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新型血管生成抑制人内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子_(151)治疗胃癌的实验研究 被引量:9
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作者 李喆 方国恩 +5 位作者 闻兆章 华积德 曹贵松 毕建威 戚中田 潘卫 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期230-234,F003,共6页
目的 研究重组腺病毒表达的人内皮细胞抑制素 血管内皮细胞生长抑制因子151(hENDO VEGI151)融合蛋白对胃癌的抑制作用。方法 构建携带hENDO VEGI151融合基因的重组腺病毒载体 ,脂质体介导法包装重组腺病毒AdIL 3 /hENDO VEGI151。体... 目的 研究重组腺病毒表达的人内皮细胞抑制素 血管内皮细胞生长抑制因子151(hENDO VEGI151)融合蛋白对胃癌的抑制作用。方法 构建携带hENDO VEGI151融合基因的重组腺病毒载体 ,脂质体介导法包装重组腺病毒AdIL 3 /hENDO VEGI151。体外检测融合基因的表达及融合蛋白的生物学活性。应用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM )模型及荷人胃癌裸鼠模型 ,进一步观察融合蛋白对活体血管生成的影响和融合基因治疗活体胃癌的疗效。结果 用TCID50 法测定携带融合基因的重组腺病毒滴度为 4.2× 10 11TCID50 /ml;用聚合酶链反应 (PCR)、逆转录 (RT) PCR和免疫组织化学方法证实融合基因可被转导入SGC 790 1细胞内并稳定高效地转录和表达 ;Westernblot显示融合蛋白可被分泌到胞外发挥作用 ;融合蛋白可强烈抑制ECV 3 0 4细胞生长及鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成。AdIL 3 /hENDO VEGI151治疗可强烈抑制裸鼠体内种植瘤生长 ,明显下调肿瘤微血管密度 ,促进胃癌细胞凋亡。结论 hENDO VEGI151是一条新型强效的肿瘤血管生成抑制基因 ,其表达产物可能通过作用于肿瘤新生血管形成的不同环节强烈抑制新血管生成和肿瘤生长 ,值得进一步研究。 展开更多
关键词 治疗 融合基因 胃癌 人内皮细胞 融合蛋白 血管内皮细胞 重组腺病毒 VEGI 生长抑制因子 血管生成抑制
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血管内皮生长因子抑制剂治疗肾癌的研究进展 被引量:4
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作者 纪潇朗 刘巍 《现代药物与临床》 CAS 2010年第4期247-251,共5页
散发性肾透明细胞癌中存在凡黑普尔-林道基因的突变,肾癌细胞的生长主要依赖血管内皮生长因子(VEGF),因此,以VEGF为靶点的药物广泛应用于肾癌的临床治疗。重组性单克隆抗体(如贝伐单抗)和与VEGF受体相结合的小分子抑制剂(如舒尼替尼、... 散发性肾透明细胞癌中存在凡黑普尔-林道基因的突变,肾癌细胞的生长主要依赖血管内皮生长因子(VEGF),因此,以VEGF为靶点的药物广泛应用于肾癌的临床治疗。重组性单克隆抗体(如贝伐单抗)和与VEGF受体相结合的小分子抑制剂(如舒尼替尼、索拉非尼、阿西替尼、帕唑帕尼、瓦他拉尼)临床疗效已得到了验证,表现出较高的应答率、无进展生存时间的延长并提高了肾癌患者总生存率。就VEGF抑制剂的作用靶点、机制、治疗后患者敏感性以及临床试验等做一简要综述,为抗肿瘤药物研发提供思路。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 肾癌 酪氨酸激酶抑制剂 凡黑普尔一林道基因 低氧诱导因子
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靶向血管内皮生长因子siRNA对K562细胞凋亡及survivin表达的影响 被引量:2
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《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期825-828,共4页
目的应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)siRNA沉默K562细胞中VEGF的表达.观察其对K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法应用成功构建的携带特异性VEGF siRNA的重组腺病毒(Ad5-VEGF siRNA)感染K562细胞,实验分... 目的应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)siRNA沉默K562细胞中VEGF的表达.观察其对K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法应用成功构建的携带特异性VEGF siRNA的重组腺病毒(Ad5-VEGF siRNA)感染K562细胞,实验分为3组:实验组(K562/Ad5-VEGF siRNA组)、空载体组(K562/Ad5组)、对照组(K562组)。通过RT—PCR法检测细胞内VEGF及survivin mRNA的表达,EHSA法检测细胞培养上清中VEGF蛋白表达,Western blot法检测细胞survivin蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果实验组细胞VEGF及survivin mRNA表达水平较对照组均有明显降低(P〈0.01),且细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平[(1121±15)pg/ml]低于空载体组[(1290±28)pg/ml]和对照组[(1303±28)pg/ml](P〈0.01)。Western blot法检测结果显示,实验组survivin蛋白表达水平(0.26±0.11)较对照组(0.74±0.10)也显著降低(P〈0.01)。实验组细胞凋亡率与对照组比较明显增加(P〈0.01)。结论应用RNA干扰沉默K562细胞中VEGF基因表达后,survivin的表达也随之降低.同时细胞凋亡率相应增加。VEGF可诱导K562细胞中survivin基因表达.可能是survivin基因表表的上游调控因子。 展开更多
关键词 RNA干扰 血管内皮生长因子 细胞凋亡 K562细胞
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不同浓度重组人pcDNA4-VEGI基因对角膜新生血管的抑制作用 被引量:2
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作者 王冰 王利华 钟启文 《眼科新进展》 CAS 2008年第7期516-519,共4页
目的探讨不同浓度的重组人pcDNA4-血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelia growth inhibitor,VEGI)基因转移对角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法角膜缝线法制作兔角膜新生血管模型,用结膜下注射的... 目的探讨不同浓度的重组人pcDNA4-血管内皮细胞生长抑制因子(vascular endothelia growth inhibitor,VEGI)基因转移对角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用。方法角膜缝线法制作兔角膜新生血管模型,用结膜下注射的方法将阳离子脂质体包裹的VEGIDNA(剂量分别为10μL、20μL、30μL、40μL)重组质粒(pcD-NA4-VEGI)转染入兔角膜,观察其对CNV的抑制作用。结果基因DNA剂量为10μL时VEGI对CNV的抑制作用不明显,20μL和30μL2种剂量时VEGI作用显著,40μL时作用反而降低。结论阳离子脂质体能够成功介导重组人VEGI基因转染入角膜组织并使之成功分泌VEGI蛋白,20μL时即可对CNV起到较强抑制作用。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长抑制因子 阳离子脂质体 基因治疗 角膜新生血管
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人血管内皮生长因子165和人组织基质金属蛋白酶抑制剂1基因过表达对心肌梗死大鼠的作用
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作者 宋衍秋 毛用敏 +5 位作者 耿华 张莹 师莹 任珉 徐美林 郭志刚 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期293-300,共8页
目的探讨携带人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165, VEGF165)的重组腺病毒(Ad-hVEGF165)和携带人组织基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1, TIMP-1)的重组腺病毒(Ad-hTIMP-1)对... 目的探讨携带人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165, VEGF165)的重组腺病毒(Ad-hVEGF165)和携带人组织基质金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1, TIMP-1)的重组腺病毒(Ad-hTIMP-1)对心肌梗死大鼠的作用及可能机制。方法健康雄性清洁级8周龄Wistar大鼠30只,采用随机数字表法随机分为5组,假手术组(Sham),空载病毒对照组(Ad-Track),Ad-hVEGF165组,Ad-hTIMP-1和双基因组(hVEGF165+hTIMP-1),每组6只。除Sham组外,各组大鼠均结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,以心电图出现ST段弓背抬高,Q波或T波倒置,局部心肌变白为模型成功。分别在心肌梗死区域四点注射相应重组腺病毒病毒生理盐水稀释液100 μL(1×1010 VP/100 μL);Sham组未予任何处理。4周后实验动物完成超声心动图检测后处死取心脏组织。免疫组织化学检测大鼠心肌组织hVEGF165和hTIMP-1基因表达;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织凋亡相关因子mRNA表达;免疫组织化学检测各组大鼠心肌组织凋亡相关因子蛋白表达。正态分布计量资料多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果超声心动图检测结果显示:Ad-Track组心率(heart rate,HR)(480.83±24.09)次/min、左室舒张末径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)(6.88±0.44)mm、左室收缩末径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)(4.85±0.42)mm均较Sham组(433.16±17.86)次/min、(6.20±0.45)mm、(4.06±0.70),增加(P<0.05),左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)(62.70±3.17)、左室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)(29.52±1.88)%均较Sham组(72.78±5.44)%、(37.20±4.71)%显著降低(P<0.01);hVEGF165-hTIMP-1组LVEF(71.50±6.23)%、LVFS(36.17±5.27)%均显著高于Ad-Track组(P<0.01),LVEDD(6.22±0.39)mm、LVESD(4.13±0.23)mm均低于Ad-Track组(P<0.05);hVEGF165-hTIMP-1组LVEF、LVFS均高于Ad-hVEGF165组(64.65±4.00)%� 展开更多
关键词 心肌梗死 细胞凋亡 血管内皮生长因子165 组织基质金属蛋白酶抑制剂1 基因治疗
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高纯度可溶性嵌合蛋白VEGI^+的表达纯化
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作者 丁莉莉 魏锐利 +1 位作者 蔡季平 李由 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1324-1328,共5页
目的:制备纯化的新型血管生长抑制剂可溶性嵌合蛋白VEGI^+。为进一步研究其活性奠定基础。方法:应用PCR方法制备血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)与寡肽CTTHWGFTLC相嵌合的融合基因VEGI^+,将PCR产物克隆至pGEM- T载体中,经酶切及测序鉴定... 目的:制备纯化的新型血管生长抑制剂可溶性嵌合蛋白VEGI^+。为进一步研究其活性奠定基础。方法:应用PCR方法制备血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI)与寡肽CTTHWGFTLC相嵌合的融合基因VEGI^+,将PCR产物克隆至pGEM- T载体中,经酶切及测序鉴定后,与原核表达载体pET30a(+)重组,构建重组表达载体pET30a-VEGI^+,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,纯化并鉴定表达产物。结果:成功扩增融合基因VEGI^+,构建的重组质粒pET30a-VEGI^+酶切鉴定结果与预期一致,诱导后表达产物以包涵体为主。SDS-PAGE电泳及Western印迹结果表明,复性纯化后的嵌合蛋白VEGI^+相对分子质量约为23000,纯度约为90%。结论:成功构建了重组表达载体,并在大肠杆菌诱导表达,亲和层析纯化后获得纯度较高的可溶性嵌合蛋白VEGI^+。 展开更多
关键词 血管内皮生长抑制因子 寡肽类 基因融合
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血管内皮细胞生长抑制因子VEGI_(151)重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用 被引量:5
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作者 柳林 刘银萍 +4 位作者 潘欣 孙琰 徐琪 沈炜 刘志勇 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第3期245-248,共4页
目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用。方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,WesternBlot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测Ad... 目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用。方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,WesternBlot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测AdVEGI151对ECV304细胞的抑制作用,缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗。结果VEGI151重组腺病毒在病变细胞内能成功表达相对分子质量为17300的蛋白,体外实验表明,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长,体内实验表明,重组腺病毒对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用。结论以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞抑制因子VEGI151基因治疗角膜新生血管效果显著,为角膜新生血管的基因治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长抑制因子 基因治疗 腺病毒载体 角膜新生血管
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Ad-VEGI_(151)对人脐静脉内皮细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 刘银萍 柳林 +2 位作者 潘欣 徐琪 潘东艳 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1006-1008,共3页
目的:研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子基因(VEGI151)对静脉内皮细胞的增殖抑制作用。方法:利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western印迹法检测病变细胞内基因的蛋白质... 目的:研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子基因(VEGI151)对静脉内皮细胞的增殖抑制作用。方法:利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western印迹法检测病变细胞内基因的蛋白质表达。X-gal染色测定重组腺病毒载体系统的基因转移效率,结晶紫染色法检测细胞D570/630值,观察Ad-VEGI151对ECV304细胞增殖抑制作用的效果,免疫组织化学检测ECV304细胞内VEGI151基因的蛋白质表达。结果:应用细胞内质粒DNA同源重组法,将脂质体介导质粒pCA13-VEGI151与pJM17共转染293A细胞制备重组腺病毒,所获病毒滴度高,是一种制备重组腺病毒切实可行的方法。Ad-VEGI151在病变细胞内能成功表达蛋白,具有较高的基因转移效率,对静脉内皮细胞的增殖具有强烈的抑制作用,并能在靶细胞内表达有生物学活性的蛋白质。结论:以复制缺陷型重组腺病毒为载体的VEGI151基因能在靶细胞内表达具有生物学活性的蛋白质,抑制体外静脉内皮细胞的增殖,这为进一步肿瘤及新生血管性疾病的基因治疗提供了新的方法。 展开更多
关键词 血管内皮细胞生长抑制因子 基因治疗 腺病毒载体
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