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多肽的表面展示与结构库 被引量：12
1
作者 朱圣庚 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期534-544,共11页
表面展示是一种新的基因操作技术，它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面，保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽（蛋白质）的性质、相互识别和作用，并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构... 表面展示是一种新的基因操作技术，它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面，保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽（蛋白质）的性质、相互识别和作用，并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构。常用丝状噬菌体、Ｔ４噬菌体、λ噬菌体以及细胞构建表面展示系统。表面展示库包括重组噬菌体抗体库、随机短肽库、多肽构象库、ｃＤＮＡ展示库和基因突变体展示库。表面展示技术可用于人工抗体和疫苗的制备、抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离、细胞表面工程的研究、多肽药物的研制。 展开更多
关键词 表面展示结构库 多肽 亲和选择 蛋白质 基因操纵
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杆状病毒表达载体的应用现状 被引量：15
2
作者 唐琦 邱立鹏 +2 位作者 李东 吴鹏 李国辉 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期442-450,共9页
杆状病毒是一类具有囊膜的双链环状DNA病毒,主要感染无脊椎动物,在病毒生活周期中会产生两种不同形态的病毒粒子:出芽型病毒粒子(BV),主要负责细胞之间的感染;包埋型病毒粒子(ODV),主要负责虫体之间的感染。随着对杆状病毒研究的不断深... 杆状病毒是一类具有囊膜的双链环状DNA病毒,主要感染无脊椎动物,在病毒生活周期中会产生两种不同形态的病毒粒子:出芽型病毒粒子(BV),主要负责细胞之间的感染;包埋型病毒粒子(ODV),主要负责虫体之间的感染。随着对杆状病毒研究的不断深入,人们对杆状病毒的应用也越来越广泛,通过对病毒基因组的改造使其成为一种新颖的真核表达载体,现已被广泛应用于蛋白生产中;其次,由于杆状病毒特有的形态,可将靶蛋白展示在病毒粒子表面,进而被应用于诸如医药、临床和生物等多个研究领域中;此外,杆状病毒不能在哺乳动物细胞中进行复制,也不会在这类细胞中增殖和扩散。因此,杆状病毒不会刺激哺乳动物产生强烈的免疫应答,也不会对它们造成功能性的损伤,这些特性使其成为一种极具应用前景的基因治疗载体,给肿瘤治疗、组织再生和靶向给药等民生领域带来福音。本文就杆状病毒在蛋白表达、表面展示和基因治疗方面的研究进行综述,为杆状病毒的分子改造和临床应用提供依据。 展开更多
关键词 杆状病毒 表面展示 蛋白固定 基因治疗
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细菌病毒——噬菌体的应用概况 被引量：10
3
作者 刘明河 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期56-57,61,共3页
噬菌体是细菌病毒 ,它分裂细菌细胞可获取胞内物质 ,可改造做基因工程载体 ;噬菌体表面展示技术广泛应用于疾病诊断、特异性抗体及蛋白药物生产等。
关键词 Λ噬菌体 基因工程载体 表面展示技术
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利用a凝集素在酿酒酵母表面展示解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2 被引量：10
4
作者 刘文山 徐莉 +2 位作者 赵鹤云 杨江科 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1543-1548,共6页
【目的】将解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母表面,构建全细胞催化剂。【方法】采用PCR方法扩增得到解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2成熟肽编码基因LIP2,将其连接到AGA2基因的下游构建表面展示载体pCTLIP2。分别以橄榄油、三丁酸甘... 【目的】将解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母表面,构建全细胞催化剂。【方法】采用PCR方法扩增得到解脂耶氏酵母胞外脂肪酶Lip2成熟肽编码基因LIP2,将其连接到AGA2基因的下游构建表面展示载体pCTLIP2。分别以橄榄油、三丁酸甘油酯和对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测展示的脂肪酶酶活。在此基础上,对野生菌及工程菌的酶学性质进行比较。【结果】展示Lip2的酿酒酵母重组菌株在半乳糖的诱导下,表现出水解橄榄油、三丁酸甘油脂以及pNPP的活性,20℃诱导72h时酶活达到最高,为182U/g干细胞。对展示的Lip2的酶学性质研究表明,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,温度稳定性比自由酶有所提高,50℃温浴4h后残余酶活为其最大酶活的23.2%。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其水解C8,C12,C16对硝基苯酚酯活性相近,均远高于对硝基苯酚丁酸酯(C4)的水解酶活。【结论】对于Lip2,a凝集素系统是一个有效的展示系统,利用该系统成功将Lip2展示在酿酒酵母表面,从而构建了酿酒酵母全细胞催化剂,该全细胞催化剂具有良好的潜在应用前景。 展开更多
关键词 脂肪酶 解脂耶氏酵母 酿酒酵母 表面展示
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枯草芽孢杆菌芽孢表面展示重组抗原疫苗研究进展 被引量：9
5
作者 张柯 宁德刚 徐卫东 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期134-137,共4页
枯草芽孢杆菌芽孢所具有的独特的理化特性及生理特征,使之成为新型的蛋白或酶类药物载体而倍受关注。简介了枯草芽孢杆菌芽孢结构特征,以及诱导机体产生的免疫反应,重点阐述了利用芽孢表面展示技术研制重组外源抗原疫苗,最后对芽孢表面... 枯草芽孢杆菌芽孢所具有的独特的理化特性及生理特征,使之成为新型的蛋白或酶类药物载体而倍受关注。简介了枯草芽孢杆菌芽孢结构特征,以及诱导机体产生的免疫反应,重点阐述了利用芽孢表面展示技术研制重组外源抗原疫苗,最后对芽孢表面展示外源抗原疫苗的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 芽孢 表面展示 重组疫苗
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酵母细胞表面展示系统的研究进展及其应用 被引量：9
6
作者 叶波 林影 韩双艳 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期53-58,共6页
酵母表达体系不但有原核表达体系的特点,同时具有真核细胞翻译后蛋白加工修饰的过程,因此,以酵母为基础的表面展示体系在诸多展示系统中有独特的优势。将酶,抗原,抗体和六聚组氨酸等不同蛋白和多肽展示在酵母细胞表面,可实现各种各样的... 酵母表达体系不但有原核表达体系的特点,同时具有真核细胞翻译后蛋白加工修饰的过程,因此,以酵母为基础的表面展示体系在诸多展示系统中有独特的优势。将酶,抗原,抗体和六聚组氨酸等不同蛋白和多肽展示在酵母细胞表面,可实现各种各样的用途。本文主要概述了酵母细胞展示的理论基础、展示体系类型及应用研究的进展。 展开更多
关键词 酿酒酵母 表面展示 GPI 凝集素 絮凝素
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酵母表面展示技术及应用 被引量：6
7
作者 贾帅争 孙红琰 王全立 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2001年第2期140-142,共3页
酵母表面展示是近年发展的一种新的蛋白表面展示技术 ,能够展示需糖基化作用、二硫键异构化等翻译后修饰才具功能活性的复杂真核蛋白。本文介绍了该技术的基本原理、研究进程、筛选方法。
关键词 酵母菌 表面展示 糖基化 噬菌体
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环糊精葡萄糖基转移酶的酿酒酵母表面展示及其生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸 被引量：6
8
作者 熊艳军 宿玲恰 +2 位作者 王蕾 吴敬 陈晟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1305-1313,共9页
【目的】将环状芽孢杆菌251(Bacillus circulans 251)来源的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin Glycosyltransferase,CGTase)展示在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞表面,构建全细胞催化剂生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸(2... 【目的】将环状芽孢杆菌251(Bacillus circulans 251)来源的环糊精葡萄糖基转移酶(Cyclodextrin Glycosyltransferase,CGTase)展示在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞表面,构建全细胞催化剂生产2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸(2-O-α-D-glucopyranosyl-L-ascorbic acid,AA-2G),以提高AA-2G的产量。【方法】将CGTase编码基因cgt连接到载体质粒p YD1中的a凝集素(a-agglutinin)Aga2p亚基基因的下游构建表面展示重组质粒p YD1-cgt,转化酿酒酵母EBY100获得重组菌EBY100-p YD1-cgt,对发酵条件(培养基、诱导温度和诱导剂半乳糖浓度)进行优化;同时先后对重组菌的发酵产酶以及表面展示CGTase的酶促合成AA-2G的条件进行了优化;进一步又比较了表面展示的CGTase与E.coli BL21发酵所得的游离CGTase在酶促制备AA-2G过程中副产物的积累情况。【结果】展示CGTase的酿酒酵母重组菌株以YPG培养基作为发酵培养基,诱导剂半乳糖初始添加浓度为20 g/L,经25℃诱导48 h后,表面展示CGTase最大酶产量为0.5 U/m L;表面展示CGTase 40℃条件下的温度稳定性比游离酶有所提高,p H稳定范围变宽。对表面展示的CGTase制备AA-2G转化条件的优化发现,其最适温度最适p H分别为30℃和4.5,转化48 h达到平衡,表面展示的CGTase制备AA-2G的产量较游离酶提高了37%。【结论】对于CGTase,a凝集素系统是一个有效的展示系统,构建的酿酒酵母全细胞催化剂用于酶促制备AA-2G时,产生的副产物葡萄糖可能被酵母细胞利用,从而降低了葡萄糖与VC的竞争作用使AA-2G的产量增加,该全细胞催化剂具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 酿酒酵母 表面展示 2-O-α-D-吡喃葡萄糖基抗坏血酸
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肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建 被引量：6
9
作者 高荣凯 张兆山 +1 位作者 李淑琴 黄翠芬 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期485-488,共4页
目的　构建大肠杆菌CS3菌毛呈现载体 ,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法　通过对CS3亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析 ,确定外源表位的插入位点 ,重叠延伸PCR方法进行定点突变 ,将口蹄疫病毒VP1插入到CS3中以... 目的　构建大肠杆菌CS3菌毛呈现载体 ,实现外源表位在细菌表面的呈现。方法　通过对CS3亚基蛋白二级结构、抗原表位、亲水性及柔韧性的预测分析 ,确定外源表位的插入位点 ,重叠延伸PCR方法进行定点突变 ,将口蹄疫病毒VP1插入到CS3中以验证表面呈现能力 ;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果　在大肠杆菌CS3的 136位氨基酸残基后突变插入BamHⅠ酶切点构建成呈现载体 ,全细胞ELISA、电镜和免疫电镜观察等均表明外源表位在大肠杆菌表面得到了表达 ,而且可诱发机体产生针对CS3和外源表位的双重免疫应答。结论　该大肠杆菌CS3菌毛呈现载体可以实现外源表位的表面呈现 ,可望成为研制基因工程活菌疫苗的表达载体。 展开更多
关键词 肠毒素性大扬杆菌 CS3菌毛 抗原表位 表面呈现
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乳酸菌β甘露聚糖酶研究进展 被引量：6
10
作者 季海蕊 张鑫 +1 位作者 姜静 赵丹 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2021年第4期325-329,336,共6页
β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶(glycoside hydrolases,GH)家族,广泛存在于植物、动物和微生物中,主要水解产物为甘露低聚糖(mannan-oligosaccharides,MOS)。微生物来源的甘露聚糖酶种类多且活性高,但大部分安全性低,其中乳酸菌(lactic ac... β-甘露聚糖酶属于糖苷水解酶(glycoside hydrolases,GH)家族,广泛存在于植物、动物和微生物中,主要水解产物为甘露低聚糖(mannan-oligosaccharides,MOS)。微生物来源的甘露聚糖酶种类多且活性高,但大部分安全性低,其中乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)甘露聚糖酶具有纯化步骤少、易于提取、安全性高等优点,能够满足食品级工业生产的需求,因此在保健品、饲料、饮料生产等工业中有重要应用前景。本文介绍了天然LAB甘露聚糖酶的产酶条件、分离纯化和酶学特性,简述了近年来甘露聚糖酶的LAB重组表达及其在果汁澄清和制备益生元MOS方面的应用,为LAB甘露聚糖酶的基础研究和开发提供参考和依据。 展开更多
关键词 乳酸菌 Β-甘露聚糖酶 酶学性质 异源表达 应用 表面展示
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猪细小病毒VP2蛋白在干酪乳杆菌表面的表达 被引量：5
11
作者 徐义刚 崔丽春 +6 位作者 马广鹏 唐丽杰 葛俊伟 夏春丽 乔薪媛 赵丽丽 李一经 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期315-318,共4页
将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在MRS培养基中... 将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,SDS-PAGE检测表明,有约74kD蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western-blot结果分析表明,表达的蛋白可被鼠源PPV抗血清所识别,间接免疫荧光实验结果表明,所表达的蛋白能够在干酪乳杆菌菌体表面检测到。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 干酪乳杆菌 表面表达
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疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的表面展示及酶学性质 被引量：6
12
作者 代敏 纪昌涛 +4 位作者 汪小锋 智晓燕 邵化 徐莉 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期857-865,共9页
【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细... 【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p为锚定蛋白,构建表面展示载体pPICZαA-TLS。重组载体经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母GS115中,经三丁酸甘油酯平板检测及摇甁发酵筛选获得高酶活力的毕赤酵母重组子,采用抗FLAG标签一抗和R-PE荧光素标记的二抗处理细胞后,进行荧光显微镜检测和流式细胞仪分析,并考察全细胞催化剂的最适反应温度和pH、金属离子耐受性等酶学性质。【结果】成功构建TLL毕赤酵母细胞表面展示体系,筛选到1株具有三丁酸甘油酯和橄榄油水解活力的克隆子,经1%的甲醇诱导发酵120 h后,水解橄榄油酶活力达257.8 U/g干细胞。经抗体处理后的重组菌发酵细胞在荧光显微镜下呈现强烈的红色荧光,流式细胞仪分析结果也证实脂肪酶被成功展示在酵母细胞表面,展示率达98.36%。展示的TLL作为全细胞催化剂水解对硝基苯酚丁酸酯(pNPB)的最适温度为30℃,最适pH为8.0,且具备良好的热稳定性和有机溶剂耐受性;K+、Ca2+、Mg2+对其有微弱的激活作用,Mn2+、Ni2+则有微弱的抑制作用,Cu2+的抑制作用较强,而EDTA、SDS、Tween 20对酶活力影响不明显。【结论】首次将TLL脂肪酶成功展示在毕赤酵母细胞表面,获得具有较高水解活力和良好酶学特性的全细胞催化剂,为表面展示TLL脂肪酶的规模化应用奠定了技术基础。 展开更多
关键词 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶 毕赤酵母 表面展示 全细胞催化剂 酶学性质
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基于细菌表面展示技术的猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病二联亚单位疫苗的小鼠保护效果评价 被引量：5
13
作者 赵谦 龚俊 +3 位作者 栾天 徐盛奎 李刚 王春来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期58-64,共7页
为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护效果,本研究在应用融合PCR构建副猪嗜血杆菌(HPS)保护性抗原AfuA-OppA2和CdtB-OppA基因的串联序列基础上,将其分别插入pMD-28a-INP-His表面展示质粒,并将猪链球菌(SS... 为评价猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护效果,本研究在应用融合PCR构建副猪嗜血杆菌(HPS)保护性抗原AfuA-OppA2和CdtB-OppA基因的串联序列基础上,将其分别插入pMD-28a-INP-His表面展示质粒,并将猪链球菌(SS)保护性抗原MRP、SLY基因也分别克隆至该表面展示质粒,构建pMD-INP-CdtB-OppA、pMD-INP-AfuA-OppA2、pMD-INP-MRP、pMD-INP-SLY 4种重组质粒,分别转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达,使重组蛋白AfuA-OppA2、CdtB-OppA、MRP、SLY分别展示于E.coli BL21(DE3)的菌体表面。将灭活后的4种重组大肠杆菌按等质量比混合并添加ISA 201佐剂乳化制成表面展示二联亚单位疫苗,间隔14 d两次免疫KM小鼠,另设含rAfuA、rOppA2、rCdtB、rOppA、rMRP、rSLY的纯化蛋白亚单位疫苗免疫组、副猪嗜血杆菌-猪链球菌(HPS-SS)灭活疫苗免疫组和PBS对照组,二次免疫后的小鼠血清通过ELISA检测相应抗体和细胞因子水平。随后用HPS血清5型HN10株、血清13型ZD12株和SS血清2型M126株和血清9型GZ2株进行攻毒。结果显示:表面展示二联亚单位疫苗刺激小鼠产生的抗体和细胞因子水平与纯化蛋白亚单位疫苗组相当。用副猪嗜血杆菌5型和13型菌株分别攻毒后,表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护率均为80%,其对HPS 5型菌株攻毒的小鼠保护率低于纯化蛋白亚单位疫苗(90%),但对HPS 13型菌株攻毒小鼠的保护率高于纯化蛋白亚单位疫苗(60%),且均优于HPS-SS灭活苗(80%和60%)。用SS 2型和9型菌株分别攻毒后,表面展示二联亚单位疫苗对小鼠的保护率为50%和80%,低于纯化蛋白亚单位疫苗的保护效果(100%和80%),优于HPS-SS灭活苗(50%和60%)。以上结果表明,基于表面展示技术的猪链球菌病-副猪嗜血杆菌病二联亚单位疫苗能刺激机体产生相应的抗体,其对HPS血清5型、13型和SS血清2型、9型菌株的攻击均能提供良好的交叉保护,保护效果优于HPS-S 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌病 猪链球菌病 表面展示 小鼠免疫效力评价
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表面展示SARS-CoV-2抗原蛋白乳酸乳球菌工程菌的构建 被引量：1
14
作者 王佳莹 张祖朔 +3 位作者 陈佰胜 王丹丹 于飞 檀建新 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期83-90,共8页
利用乳酸菌表达系统构建表达抗原蛋白的工程菌是探讨抗原应用的重要手段之一。本研究利用融合PCR技术将信号肽-细胞壁锚定蛋白结构域序列(Usp45-3LysM)分别与绿色荧光蛋白(GFP)、Omicron变异株上S1蛋白的受体结合位点结构域(RBD)序列融... 利用乳酸菌表达系统构建表达抗原蛋白的工程菌是探讨抗原应用的重要手段之一。本研究利用融合PCR技术将信号肽-细胞壁锚定蛋白结构域序列(Usp45-3LysM)分别与绿色荧光蛋白(GFP)、Omicron变异株上S1蛋白的受体结合位点结构域(RBD)序列融合,构建表达载体pNZ8149-GFP、pNZ8149-2RBD、pNZ8149-3RBD,转化乳酸乳球菌NZ3900(Lactococcus lactis NZ3900)构建了GFP、2RBD、3RBD表面展示工程菌菌株。结果表明工程菌受Nisin诱导表达GFP的最佳浓度和时间分别为20 ng/mL和20 h。蛋白质免疫印迹法(Western blot)和间接免疫荧光检测结果证明,3种目的蛋白都成功表达并展示于工程菌的细胞壁上,表明表面展示SARS-CoV-2抗原蛋白乳酸乳球菌工程菌已构建成功。本研究为新冠病毒或其他动物病毒的新型乳酸菌口服疫苗的研制及其相关产品的研发打下基础。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 Omicron变异株 RBD结构域 表面展示
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蜡样芽胞杆菌YSQ08碱性蛋白酶aprA基因在毕赤酵母中的表达 被引量：5
15
作者 黄东彦 Shanti Mazu +2 位作者 朱辉 朱剑锋 胡文锋 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2016年第12期105-112,共8页
从蛇消化道内容物分离出的一株产角蛋白酶菌株为蜡样芽孢杆菌YSQ08。通过分析Bacillus cereus ATCC 14579的基因组和蛋白酶家族,对比分析蜡样芽孢杆菌YSQ08纯化角蛋白酶的酶活特性,确定碱性蛋白酶aprA基因(1194 bp)为目标角蛋白酶。为... 从蛇消化道内容物分离出的一株产角蛋白酶菌株为蜡样芽孢杆菌YSQ08。通过分析Bacillus cereus ATCC 14579的基因组和蛋白酶家族,对比分析蜡样芽孢杆菌YSQ08纯化角蛋白酶的酶活特性,确定碱性蛋白酶aprA基因(1194 bp)为目标角蛋白酶。为深入研究角蛋白酶的潜在能力,对蜡样芽孢杆菌YSQ08碱性蛋白酶aprA基因在毕赤酵母X33上进行克隆、表达和优化重组。结果其10倍浓缩的角蛋白酶酶活达到122.60 U/mL。经优化后的aprA基因在表面展示重组酵母中得到高效表达,并且具有较高的角蛋白酶活性,酶活最高可达到295.78 U/g干细胞重。酶学性质分析结果表明,表面展示表达的重组aprA蛋白酶性质与天然型相比具有更高的热稳定性,最适反应温度为55℃,最适pH为8.0。Fe^(2+)可显著提高重组蛋白的酶活性,最高可达329.08%。表面展示表达的重组角蛋白酶可作为全细胞固定化催化剂,具有更好的热稳定性并能降低酶的纯化回收成本。 展开更多
关键词 角蛋白酶 aprA 蜡样芽胞杆菌 表面展示 毕赤酵母
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镉结合蛋白CADR在莱茵衣藻细胞表面的展示及应用 被引量：1
16
作者 廖谭聪 叶莲 +3 位作者 林轶文 龙欢 张宝龙 黄开耀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期3689-3704,共16页
在检测和修复环境中重金属如镉污染时,藻类被证实具有作为高效生物吸附材料的潜力。本研究旨在利用细胞表面展示技术在莱茵衣藻细胞壁表达镉结合蛋白CADR,提高衣藻对镉的吸附性能。首先,采用golden gate技术构建转化载体PET-X-CADR,通... 在检测和修复环境中重金属如镉污染时,藻类被证实具有作为高效生物吸附材料的潜力。本研究旨在利用细胞表面展示技术在莱茵衣藻细胞壁表达镉结合蛋白CADR,提高衣藻对镉的吸附性能。首先,采用golden gate技术构建转化载体PET-X-CADR,通过细胞壁蛋白GP1将CADR锚定至细胞壁。同时利用融合标签YFP的荧光信号进行高通量筛选,得到3株CADR蛋白高表达且定位于细胞壁的工程藻株。生理实验结果表明,细胞壁展示CADR蛋白并不影响工程藻株在低于200μmol/L镉浓度下的生长;在200μmol/L镉浓度下,CADR工程藻株的生长速度是野生型的3倍,表明CADR工程藻株对镉有更高的耐受性。运用配子型裂解酶GLE处理藻细胞分离野生型和工程藻株细胞壁,并比较其中镉的含量,结果显示工程藻株的细胞壁对镉吸附能力提升了33%。本研究为利用藻类治理环境中镉污染特别是从环境中回收重金属提供了新的思路。 展开更多
关键词 生物吸附 镉胁迫 golden gate 细胞表面展示
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利用枯草芽孢衣壳蛋白表面展示β-半乳糖苷酶 被引量：5
17
作者 王贺 杨瑞金 +2 位作者 华霄 赵伟 张文斌 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1-5,共5页
分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)芽孢衣壳蛋白CotB、CotC、CotG和CotX的启动子和编码序列与来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus IAM11001)的β-半乳糖苷酶基因bgaB进行重组,构建融合表达cotB-bgaB、cotC-bgaB... 分别将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)芽孢衣壳蛋白CotB、CotC、CotG和CotX的启动子和编码序列与来自嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus IAM11001)的β-半乳糖苷酶基因bgaB进行重组,构建融合表达cotB-bgaB、cotC-bgaB、cotG-bgaB和cotX-bgaB的整合型重组质粒。将4种重组质粒分别转入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168(trp-),获得了能在芽孢表面展示的重组菌株PB701、PB702、PB703和PB704。经Western blot检测,4种重组菌株均表达了预期分子量的融合蛋白,初步表明β-半乳糖苷酶被锚定在重组菌株的芽孢表面。以oNPG为底物测定4种重组菌株芽孢表面展示β-半乳糖苷酶的水解能力,得到的酶活分别为0.14、0.06、0.22和0.20 U/mL。 展开更多
关键词 芽孢 表面展示 Β-半乳糖苷酶 WESTERN BLOT
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基于冰核蛋白的乳酸菌表面展示系统的构建 被引量：4
18
作者 张秋香 侯慧丽 +2 位作者 芦颖 陈卫 钟瑾 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期397-402,共6页
【目的】验证来源于丁香假单胞菌的冰核蛋白在乳酸乳球菌表面展示外源蛋白的可能性。【方法】以绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因gfp为报告基因,以冰核蛋白基因的N末端和NC端作为展示单元,构建乳酸菌表面展示载体pHZ10... 【目的】验证来源于丁香假单胞菌的冰核蛋白在乳酸乳球菌表面展示外源蛋白的可能性。【方法】以绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因gfp为报告基因,以冰核蛋白基因的N末端和NC端作为展示单元,构建乳酸菌表面展示载体pHZ101和pHZ102,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)JM109和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MG1363。【结果】荧光显微镜观察显示重组大肠杆菌和乳酸乳球菌均能检测到绿色荧光。Western blot结果表明GFP蛋白在重组大肠杆菌和乳酸乳球菌中均得到表达,并且INPN-GFP蛋白多数滞留于乳酸乳球菌细胞质内,而INPNC-GFP蛋白则大部分定位于乳酸乳球菌的细胞膜上。【结论】以上结果表明丁香假单胞菌的冰核蛋白能引导外源蛋白定位于乳酸乳球菌的细胞膜上,为乳酸菌表面展示系统的构建提供了新的方向。 展开更多
关键词 冰核蛋白 表面展示 乳酸菌 绿色荧光蛋白
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利用冰核蛋白N末端结构域在大肠杆菌表面展示粘质沙雷氏菌脂肪酶 被引量：4
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作者 陶站华 张搏 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期318-325,共8页
【目的】利用细胞表面工程技术将活性脂肪酶展示于大肠杆菌细胞表面并对展示脂肪酶的酶学性质进行研究。【方法】将丁香假单胞菌冰核蛋白N末端结构域序列与粘质沙雷氏菌脂肪酶编码基因融合,构建成脂肪酶表面展示载体,并转化大肠杆菌BL21... 【目的】利用细胞表面工程技术将活性脂肪酶展示于大肠杆菌细胞表面并对展示脂肪酶的酶学性质进行研究。【方法】将丁香假单胞菌冰核蛋白N末端结构域序列与粘质沙雷氏菌脂肪酶编码基因融合,构建成脂肪酶表面展示载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】重组菌以终浓度0.05 mmol/L异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、25°C条件下诱导培养,16 h后表面展示脂肪酶活力达到最大值1 852 U/g细胞干重。表面展示酶的最适pH为9.0,最适反应温度为40°C,表面展示酶热稳定性较游离酶有较大提高,在40°C孵育1 h后仍能保持90%以上的酶活力。【结论】以上结果表明细菌表面展示技术为脂肪酶固定提供了一个很有前景的替代方法。 展开更多
关键词 表面展示 脂肪酶 粘质沙雷氏菌 大肠杆菌
原文传递
乳酸乳球菌表面展示表达系统的构建及其鉴定 被引量：2
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作者 谷贵章 宋达峰 顾青 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第6期17-21,共5页
目的：旨在构建一个将抗原靶向于乳酸乳球菌细胞表面的表达系统。方法：运用PCR技术从金黄色葡萄球菌基因组中克隆出蛋白A（SPA）C-末端544个碱基对的锚定域序列（Spax）。通过酶切、连接将Spax构建入分泌型质粒pAMJ399形成携有整合外... 目的：旨在构建一个将抗原靶向于乳酸乳球菌细胞表面的表达系统。方法：运用PCR技术从金黄色葡萄球菌基因组中克隆出蛋白A（SPA）C-末端544个碱基对的锚定域序列（Spax）。通过酶切、连接将Spax构建入分泌型质粒pAMJ399形成携有整合外源基因位点BglⅡ的pAMJ400质粒。将报告蛋白一绿色荧光蛋白的基因（Gfp）插入载体pAMJ400的整合位点产生模式质粒pAMJ401并电转化其于乳酸乳球菌MG1363。绘制转化子MGI363（pAMJ401）生长曲线确认诱导期。调节pH值（6．0-6．5）诱导转化子并在荧光显微镜下观察杂合蛋白（GFP：SPAX）的表达情况。结果：在395nm的蓝色激发光下，诱导后的细菌发出较明亮的绿色荧光，而未诱导的细菌几乎不产生荧光。结论：成功地构建了乳酸乳球菌表面展示表达系统，此系统可以作为口服活菌疫菌研究的可行性操作平台。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 表达系统 展示表达
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