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应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因 被引量：11
1
作者 张梅 司履生 王一理 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期22-26,共5页
目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (G... 目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3碱基序列进行前后拼接 (IL- 12 p40 -多肽接头 - p35 ) ,构建 hsc IL- 12融合基因 ,并进行核苷酸序列测定 ,进一步将 hsc IL - 12融合基因插入 pc DNA3.1真核表达载体中 ,转染 COS- 7细胞表达 hsc IL - 12融合蛋白 ,并行 Western blot分析。结果该融合基因经 DNA序列分析表明 :p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确 ,融合基因可在 COS- 7细胞中表达hsc IL- 12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为 70 0 0 0 u,可与鼠抗人 IL- 12 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论重组 PCR技术是十分有效。 展开更多
关键词 重组PCR 人白细胞介素12 人单链白细胞介素 融合基因
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人白细胞介素-12(hIL-12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达 被引量：2
2
作者 杨林 张晓馨 +3 位作者 陈新华 龙綮新 王珣章 李迎秋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期35-42,共8页
人白细胞介素 1 2 (hIL 1 2 )是细胞介导免疫发生的关键调节因子 ,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子 ,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成。利用DNA重组技术 ,分别构建了含hIL 1 2 p35基因和 p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3 ... 人白细胞介素 1 2 (hIL 1 2 )是细胞介导免疫发生的关键调节因子 ,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子 ,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成。利用DNA重组技术 ,分别构建了含hIL 1 2 p35基因和 p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3 p35和pAcAB3 p40。将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒 (AcNPVBaculoGoldLinearizedBaculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞 ,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV OCC hIL 1 2 (p35)与AcNPV OCC- hIL 1 2 (p40 )。将两种病毒分别感染Sf9细胞 ,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDS PAGE和Westernblot检测 ,结果显示hIL 1 2p35和 p40两基因均在昆虫细胞中获得表达 ,且能分泌至胞外。表达产物具有免疫原性。 展开更多
关键词 人白细胞介素 杆状病毒表达系统 表达
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重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达 被引量：1
3
作者 张梅 司履生 +1 位作者 王一理 耿宜苹 《西安医科大学学报》 CSCD 2000年第4期297-302,共6页
克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法　从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1... 克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法　从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果　所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论　本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1 展开更多
关键词 重组人单链白细胞介素12 融合基因 真核表达
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