6 位作者 黄志永 磨美兰 韦天超 李康然 韦住奉 赖家宏 朱学勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期581-588,共8页

应用RT-PCR技术,对2000-2006年间收集于广西、江苏、浙江、安徽、海南的临床疑似传染性法氏囊病病鸡的法氏囊、脾脏和骨髓样品进行检测,对检测呈阳性的病料采用9～11日龄的鸡胚通过绒毛尿囊膜或鸡胚成纤维细胞接种的方法进行鸡传染性法... 应用RT-PCR技术,对2000-2006年间收集于广西、江苏、浙江、安徽、海南的临床疑似传染性法氏囊病病鸡的法氏囊、脾脏和骨髓样品进行检测,对检测呈阳性的病料采用9～11日龄的鸡胚通过绒毛尿囊膜或鸡胚成纤维细胞接种的方法进行鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的分离和传代,结果成功分离到23株IBDV;设计针对IB-DVVP2基因高变区(用vVP2表示)的引物对这些分离株及5株常用的中等毒力商品疫苗株进行RT-PCR扩增并对其进行酶切分析和核苷酸序列测定,分析比较23个分离株与参考毒株的vVP2的序列并绘制遗传系谱树。结果表明BH09、BH11、JS1、JS7、YY1、YY6、YL051、050222、TSC-2(9)、TZ(3)、HN0602共11个分离株属于超强毒株,与已发表的vvIBDV其它中国分离株、日本分离株OKYM、欧洲分离株DV86和UK661的亲源关系均较近;040124、YL052、020180、YLZF2、040131、BH15、YY2、050045、050057、050258、TSC-1(3)、A038共12株属于经典毒株,其中040124、YL052 2株属于中等偏强毒力疫苗株,其余10株则属于弱毒疫苗株。本研究的结果表明,近6年来在我国5个省区养鸡业中流行的IBDV主要为vvIBDV毒株,而且所有分离株VP2基因高变区均缺乏明显的时间和地域的遗传特征。 展开更多

关键词 RT-PCR 限制性内切酶分析技术 超强毒株 经典毒株 变异株 VP2基因高变区 分子流行病学

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斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序 被引量：3

12

作者 曾庆 龙綮新 +1 位作者 王章 蒲蛰龙 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第4期70-77,共8页

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶... 本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。 展开更多

关键词 斜纹夜蛾 NPV 多角体基因 克隆

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传染性非典型肺炎限制性内切酶检测方法的研究 被引量：2

13

作者 孙非 刘立侠 +11 位作者 金扩世 许守民 金洪涛 金宁一 靳玉琴 刘志屹 张淑芹 黄伟 江禹 万忠海 赵文彬 邹啸环 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期72-73,共2页

目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特... 目的建立一种对传染性非典型肺炎,又称严重急性呼吸综合征(SARS)准确诊断的新方法。方法利用GCG软件将已公布的SARS病毒变异品系与人类基因组、人类易感病原体进行比对分析。结果筛选出了用于检测的ScDNA核苷酸片段,并在该片段中确定特异性的酶切位点,使检测方法的准确性得以保证。结论与传统检测方法比较,限制性内切酶分析法完全克服了检测中非特异性结果的产生,使检测结果准确可靠。 展开更多

关键词 非典型肺炎 诊断 限制性内切酶分析法 传染性非典型肺炎 酶检测 严重急性呼吸综合征(SARS) 人类基因组 SARS病毒 非特异性 检测结果

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山东地区肾综合征出血热患者基因诊断分型研究

14

作者 辛崇尚 马立宪 +2 位作者 邵丽华 王刚 吴世英 《山东医药》 CAS 北大核心 2000年第12期1-3,共3页

采用逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR) ,对山东地区 60例肾综合征出血热 ( HFRS)患者的临床标本进行扩增 ,采用酶切分析鉴定扩增产物的特异性。结果 :60例标本均呈 型或 (和 ) 型阳性 ,扩增片段的大小与理论值一致。表明山东地区流行的 ... 采用逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR) ,对山东地区 60例肾综合征出血热 ( HFRS)患者的临床标本进行扩增 ,采用酶切分析鉴定扩增产物的特异性。结果 :60例标本均呈 型或 (和 ) 型阳性 ,扩增片段的大小与理论值一致。表明山东地区流行的 HFRS 型和 型毒株同时存在 ,以 型为主 ;RT-PCR是一项较特异。 展开更多

关键词 肾综合征出血热 RT-PCR 发型分型 基因诊断

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非综合征型感音神经性聋患儿GJB2基因突变分析 被引量：6

15

作者 石之驎 王沙燕 张阮章 《中国医学创新》 CAS 2016年第21期21-24,共4页

目的:对非综合征型感音神经性聋患儿的耳聋基因突变进行具体分析,研究GJB2基因突变与相应的特异性临床表现,为耳聋患者的遗传咨询、产前诊断以及临床治疗提供理论基础。方法:收集深圳地区遗传性非综合征耳聋患者100例和健康对照组50例,... 目的:对非综合征型感音神经性聋患儿的耳聋基因突变进行具体分析,研究GJB2基因突变与相应的特异性临床表现,为耳聋患者的遗传咨询、产前诊断以及临床治疗提供理论基础。方法:收集深圳地区遗传性非综合征耳聋患者100例和健康对照组50例,应用聚合酶链反应和直接测序法,检测GJB2基因的突变情况。结果:通过基因对照,发现100例耳聋患者中共检出携带GJB2 235del C点突变56例,占56%。其中,26例为纯合性突变,30例为杂合性突变。结论:GJB2基因突变是非综合征型感音神经性聋人群重要的分子病因之一,GJB2基因最为常见的突变类型是235del C,对GJB2基因进行临床检测具有重大意义。 展开更多

关键词 耳聋 GJB2基因 基因突变 PCR扩增 限制性内切酶酶切分析

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禽传染性支气管炎病毒免疫原基因的PCR获取及其酶切鉴定 被引量：4

16

作者 王林川 辛朝安 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期85-88,共4页

介绍用ＲＴ－ＰＣＲ（反转录－聚合酶链反应）获取禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株和广东地方致弱株Ｄ４１免疫原（Ｓ１）基因的详细方法，所用引物为ＩＢＶＢｅａｕｄｅｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ。结果... 介绍用ＲＴ－ＰＣＲ（反转录－聚合酶链反应）获取禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株和广东地方致弱株Ｄ４１免疫原（Ｓ１）基因的详细方法，所用引物为ＩＢＶＢｅａｕｄｅｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列，跨幅为１．７ｋｂ。结果表明，两株病毒所获的ＰＣＲ产物与预期的一致；用此对引物，以ＩＢＶＤ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物为模板，扩增出一样的ＤＮＡ片段。试验还显示，国内外几家公司有关ＲＴ和ＰＣＲ的分子生物学试剂可以兼用，适用于国内的有关研究；ＰＣＲ仪则以进口的或水浴锅式的为佳。对ＩＢＶＭ４１株Ｓ１基因的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行ＨａｅⅢ酶切图谱分析。 展开更多

关键词 禽病 传染性支气管炎 病毒 免疫 PCR 酶切分析

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快速点突变的优化方法 被引量：1

17

作者 王荣浩 陈瑞川 刘润忠 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第A02期282-285,共4页

DNA传统的快速点突变方法即"一步突变法"虽然可使DNA产生突变,但效率不高.市场上出售的快速点突变试剂盒,其突变效率可达80%以上,然而价钱昂贵.本文论述的快速点突变方法,在传统的"一步突变法"基础上做了改进,通过... DNA传统的快速点突变方法即"一步突变法"虽然可使DNA产生突变,但效率不高.市场上出售的快速点突变试剂盒,其突变效率可达80%以上,然而价钱昂贵.本文论述的快速点突变方法,在传统的"一步突变法"基础上做了改进,通过对引物突变点5′端序列Tm值的确定,使引物设计变得简单,初学者可轻松完成DNA的定点突变,而且大大降低了成本,适用于对大量DNA进行定点突变试验.试验结果表明:这种经过改良的方法突变率为96.22%,可为研究人员的试验带来便利,是一种值得推广的新方法. 展开更多

关键词 PCK PFU DpnI 酶切分析

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广东烟草花叶病毒移动蛋白基因的cDNA克隆和酶切鉴定 被引量：1

18

作者 王得元 刘志昕 +3 位作者 潘俊松 王鸣 郑学勤 王西雨 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 1998年第3期334-338,共5页

根据已报道的烟草花叶病毒移动蛋白基因序列，设计合成一对特异性引物。以广东ＴＭＶ株系ＲＮＡ为模板，用ＡＭＶ反转录酶反转录合成ｃＤＮＡ第一链；在复性温度５１℃条件下进行ＰＣＲ扩增，获得了一条０．８Ｋｂ的特异扩增产物，与已... 根据已报道的烟草花叶病毒移动蛋白基因序列，设计合成一对特异性引物。以广东ＴＭＶ株系ＲＮＡ为模板，用ＡＭＶ反转录酶反转录合成ｃＤＮＡ第一链；在复性温度５１℃条件下进行ＰＣＲ扩增，获得了一条０．８Ｋｂ的特异扩增产物，与已发表的ＴＭＶＭＰ基因编码区８０３ｂｐ大小相近；并将之克隆于ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（＋）质粒。限制性内切酶酶切分析表明，本研究筛选到的是含ＴＭＶＭＰｃＤＮＡ的正向插入组质粒。 展开更多

关键词 烟草花叶病毒 移动蛋白基因 CDNA克隆 酶切分析

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采用PCR法和限制性内切酶分析对12种分枝杆菌进行鉴定

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作者 蔡宏 李淑霞 +4 位作者 呼西旦 李君莲 武坚 张曼夫 陈永福 《西北农业学报》 CAS CSCD 1999年第2期6-10,共5页

采用６５ＫＤａ热激蛋白基因为模板，选择位于３９８－８３６基因序列处的一对分枝杆菌通用引物，扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶作酶切分析，根据酶切带型的... 采用６５ＫＤａ热激蛋白基因为模板，选择位于３９８－８３６基因序列处的一对分枝杆菌通用引物，扩增出４３９ｂｐ的基因片段。将１２种标准分枝杆菌的ＰＣＲ扩增产物即４３９ｂｐ用ＢｓｔＥⅡ限制性内切酶作酶切分析，根据酶切带型的大小、强弱以及带型数量进行分枝杆菌菌种鉴定。通过对１２种分枝杆菌的ＰＣＲ反应和限制性酶切分析，可将被检标本中大部分的分枝杆菌鉴定到种。本试验无需进行杂交或使用放射性物质，２４ｈ即可完成。 展开更多

关键词 分枝杆菌 PCR 限制性酶切分析

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