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内外源性EETs对血管内皮一氧化氮合酶的表达及其在Thr-495位磷酸化的作用 被引量:4
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作者 蒋建刚 陈积雄 +3 位作者 王红 邓良刚 陈瑞娟 汪道文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期462-467,共6页
目的 研究细胞色素P4 5 0表氧化酶基因转染和直接加入EETs对内皮细胞eNOS表达及其在Thr 4 95位磷酸化的影响。方法 在原代培养的牛主动脉内皮细胞中 ,分别加入生理浓度的 8,9 EET(1 0 0nmol·L-1 )、1 1 ,1 2 EET(1 0 0nmol·... 目的 研究细胞色素P4 5 0表氧化酶基因转染和直接加入EETs对内皮细胞eNOS表达及其在Thr 4 95位磷酸化的影响。方法 在原代培养的牛主动脉内皮细胞中 ,分别加入生理浓度的 8,9 EET(1 0 0nmol·L-1 )、1 1 ,1 2 EET(1 0 0nmol·L-1 )、1 4 ,1 5 EET(1 0 0nmol·L-1 )孵育 4h ,或直接用重组腺相关病毒介导的花生四烯酸表氧化酶转染牛主动脉内皮细胞2wk ,以产生内源性EETs ,用Westernblot法检测总eNOS蛋白的表达及eNOSThr 4 95磷酸化的水平 ;此外 ,从大鼠尾静脉注射真核表达质粒pCB6、pCB6 2C1 1OR、pCB6 2J2和pCB6 F87V ,2wk后检测大鼠主动脉总eNOS表达及eNOSThr 4 95磷酸化的水平。结果 与空白和溶媒组比较 ,外源性EETs明显促进内皮细胞总eNOS表达 ,增加eNOSThr 4 95的磷酸化 ,而CYP4 5 0抑制剂 (1 7 ODYA)则可明显降低eNOS表达和eNOSThr 4 95的磷酸化水平 ;与相应的对照组比较 ,体内和体外转染不同的表氧化酶基因均能明显上调内皮细胞eNOS的表达 ,增加eNOSThr 4 95的磷酸化水平。结论 EETs和CYP表氧化酶不仅能明显促进血管内皮细胞总eNOS蛋白的表达 ,而且还通过其翻译后修饰来增加其Thr 4 展开更多
关键词 内皮源性超极化因子 一氧化氮合酶 主动脉内皮 细胞
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三七总皂甙对培养的猪主动脉内皮细胞释放一氧化氮的影响 被引量:26
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作者 尹小川 刘建康 +3 位作者 周序珑 胡黎平 李朝红 邓漪平 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 1996年第1期20-23,共4页
本文观察了中药田七的主要药用成分三七总皂甙对培养的猪主动脉内皮细胞分泌一氧化氮以及形态学的影响。结果表明加有三七总皂甙条件培养液的猪主动脉内皮细胞生长良好,仍融合成片。而对照组的猪主动脉内皮细胞出现明显收缩,胞浆中有... 本文观察了中药田七的主要药用成分三七总皂甙对培养的猪主动脉内皮细胞分泌一氧化氮以及形态学的影响。结果表明加有三七总皂甙条件培养液的猪主动脉内皮细胞生长良好,仍融合成片。而对照组的猪主动脉内皮细胞出现明显收缩,胞浆中有大量小空泡。猪主动脉内皮细胞在三七总皂甙的条件培养液中培养24小时后,条件培养液中一氧化氮含量由对照组的55nmol·L-1上升到平390nmol·L-1(P<0.001)。从培养的猪主动脉内皮细胞在加入三七总皂甙条件培养液后不同时间检测其条件培养液中的一氧化氮含量也表明三七总皂甙能在短时间内刺激内皮细胞分泌一氧化氮。结果提示三七总皂甙能明显增加培养中的猪主动脉内皮细胞分泌一氧化氮,对培养的内皮细胞的生长有维持和保护作用。 展开更多
关键词 三七总皂甙 主动脉 内皮细胞 药理学 一氧化氮
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茶色素对培养猪离体主动脉内皮细胞功能影响的实验研究 被引量:9
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作者 王云开 苏海 程晓曙 《高血压杂志》 CSCD 1999年第1期89-92,共4页
目的利用体外培养的猪主动脉血管内皮细胞的实验模型,研究茶色素(TP),左旋精氨酶(L-Arg),NO合酶抑制剂(L-NAME)对血管内皮细胞增殖及分泌一氧化氮(NO)、内皮素(ET)的干预作用。方法制备3~6代猪主动... 目的利用体外培养的猪主动脉血管内皮细胞的实验模型,研究茶色素(TP),左旋精氨酶(L-Arg),NO合酶抑制剂(L-NAME)对血管内皮细胞增殖及分泌一氧化氮(NO)、内皮素(ET)的干预作用。方法制备3~6代猪主动脉血管内皮细胞的单细胞悬液。分为六个组,每组8孔,5×104个细胞/孔。a.对照组,b.L-Arg(10μmol/L)组,c.L-NAME(10-2μmol/L)组,d.茶色素分低(10μg/ml)、中(50μg/ml)、高(100μg/ml)剂量三个组,培养1,3,5天后分别进行细胞计数,培养48小时后测培养液中的NO及ET含量。结果(1)细胞生长试验:L-Arg组与对照组相比细胞数明显减少,而L-NAME与对照组相比,细胞数明显增加。茶色素低、中、高剂量三个组分别与对照组相比,细胞数均明显减少,其抑制作用与剂量相关;(2)PAEC分泌NO及ET含量:L-Arg组与对照组相比,ET降低,NO升高;而L-NAME与对照组相比,ET增高,NO降低。茶色素低、中、高剂量三个组与对照组相比,NO升高,ET降低,并与剂量相关。结论茶色素抑制离体培养的PAEC增殖,抑制ET分泌,促进NO释放,且与剂量相关? 展开更多
关键词 主动脉 内皮细胞功能 一氧化氮 内皮素 茶色素
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Effe西红花酸对动脉粥样硬化鹌鹑血清一氧化氮含量的影响及其机制(英文) 被引量:5
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作者 唐富天 钱之玉 郑书国 《中国天然药物》 SCIE CAS CSCD 2005年第5期316-320,共5页
目的:观察西红花酸(CCT)对动脉粥样硬化(AS)鹌鹑血清一氧化氮(NO)含量的影响并探讨其可能的作用机制。方法:用高脂饲料复制鹌鹑AS模型并灌胃给予CCT,9周后做主动脉HE染色观察AS病理变化、酶法测定血清中NO含量;培养牛主动脉内皮细胞(BAE... 目的:观察西红花酸(CCT)对动脉粥样硬化(AS)鹌鹑血清一氧化氮(NO)含量的影响并探讨其可能的作用机制。方法:用高脂饲料复制鹌鹑AS模型并灌胃给予CCT,9周后做主动脉HE染色观察AS病理变化、酶法测定血清中NO含量;培养牛主动脉内皮细胞(BAECs) ,用氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)作用后测定培养液中NO含量和细胞中内皮源性NOS(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)活性,RT-PCR方法测定eNOS基因表达水平,观察CCT对上述指标的影响。结果:CCT(25 ,50 ,100 mg/kg)能够明显改善鹌鹑AS病变,显著升高AS鹌鹑血清中NO含量;OX-LDL能显著减少BAECs培养液中NO含量,降低细胞内eNOS活性,下调eNOS mRNA表达水平。CCT(1 ,10μmol/L)能显著增加OX-LDL作用后细胞培养液中NO含量,提高细胞内eNOS活性、上调eNOS mRNA表达水平。OX-LDL和CCT对细胞内iNOS活性没有明显影响。结论:CCT能显著增加AS鹌鹑血清NO含量,提高OX-LDL作用后牛主动脉内皮细胞NO含量和eNOS活性,其机制与CCT上调eNOS mRNA表达水平有关。 展开更多
关键词 鹌鹑动脉粥样硬化 牛主动脉内皮细胞 氧化型低密度脂蛋白 一氧化氮 一氧化氮合酶 西红花酸
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机械刮取法体外培养牛胸主动脉内皮细胞 被引量:4
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作者 谭培艺 高卫真 +3 位作者 康毅 焦建杰 娄建石 刘艳霞 《天津医科大学学报》 2010年第2期198-200,共3页
目的:探讨牛胸主动脉内皮细胞(CTAECs)的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法:无菌手术刀片在牛胸主动脉内膜刮取内皮细胞,"力度梯度标记法"探索刮取力度,细胞收集... 目的:探讨牛胸主动脉内皮细胞(CTAECs)的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法:无菌手术刀片在牛胸主动脉内膜刮取内皮细胞,"力度梯度标记法"探索刮取力度,细胞收集于含20%南美胎牛血清的培养基中培养,对培养细胞进行Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定。结果:机械刮取法体外培养可以获得大量CTAECs,在倒置显微镜下呈多角形或短梭形,细胞核清晰,呈卵圆形,单层细胞融合后呈铺路石子样排列。细胞生长状态良好,抗Ⅷ因子相关抗原染色呈阳性。结论:机械刮取法是获得CTAECs的一种可取方法,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。 展开更多
关键词 牛胸主动脉内皮细胞 培养方法 分离 鉴定
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生长分化因子11对软脂酸诱导小鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用 被引量:4
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作者 梅稳 向光大 +4 位作者 卢俊颜 李欢 刘敏 向林 董靖 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2017年第2期122-129,共8页
目的探索生长分化因子11 (GDF-11)对软脂酸(PA)诱导的小鼠主动脉内皮细胞(MAECs)的作用及其相关机制。 方法通过加或不加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)或Smad3抑制剂SIS3研究eNOS和Smad通路在G... 目的探索生长分化因子11 (GDF-11)对软脂酸(PA)诱导的小鼠主动脉内皮细胞(MAECs)的作用及其相关机制。 方法通过加或不加内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)或Smad3抑制剂SIS3研究eNOS和Smad通路在GDF-11保护软脂酸诱导的MAECs中的作用,将MAECs分为:(1)对照组;(2)PA组;(3)PA+GDF-11组;(4)PA+GDF-11+L-NAME组;(5)PA+GDF-11+SIS3组,培养24 h后,活性氧试剂盒及实时-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组细胞氧化应激水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blotting法检测各组抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax及Cleaved-caspase3蛋白表达水平。研究GDF-11对MAECs Smad信号通路的影响,MAECs分为:(1)对照组;(2)GDF-11组;(3)GDF-11+转化生长因子β(TGF-β)受体Ⅰ抑制剂组(GDF-11+ SB431542组),培养30 min后,免疫荧光染色法检测各组MAECs细胞磷酸化Smad2/3 (P-Smad2/3)表达水平;研究GDF-11对MAECs AMPK/eNOS信号通路的影响,MAECs分为:(1)对照组;(2)GDF-11组;(3) GDF-11+AMPK抑制剂Compound C组;(4)GDF-11+L-NAME组;(5)GDF-11+Compound C+L-NAME组,培养30 min后,Western blotting法检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK (P-AMPK)、eNOS、磷酸化eNOS (P-eNOS)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt (P-Akt)、蛋白激酶A (PKA)、磷酸化PKA (P-PKA)水平。多组之间比较采用单因素方差分析,组间多重比较用最小显著性差异t检验。 结果与对照组相比,PA组细胞氧化应激和凋亡率显著增加(28.9%±2.2%比7.9%±1.5%),PA+GDF-11组细胞氧化应激和凋亡率明显低于PA组(12.6%±1.6%比28.9%±2.2%),而PA+GDF-11+L-NAME组和PA+GDF-11+SIS3组细胞氧化应激和凋亡率又明显低于PA+GDF-11组(分别为21.8%±2.0%、20.1%±1.8%、12.6%±1.6%,F= 97.89,P〈0.05)。与对照组相比,GDF-1 展开更多
关键词 生长分化因子1 1 小鼠主动脉内皮细胞 软脂酸 凋亡
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鱼藤酮激活AMPK-ULK1信号通路诱导大鼠胸主动脉内皮细胞自噬
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作者 常笑语 薛姝婧 +3 位作者 曹红亭 吴阳 朱玲勤 李光华 《宁夏医科大学学报》 2024年第9期865-872,共8页
目的探讨鱼藤酮对大鼠胸主动脉内皮细胞(RTAEC)自噬的影响及其初步机制。方法选用60只雄性SD大鼠,随机分为对照(Con)组、二甲基亚砜(DMSO)组和鱼藤酮组[1、2、4 mg·(kg·d)^(-1)],各组分别干预28 d。实验前后分别记录大鼠体质... 目的探讨鱼藤酮对大鼠胸主动脉内皮细胞(RTAEC)自噬的影响及其初步机制。方法选用60只雄性SD大鼠,随机分为对照(Con)组、二甲基亚砜(DMSO)组和鱼藤酮组[1、2、4 mg·(kg·d)^(-1)],各组分别干预28 d。实验前后分别记录大鼠体质量、血压和心率;HE染色观察胸主动脉和心脏组织病理生理改变,透射电镜观察其超微结构及自噬小体发生。细胞实验分组:Con组、DMSO组和鱼藤酮组(20、100和500 nmol·L^(-1)),分别处理24 h,用活性氧(ROS)和三磷酸腺苷(ATP)水平筛选鱼藤酮干预最佳浓度后,选取500 nmol·L^(-1)进行后续干预。腺苷酸激活的蛋白激酶(AMPK)抑制剂化合物C(CC)在鱼藤酮处理前2 h干预细胞;RT-qPCR和Western blot检测胸主动脉自噬相关因子及腺苷酸激活的蛋白激酶-UNC-51样激酶1(AMPK-ULK1)通路的改变。结果与DMSO组相比,鱼藤酮组体质量增长量减少(P均<0.01);鱼藤酮对大鼠的血压和心率没有影响(P均>0.05);HE结果显示,鱼藤酮组胸主动脉内皮细胞伴有缺损,且心脏组织纤维排列紊乱、断裂;透射电镜结果发现,鱼藤酮组胸主动脉和心脏组织伴有结构异常及自噬小体出现;随着RTAEC鱼藤酮干预浓度增大,ROS产生水平增加(P<0.01),而ATP的生成减少(P<0.01);RT-qPCR结果显示,与DMSO组相比,LC3和P62的mRNA表达水平均上调(P均<0.01);信号通路相关因子AMPK和ULK1的mRNA表达水平均增加(P均<0.01);加入AMPK抑制剂CC,Western blot检测自噬相关蛋白,与500 nmol·L^(-1)组相比,LC3表达降低(P<0.01),P62表达上调(P<0.01);AMPK和p-AMPK表达减少(P均<0.01),AMPK的下游因子ULK1及p-ULK1表达均减少(P均<0.01)。结论鱼藤酮可促进RTAEC发生自噬,而其自噬机制可能是通过AMPK-ULK1信号通路介导。 展开更多
关键词 鱼藤酮 胸主动脉内皮细胞 腺苷酸激活的蛋白激酶-UNC-51样激酶1 自噬
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花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET抑制脂多糖诱导的内皮细胞凋亡 被引量:2
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作者 王勇 陈积雄 +1 位作者 杨仕林 汪道文 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2006年第3期140-144,共5页
目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物一表氧化二十碳三烯酸 (epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响。方法原代分... 目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物一表氧化二十碳三烯酸 (epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响。方法原代分离培养BAECs。分别在细胞培养基中加入 8,9-,11,12-,和14,15-EET1 h后,用LPS(100 ng/ml)诱导内皮细胞凋亡。用MTT法检测LPS对 BAECs的毒性作用,再通过细胞形态学(吖啶橙/溴化乙锭染色)和流式细胞仪计数检测其凋亡变化。结果LPS对BAECs的毒性作用呈剂量依赖性和时间依赖性。LPS可明显诱导BAECs凋亡,但8, 9-,11,12-,和14,15-EET干预的BAECs凋亡细胞数分别为(37.03±3.014)%、(33.45±7.918)%和 (35.75±7.858)%明显少于溶媒对照组(47.33±3.154)%。结论这些结果证明了花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs能明显的抑制LPS诱导的BAECs凋亡。这表明细胞色素P450 表氧化酶可能有保护心血管系统,防止其受到炎症损伤和粥样硬化的作用。 展开更多
关键词 牛主动脉内皮细胞 脂多糖 凋亡 表氧化二十碳三烯酸
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一种新的非Gal异种移植抗原——FAM234A的鉴定
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作者 谢崇伟 戴文杰 +2 位作者 张军方 蔡志明 牟丽莎 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期354-359,共6页
目的探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未... 目的探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未知抗原。采用流式细胞术测定PAEC表面结合的猴抗猪细胞抗体的平均荧光强度(MFI),用以表示PAEC表面抗原的含量。利用慢病毒介导的短发夹核糖核酸(shRNA)敲减PAEC中的FAM234A基因,检测该细胞结合的猴抗猪细胞抗体含量是否减少,以确定该基因是否为潜在的移植抗原。结果 PAEC中的非Gal抗原能够在猴体内引发大量的猴抗猪细胞抗体。在GTKO小型猪的PAEC中用shRNA敲减FAM234A基因后,PAEC结合的猴IgG抗体减少。结论 FAM234A是一种新的非Gal异种移植抗原。 展开更多
关键词 异种移植 非Gal抗原 主动脉内皮细胞(PAEC) FAM234A 食蟹猴 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO) 流式细胞术 短发夹核糖核酸(shRNA) 基因敲减 巴马小型猪 五指山小型猪 慢病毒
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慢性间隙性缺氧中氧化应激对血管内皮的影响 被引量:1
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作者 李洁 李兵 +1 位作者 杨湘 莫海兰 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期411-413,共3页
目的:制作可应用于常压慢性间隙性缺氧(CIH)研究的动物模型,探讨CIH大鼠模型中氧化应激指标与主动脉内皮细胞损伤的关系。方法:24只SD大鼠随机分为空白对照组(正常饲养4周,UC组)、CIH组(CIH 4周)和复氧组(CIH 4周后复氧4周,RH组),每组8... 目的:制作可应用于常压慢性间隙性缺氧(CIH)研究的动物模型,探讨CIH大鼠模型中氧化应激指标与主动脉内皮细胞损伤的关系。方法:24只SD大鼠随机分为空白对照组(正常饲养4周,UC组)、CIH组(CIH 4周)和复氧组(CIH 4周后复氧4周,RH组),每组8只。实验结束后测定大鼠血清中氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧歧化物(SOD)、NO的水平。处死大鼠取出腹主动脉,光镜下观察主动脉内皮细胞形态及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达情况。结果:CIH组SOD、NO较UC组均明显降低,而MDA显著升高(均P<0.05);大鼠腹主动脉内皮形态改变,eNOS表达减弱,明显低于UC组。RH组、UC组SOD、NO及MDA比较,差异无统计学意义(均P>0.05);2组大鼠腹主动脉内皮形态均未见明显改变,eNOS的表达比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:大鼠CIH模型中氧化应激参与了主动脉的病变过程。 展开更多
关键词 慢性间隙性缺氧 氧化应激 主动脉内皮细胞
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光果甘草定对ox-LDL损伤性人主动脉内皮细胞保护的机制研究 被引量:3
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作者 谭春江 吴岩斌 +1 位作者 林如辉 陈文列 《中医药学报》 CAS 2014年第2期16-19,共4页
目的:探讨光果甘草定(Glabridin,GD)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤性的细胞中自噬(autophagy)的影响。方法:采用体外培养人主动脉内皮细胞(HAVEC),经不同浓度GD预处理或不预处理,再行ox-LDL干预作对比。MTT法检测细胞活性、透射电... 目的:探讨光果甘草定(Glabridin,GD)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤性的细胞中自噬(autophagy)的影响。方法:采用体外培养人主动脉内皮细胞(HAVEC),经不同浓度GD预处理或不预处理,再行ox-LDL干预作对比。MTT法检测细胞活性、透射电镜观察细胞中自噬小体,免疫印迹检自噬相关蛋白Beclin1和LC3在不同组别中的表达。结果:随ox-LDL浓度的增加,细胞活性,细胞中自噬小体和Beclin1和LC3的表达比空白对照组明显增加(P<0.05)。经GD预处理的HAVEC,细胞活性,自噬小体和Beclin1和LC3的表达比未经GD预处理细胞组明显降低(P<0.05)。结论:ox-LDL能浓度依赖性地诱导HAVEC自噬性死亡,GD通过部分抑制自噬相关因子,保护血管内皮细胞。 展开更多
关键词 光果甘草定 人主动脉内皮细胞 自噬ox-LDL损伤
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猪动脉内皮细胞胞膜小窝的电子断层三维结构分析 被引量:1
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作者 孙书锋 张凯 +3 位作者 徐伟 王刚 陈建军 孙飞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期729-735,共7页
利用电子断层三维重构技术对猪动脉内皮细胞(porcine aorta endothelial cell,PAEcell)胞膜小窝的三维结构进行了初步研究,发现胞膜小窝在细胞膜表面呈不均匀分布并在局部形成聚集,胞膜小窝膜内外表面都由宽度约14~16nm的条纹状结构所... 利用电子断层三维重构技术对猪动脉内皮细胞(porcine aorta endothelial cell,PAEcell)胞膜小窝的三维结构进行了初步研究,发现胞膜小窝在细胞膜表面呈不均匀分布并在局部形成聚集,胞膜小窝膜内外表面都由宽度约14~16nm的条纹状结构所环绕,推测该条纹状结构主要由小窝蛋白和胆固醇构成,狭窄的胞膜小窝颈部区域存在高密度的丝状结构.三维结构显示胞膜小窝与纤维丝体网络(推测为微管网络)相互作用,暗示了细胞内吞可能的运输途径. 展开更多
关键词 猪动脉内皮细胞(PAE cell) 胞膜小窝 三维结构 电子断层术
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