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微囊藻毒素(MC-LR)多克隆抗体的制备、纯化及鉴定 被引量:3
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作者 赵晓联 孙蔚榕 +1 位作者 刘媛 刘贤金 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期76-78,共3页
目的制备针对藻毒素(MCLR)的多克隆抗体,并鉴定其特性。方法利用合成的免疫抗原MCKLH结合物,按常规方法免疫新西兰大白兔20周,经离心、硫酸铵沉淀法制得纯化的抗体,计算其亲和常数,用间接竞争法测定效价、抑制率IC50及特异性。结果纯化... 目的制备针对藻毒素(MCLR)的多克隆抗体,并鉴定其特性。方法利用合成的免疫抗原MCKLH结合物,按常规方法免疫新西兰大白兔20周,经离心、硫酸铵沉淀法制得纯化的抗体,计算其亲和常数,用间接竞争法测定效价、抑制率IC50及特异性。结果纯化的MCLR抗血清效价大于25600,最低检出限为0.01ngml,IC在0.1~1ngml之间,与MCLW和MCLF的交叉反应率为0.1%~20%。 展开更多
关键词 藻毒素-LR 多克隆抗体 制备 鉴定
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Prokaryotic Expression and Preparation of Polyantibody of Human Histydyl-tRNA Synthetase Related Gene
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作者 孟宪芳 施静 +1 位作者 刘晓春 陈金中 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2004年第6期535-536,555,共3页
Summary: The aim of this study was to express and purify human histydyl-tRNA synthetase related gene and to prepare its polyantibody. The open reading frame was amplified by PCR, and then recombined into prokaryotic e... Summary: The aim of this study was to express and purify human histydyl-tRNA synthetase related gene and to prepare its polyantibody. The open reading frame was amplified by PCR, and then recombined into prokaryotic expression vector pQE30 and transformed into E. coli M15 for expression. The expressed products were induced by IPTG after the reconstructed pQE30 was transferred into M15. After purified by Ni affinity chromatography, the product was identified to be a single band by SDS-PAGE. The rabbits were inoculated with purified products. High-titer polyantibody was successfully prepared. Highly-purified expression product and prepared polyantibody may provide a good basis for further study. 展开更多
关键词 human histydyl-tRNA synthetase related gene polyantibody PURIFICATION
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鲤吉陶单极虫免疫原性的研究 被引量:1
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作者 杨振国 陶增思 +5 位作者 卢强 周玉 汪建国 徐广宏 刘子 李德昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期143-145,共3页
以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗... 以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗经间接 EL ISA可检出抗原的最低质量浓度分别为 0 .14、0 .2 0、0 .32和 0 .86 mg/ L;IFA定位显示 ,单、多抗检出的抗原都定位于虫壁 ,其中 4A8的抗原主要位于虫体后部 (胚核附近 ) ,6 B8和 7B9的抗原主要位于虫体前部 (极囊附近 )和极丝 ;Western- blot试验表明 ,4A8结合的抗原相对分子质量为 72 0 0 0 ,多抗结合的抗原相对分子质量分别为 5 80 0 0、70 0 0 0、880 0 0 ,3株单抗和多抗均为抗 T.kitauei的抗体 ,4A8具有明显的种、期特异性 ;自然感染该虫的鲤鱼血清中查不到循环抗体。 展开更多
关键词 鲤吉陶单极虫 免疫原 单克隆抗体 多克隆抗体
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尿激酶受体在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备
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作者 唐辉滨 于伟英 +4 位作者 何诚 廖劲辉 田昱 郑起 朱运松 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第3期185-188,共4页
目的构建尿激酶受体(urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor,uPAR)表达质粒并在大肠杆菌中表达,用纯化的表达产物uPAR蛋白制备多克隆抗体并初步应用于肿瘤标本的检测。方... 目的构建尿激酶受体(urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor,uPAR)表达质粒并在大肠杆菌中表达,用纯化的表达产物uPAR蛋白制备多克隆抗体并初步应用于肿瘤标本的检测。方法用基因工程的方法构建uPARcDNA表达质粒pLY4-uPAR,转化重组大肠杆菌在42℃条件下诱导表达;利用SDS-PAGE进行纯化并用纯化后的抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体,应用制备的抗体对乳腺癌和肝癌中uPAR的分布进行检测。结果uPAR表达质粒在大肠杆菌中高效表达,表观Mr为30×103左右。表达的uPAR占全菌蛋白的20%左右;获得了效价为1∶32的uPAR多克隆抗体;发现uPAR主要分布在癌细胞的表面及胞质内,而在癌旁组织中则较弱。结论uPAR在大肠杆菌获得高效表达,并制备得到多克隆抗体。uPAR在癌组织(乳腺癌及肝癌)与癌旁组织间的表达差异提示可将其应用到临床肿瘤的诊断与肿瘤转移的实验性研究中。 展开更多
关键词 尿激酶受体 多克隆抗体 大肠杆菌 表达 肿瘤血管
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鸡PERK的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 袁晓琴 刘梦茜 +5 位作者 李春燕 陈仕怡 许丽惠 周五朵 吴异健 王全溪 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第4期428-433,共6页
根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱... 根据鸡的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)基因序列进行抗原肽分析,选择含大片段抗原表位区约1 500 bp的一段基因(15~1 515 bp)设计一对特异性引物后进行RT-PCR扩增,并构建pET-32a(+)-PERK重组质粒,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中.优化诱导表达条件,纯化重组蛋白后免疫兔并制备多克隆抗体.PCR鉴定、酶切鉴定和测序结果表明,pET-32a(+)-PERK重组质粒构建成功.SDS-PAGE电泳鉴定结果表明,重组蛋白在1.0 mmol·L-1IPTG、25℃下诱导9 h时的表达量最大.蛋白纯化结果表明,100 mmol·L-1咪唑洗脱液可较好地洗脱重组蛋白,获得较多的纯化蛋白.免疫结束后,抗体效价检测结果表明,制备的多克隆抗体效价达1∶32 000,可以与重组蛋白特异结合. 展开更多
关键词 鸡蛋白激酶R样内质网激酶(PERK) 原核表达 多克隆抗体
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