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老化豚鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞定量研究 被引量：27
1
作者 方耀云 姚行齐 +3 位作者 姜泗长 王沛英 孙建和 李玉 《中国体视学与图像分析》 1996年第1期64-67,共4页
本文对3～3.5年老化豚鼠进行毛细胞和螺旋神经节细胞定量研究,并与1.5月龄青年豚鼠比较。结果表明:老化豚鼠外毛细胞损失率明显高于青年组（P<0.01）,而内毛细胞损失率无明显差异。外毛细胞损失率OHC3>OHC2>OHC1。顶回和底回... 本文对3～3.5年老化豚鼠进行毛细胞和螺旋神经节细胞定量研究,并与1.5月龄青年豚鼠比较。结果表明:老化豚鼠外毛细胞损失率明显高于青年组（P<0.01）,而内毛细胞损失率无明显差异。外毛细胞损失率OHC3>OHC2>OHC1。顶回和底回螺旋神经节细胞分别减少15％和19.81％。耳蜗中轴PAS染色,螺旋神经节细胞内大量脂褐素Lp增加,柯替氏器不同程度退变,血管纹及螺旋韧带萎缩程度轻,耳蜗神经纤维减少,但胶质细胞增加。讨论了老化豚鼠形态变化对听功能的影响。 展开更多
关键词 老化 毛细胞 螺旋神经节 脂褐素
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顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡 被引量：18
2
作者 许辉杰 黄魏宁 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期98-100,I002,共4页
目的　探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法　对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 1... 目的　探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法　对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果　连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和Corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。 展开更多
关键词 顺铂 沙鼠 耳蜗 螺旋神经节 神经元 CORTI器 细胞凋亡 脱噬作用 原位缺口末端标记
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碱性成纤维细胞生长因子对耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠毒性作用的影响 被引量：12
3
作者 王大君 韩东一 +1 位作者 杨伟炎 姜泗长 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 1998年第3期165-168,共4页
目的了解谷氨酸钠致单离培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤后，碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对其生存及生长的影响，以及二者对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法在培养液中加入２×１０２ｍｏｌ／Ｌ的谷氨酸钠２小时后，... 目的了解谷氨酸钠致单离培养的小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤后，碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对其生存及生长的影响，以及二者对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法在培养液中加入２×１０２ｍｏｌ／Ｌ的谷氨酸钠２小时后，实验组分别换成含ｂＦＧＦ２５、５０、１００μｇ／Ｌ的培养液，对照组加空白培养液。结果２４小时后可见部分细胞裂解、死亡，对照组明显多于实验组。培养１４天后甲苯胺蓝染色证实，实验组的细胞生存数及细胞突起长度明显高于对照组，差异有显著性（Ｆ检验，Ｐ＜０．０１），且随着ｂＦＧＦ浓度增加，细胞生存数及细胞突起长度均增加，不同浓度实验组间差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。用Ｆｌｕｏ３染色，激光扫描共聚焦显微镜观察１０个螺旋神经节细胞，培养液中加入谷氨酸钠后细胞内钙离子浓度迅速上升，在１０～１５秒内达峰值，１００秒左右恢复到正常水平；加入ｂＦＧＦ后细胞内钙离子浓度无明显变化（ｔ检验，Ｐ＝０．２０４）。结论谷氨酸钠可致螺旋神经节细胞内钙离子浓度升高，ｂＦＧＦ可以降低谷氨酸钠对螺旋神经节细胞的细胞毒性。 展开更多
关键词 耳蜗 螺旋神经节 成纤维细胞 生长因子 谷氨酸钠
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脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用 被引量：12
4
作者 翟所强 郭维 +2 位作者 胡吟燕 陈谦 汪家政 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期103-111,共9页
目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入... 目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入腺病毒携带BDNF(adenoviral mediatedBDNF ,ad BDNF) ,12只经圆窗注入ad LacZ ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中BDNF均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物表达弱。在 8周 ,注入ad BDNF组较ad LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验 ,P <0 0 1,差异有显著性。结论　腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达 ,在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。 展开更多
关键词 感音神经性聋 脑源神经营养因子 螺旋神经节 基因疗法
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螺旋神经节细胞无血清培养方法的研究 被引量：9
5
作者 罗凌惠 龚树生 +1 位作者 宋鹏 鄢开胜 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期177-179,共3页
目的:通过对比不同培养条件下螺旋神经节细胞(SGCs)的生长特性,从而确定一种可以获得足够数量和纯度的SGCs体外培养的最佳方法。方法:采用出生3d内的SD大鼠,取螺旋神经节组织,观察有血清培养基及无血清培养基,加或不加阿糖胞苷(Ara-C)... 目的:通过对比不同培养条件下螺旋神经节细胞(SGCs)的生长特性,从而确定一种可以获得足够数量和纯度的SGCs体外培养的最佳方法。方法:采用出生3d内的SD大鼠,取螺旋神经节组织,观察有血清培养基及无血清培养基,加或不加阿糖胞苷(Ara-C)对体外培养SGCs纯度及活性的影响。免疫组织化学鉴定培养的螺旋神经节细胞。结果:使用DMEM/F12培养基及B27添加剂,联合5μmol/L Ara-C作用48h,能有效抑制非神经细胞增殖,得到比较纯的SGCs。通过hochest33258及PI双标,发现Ara-C对SGCs毒性较小。得到的细胞经免疫组织化学抗神经丝蛋白抗体证实为SGCs。结论:本实验建立的方法,所获得的SGCs纯度较高,细胞活性保持良好,为体外研究外周听觉系统疾病提供了重要方法。 展开更多
关键词 螺旋神经节 神经元 细胞 培养的 原代培养
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豚鼠脑震荡后耳蜗功能及螺旋神经节细胞的病理变化研究 被引量：9
6
作者 路虹 李志玉 +2 位作者 韩海霞 张喜琴 张颖 《中华耳科学杂志》 CSCD 2008年第3期345-348,共4页
目的探讨脑震荡后耳蜗毛细胞功能以及螺旋神经节细胞的病理变化,为临床患者脑震荡后耳聋的诊治及法医学的鉴定提供一定的实验依据。方法选用听力正常的白毛红目豚鼠40只,雌雄不限,随机分为四组,分别为正常对照组、撞击后4周组、撞击后6... 目的探讨脑震荡后耳蜗毛细胞功能以及螺旋神经节细胞的病理变化,为临床患者脑震荡后耳聋的诊治及法医学的鉴定提供一定的实验依据。方法选用听力正常的白毛红目豚鼠40只,雌雄不限,随机分为四组,分别为正常对照组、撞击后4周组、撞击后6周组和撞击后8周组。应用听性脑干反应(ABR)和畸变产物耳声发射(DPOAE)测试四组动物的听力和耳蜗功能,应用透射电镜观察各组耳蜗螺旋神经节细胞的病理改变。结果ABR阈值:撞击后4周、6周、8周组分别与正常对照组阈值比较均提高,差异有统计学意义(P<0.05);DPOAE结果:撞击后4周组与正常对照组在频率0.5kHz、0.7kHz、1kHz、2kHz比较有差异(P<0.05);撞击后6周组与正常对照组仅在频率4kHz比较有差异(P<0.05);撞击后8周组与正常对照组只在频率1kHz比较有差异(P<0.05)。透射电镜发现实验各组螺旋神经节细胞有不同程度的受损,表现为线粒体肿胀,空泡样变,线粒体嵴消失或位于周边,粗面内质网扩张等。结论脑震荡伤后可以引起ABR、DPOAE的异常和耳蜗螺旋神经节细胞的损伤。 展开更多
关键词 脑震荡 耳蜗 螺旋神经节 听性脑干反应 畸变产物耳声发射 透射电镜
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顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响 被引量：8
7
作者 孙伟霞 王爱梅 +2 位作者 包翠芬 惠丽杰 常志杰 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期324-328,共5页
目的:建立小鼠顺铂(CDDP)耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测螺旋神经节细胞的凋亡;应用免疫组织化学Envision法检测cas... 目的:建立小鼠顺铂(CDDP)耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术检测螺旋神经节细胞的凋亡;应用免疫组织化学Envision法检测caspase-3在螺旋神经节中的表达;同时结合听脑干反应(ABR)测试,观察用药前后小鼠听力的变化。结果:不同剂量顺铂组小鼠体重和听力明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠耳蜗螺旋神经节中TUNEL阳性细胞数增多,以及caspase-3表达明显增强。结论:应用小鼠能建立可靠的顺铂耳毒性模型;顺铂可导致耳蜗螺旋神经节细胞凋亡,而且此凋亡过程中有caspase-3的参与,进一步证实了凋亡可能是顺铂耳毒性机制之一。 展开更多
关键词 顺铂 螺旋神经节 凋亡 CASPASE-3
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顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞毒性作用及机制 被引量：7
8
作者 路虹 杨逸 +3 位作者 徐鸥 张迪 韩海霞 于丽萍 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 2004年第6期355-357,共3页
目的通过透射电镜及免疫组化法观察顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞的毒性作用。方法16只豚鼠随机均分为2组。顺铂组连续5天腹腔注射顺铂2mg/kg/d;对照组连续5天腹腔注射生理盐水2mg/kg/d;用药前后测试听力,处死动物后制作耳蜗标本,透射电镜... 目的通过透射电镜及免疫组化法观察顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞的毒性作用。方法16只豚鼠随机均分为2组。顺铂组连续5天腹腔注射顺铂2mg/kg/d;对照组连续5天腹腔注射生理盐水2mg/kg/d;用药前后测试听力,处死动物后制作耳蜗标本,透射电镜观察及免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达。结果ABR:顺铂组听力下降明显,阈值显著升高(P<0.01)。透射电镜观察:顺铂组螺旋神经节细胞的细胞器损伤严重,核变形,线粒体肿胀,大量空泡样变,粗面内质网增多,有髓神经纤维的髓鞘增厚;对照组螺旋神经节细胞核无变形,核仁基本居中,线粒体结构正常。免疫组织化学显示:顺铂组螺旋神经节有iNOS阳性反应显色,灰度值降低,iNOS活性升高,与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论顺铂可致耳蜗螺旋神经节细胞损伤并呈iNOS阳性表达,导致听力下降。 展开更多
关键词 顺铂 螺旋神经节细胞 耳蜗 对照组 NOS 毒性作用 听力下降 免疫组化法 升高 腹腔注射
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神经营养素-3对豚鼠耳蜗传入神经元兴奋毒性损伤的保护作用 被引量：6
9
作者 张永全 蒋明 孙虹 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2005年第5期329-332,i0001,共5页
目的观察谷氨酸(glutamate,Glu)致豚鼠耳蜗Ⅰ型螺旋神经节细胞兴奋毒性损伤后,耳蜗局部应用神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对Ⅰ型螺旋神经节细胞的保护作用及对复合动作电位(CAP)反应阈的影响。方法28只豚鼠左耳安置圆窗电极检测CA... 目的观察谷氨酸(glutamate,Glu)致豚鼠耳蜗Ⅰ型螺旋神经节细胞兴奋毒性损伤后,耳蜗局部应用神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对Ⅰ型螺旋神经节细胞的保护作用及对复合动作电位(CAP)反应阈的影响。方法28只豚鼠左耳安置圆窗电极检测CAP的变化。然后分为NT-3组(实验组5只)、Glu组(实验对照组8只)、Hank’s液组(HBSS组)(正常对照组5只)、Blank组(空白对照组10只),前三组分别在药物灌注术后1天及4周测CAP反应阈,术后4周处死,Blank组术后1天测CAP反应阈后处死,观察Ⅰ型螺旋神经节细胞和神经纤维的显微和超微结构变化。结果NT-3组、Glu组术后1天CAP反应阈明显增高,NT-3组术后4周CAP反应阈明显降低,与HBSS组及Blank组比较均有显著性差异(P<0.01);术后4周NT-3组Ⅰ型螺旋神经节细胞数目的减少幅度明显小于Glu组(P<0.01),NT-3组与HBSS组和Blank组相比细胞数有显著差异(P<0.01)。HBSS组与Blank组相比,细胞数、CAP反应阈和组织学改变均无显著差异(P>0.05)。结论经外淋巴腔灌注谷氨酸能导致豚鼠耳蜗CAP反应阈提高和Ⅰ型螺旋神经节细胞死亡。耳蜗兴奋性损伤发生后60分钟,局部应用NT-3(15μgml)可减轻谷氨酸对耳蜗螺旋神经节细胞兴奋性毒性损伤,提示NT-3可用于神经性耳聋的治疗。 展开更多
关键词 神经营养素-3 谷氨酸 螺旋神经节 耳蜗 豚鼠
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阳离子脂质体介导小鼠原代螺旋神经节细胞NT-3基因转染的实验研究 被引量：7
10
作者 蒋明 张永全 +1 位作者 贺广湘 孙虹 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2006年第1期10-13,共4页
目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3,Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因... 目的通过阳离子脂质体携带构建的神经营养因子-3(NT-3,Neurotrophin-3)-绿色荧光蛋白基因(pEGFPC2)转染小鼠耳蜗原代培养的螺旋神经节细胞,观察NT-3-pEGFPC2的共表达及其对螺旋神经节细胞生长的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白报告基因的重组质粒-NT3 pEGFPC2,建立体外培养原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的方法,并用神经丝蛋白(NF200)单克隆抗体进行免疫组化染色鉴定。利用阳离子脂质体携带重组质粒瞬时转染原代小鼠耳蜗螺旋神经节细胞,观察转染后NT-3的表达及对螺旋神经节细胞生长数量的影响。结果成功培养了小鼠原代耳蜗螺旋神经节细胞。基因转染后24 h在荧光显微镜下观察到胞体及轴突发出绿色荧光的螺旋神经节细胞。用Western blot方法检测到相应NT-3蛋白表达。继续培养12 d后各组细胞数量均减少,但NT-3转染组细胞减少数量低于空载体组。结论阳离子脂质体可作为NT-3基因的载体。NT-3的基因转染对抑制耳蜗螺旋神经节细胞的退行性变有一定作用。 展开更多
关键词 螺旋神经节细胞 阳离子脂质体 神经营养因子-3 基因转染
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硫酸链霉素对豚鼠螺旋神经节细胞膜钙内流的影响 被引量：5
11
作者 李树华 韩东一 +1 位作者 杨伟炎 姜泗长 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期105-108,T004,共5页
目的　观察硫酸链霉素是否影响耳蜗螺旋神经节细胞 (spiralganglioncells,SGC)胞膜去极化时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)升高的能力 ,并观察这种影响在不同药物浓度下以及相同药物浓度对蜗轴不同部位的螺旋神经节细胞的作用的异同 ... 目的　观察硫酸链霉素是否影响耳蜗螺旋神经节细胞 (spiralganglioncells,SGC)胞膜去极化时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)升高的能力 ,并观察这种影响在不同药物浓度下以及相同药物浓度对蜗轴不同部位的螺旋神经节细胞的作用的异同 ,旨在深入探讨硫酸链霉素急性耳毒性的分子生物学机制。方法　豚鼠全身麻醉后断头活杀 ,酶 机械法分离获得单离的SGC。 10 μmol L的钙敏荧光探针Fluo 3 AM负载 30min后用ACASUltima型激光扫描共聚焦显微镜观察各种条件下SGC[Ca2 + ]i的动态变化。结果　①SGC[Ca2 + ]i在标准细胞外液灌流过程中保持稳定。② 15 0mmol L的高钾细胞外液灌流导致 12 14个细胞的 [Ca2 + ]i明显升高 ,而高钾无钙细胞外液灌流仅有 1 10个细胞[Ca2 + ]i 明显的升高。③经 1mmol L、0 .1mmol L、0 .0 1mmol L硫酸链霉素作用后 ,再灌流高钾细胞外液则分别有 0 9、6 14、7 13个细胞 [Ca2 + ]i 升高。④经 0 .0 2mmol L硫酸链霉素作用后 ,对来源于顶回和底回的SGC灌流高钾细胞外液分别有 5 10和 0 15个细胞 [Ca2 + ]i 升高。结论　高钾细胞外液灌流SGC[Ca2 + ]i 明显升高 ,钙升高的来源为细胞外钙离子的内流。硫酸链霉素可以阻断这种钙离子的内流 ,其阻断作用具有浓度和部位依赖性。 展开更多
关键词 螺旋神经节 链霉素 离子转运 耳毒性 豚鼠 钙内流 SGC
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碱性成纤维细胞生长因子对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠毒性损伤的保护作用 被引量：5
12
作者 魏佑震 申姜颖 +2 位作者 洪岸 郭玉臣 庞龙滨 《解剖学研究》 CAS 2002年第2期113-115,I004,共4页
目的　在体研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对谷氨酸钠所致豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞毒性损伤的拮抗作用。方法　谷氨酸钠组 :谷氨酸钠 2g·kg-1·d-1,ip× 18d ;bFGF组 :bFGF 80 0U·kg-1·d-1,ip ,谷氨酸钠 2g&#... 目的　在体研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对谷氨酸钠所致豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞毒性损伤的拮抗作用。方法　谷氨酸钠组 :谷氨酸钠 2g·kg-1·d-1,ip× 18d ;bFGF组 :bFGF 80 0U·kg-1·d-1,ip ,谷氨酸钠 2g·kg-1·d-1,ip× 18d。停止用药后耳廓反射粗略测定动物听觉水平 ,后取耳蜗 ,固定包埋、切片染色 ,光镜观察。结果　谷氨酸钠组表现为基底转与顶转几乎均匀一致的耳蜗螺旋神经节细胞的消失 ,平均细胞密度为 (1976 3± 10 18 9)个 /mm2 ,占正常的 4 5 % ;bFGF组细胞密度为 (384 0 9± 373 1)个 /mm2 ,约为正常组的 89%。经方差分析 ,F 检验 ,谷氨酸钠组与bFGF组比较 ,耳蜗螺旋神经节存活细胞密度差异显著 ,P <0 0 5。 展开更多
关键词 耳蜗 保护作用 碱性成纤维细胞生长因子 螺旋神经节 谷氨酸钠 耳神经损伤
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Mn-SOD在螺旋神经节区域分布差异与噪声性听力损伤的关系 被引量：6
13
作者 崔勇 何亚 +4 位作者 武瑾 米文娟 何端军 张力鸥 邱建华 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第1期107-111,共5页
目的探讨噪声暴露前后锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)在大鼠螺旋神经节不同区域表达分布的差异与噪声性聋高频听力易损性的相关性。方法 SD大鼠随机分为两组:实验组给予白噪声115dB2h3d造模,不处理者为对照组。ABR测听分析噪声损伤情况;免疫... 目的探讨噪声暴露前后锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)在大鼠螺旋神经节不同区域表达分布的差异与噪声性聋高频听力易损性的相关性。方法 SD大鼠随机分为两组:实验组给予白噪声115dB2h3d造模,不处理者为对照组。ABR测听分析噪声损伤情况;免疫组织化学染色法分析噪声暴露前后Mn-SOD在螺旋神经节不同区域的表达水平;黄嘌呤氧化酶法检测Mn-SOD在螺旋神经节不同区域的活性及变化趋势。结果①ABR:大鼠噪声暴露后与暴露前相比,4、8、16、20、32kHzABR阈值均明显上移,以高频听阈变化更为显著;②免疫组织化学染色:在正常情况下,顶部螺旋神经节的Mn-SOD的阳性表达较底部明显;噪声暴露后,Mn-SOD在螺旋神经节的表达较对照组相应部位均显著增高;且顶部较底部的表达增强更为显著;③Mn-SOD活性测定:在正常情况下,顶部螺旋神经节的Mn-SOD活性与底部相比无统计学差异,噪声暴露后,Mn-SOD活性较对照组相应部位均有下降,且底部较顶部更为显著。结论 Mn-SOD在螺旋神经节顶、底部区域的表达分布差异,可能是噪声性聋高频听力易损性的分子机制之一。 展开更多
关键词 噪声性聋 螺旋神经节 锰超氧化物歧化酶
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三组固定方式对应小鼠耳蜗组织染色效果的研究
14
作者 位格格 邱士伟 +3 位作者 熊巍 袁永一 聂卉一 戴朴 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第1期141-145,共5页
目的研究不同固定方式对耳蜗结构及细胞形态的影响、探索耳蜗内特定细胞类型的最佳固定方式,最大限度保存耳蜗不同细胞类型以及细胞内细胞器的形态结构,为生理和病理条件下的耳蜗细胞形态学研究提供一种更为个性化的免疫荧光染色方法。... 目的研究不同固定方式对耳蜗结构及细胞形态的影响、探索耳蜗内特定细胞类型的最佳固定方式,最大限度保存耳蜗不同细胞类型以及细胞内细胞器的形态结构,为生理和病理条件下的耳蜗细胞形态学研究提供一种更为个性化的免疫荧光染色方法。方法选择野生型C57BL/6小鼠9只,将小鼠随机分为一组、二组及三组,每组3只。一组采用0.9%氯化钠溶液+4%多聚甲醛(polyformaldehyde,PFA)心脏灌流、二组采用直接4%PFA心脏灌流、三组采用耳蜗4%PFA灌流。对3组固定后的耳蜗采用常规切片免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜在低倍镜、高倍镜以及超高分辨率等模式下观察并比较3组耳蜗内不同细胞和细胞内形态结构。结果3种染色方法在不同观察模式下均能清楚显示毛细胞、神经丝形态结构,3组毛细胞、神经丝形态结构比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血管纹区域在一组的固定方式下,其形态结构相比于其他两种固定方式保存的更为完整。结论3组耳蜗固定方式均可以用来研究Corti's器、螺旋神经节区域的形态结构,而一组的固定方式更适合用于研究血管纹区域内的细微结构。 展开更多
关键词 心脏灌流 耳蜗灌流 Corti's器 血管纹 螺旋神经节
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应用LsAB技术显示五羟色胺受体亚型1A在小鼠螺旋神经元上的分布 被引量：5
15
作者 李刚 唐玥玓 程薇波 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2007年第3期235-237,I0004,共4页
目的显示五羟色胺(serotonin,5-HT)受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。方法采用出生后3～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,应用酶标链亲和素-生物素(labeled streptavidin-biolin technique,LsAB)技术显示五羟色胺受体亚型1A在螺旋神经元上... 目的显示五羟色胺(serotonin,5-HT)受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。方法采用出生后3～6天的乳小鼠耳蜗进行冰冻切片,应用酶标链亲和素-生物素(labeled streptavidin-biolin technique,LsAB)技术显示五羟色胺受体亚型1A在螺旋神经元上的分布。结果实验组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜显示阳性信号,阴性对照组的乳鼠耳蜗螺旋神经元的细胞膜上未发现阳性信号。结论五羟色胺受体亚型1A存在于耳蜗螺旋神经元的细胞膜上,推测当毛细胞释放兴奋性神经递质引起螺旋神经元兴奋时,五羟色胺作为神经递质对螺旋神经元的听觉传导活动起着重要的调节作用。 展开更多
关键词 酶标链亲和素-生物素技术 五羟色胺受体亚型1A 耳蜗 螺旋神经元
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不同培养方法对螺旋神经元体外生长的影响 被引量：5
16
作者 史金凤 夏寅 +2 位作者 雷雳 王鸿 范尔钟 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2007年第1期48-50,共3页
目的观察不同培养条件下螺旋神经元体外生长情况,获得高纯度螺旋神经元培养物。方法利用酶消化法、剪切分离结合酶消化法对出生后3～5天的大鼠螺旋神经节进行分离,分别在血清培养基和神经元专用培养基内培养,观察神经元形态及生长情况,... 目的观察不同培养条件下螺旋神经元体外生长情况,获得高纯度螺旋神经元培养物。方法利用酶消化法、剪切分离结合酶消化法对出生后3～5天的大鼠螺旋神经节进行分离,分别在血清培养基和神经元专用培养基内培养,观察神经元形态及生长情况,并进行免疫组化鉴定。结果神经元专用培养基比含血清培养基能够得到纯度更高的神经元,且细胞形态良好,轴突再生能力强。结论酶消化结合剪切分离螺旋神经节,经神经元专用培养基培养,能获得高纯度的螺旋神经元。 展开更多
关键词 螺旋神经节 神经元 细胞培养
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急性缺氧对SD乳鼠耳蜗螺旋神经节细胞钾通道的影响 被引量：5
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作者 王艳萍 朱贺 +2 位作者 马克涛 司军强 李丽 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期823-828,共6页
目的探讨急性缺氧对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiralganglioncell，SGC）外向钾通道电流的影响。方法分离并酶解出生1～3dSprague Dawley（SD）大鼠SGC，37℃培养8h获得贴壁牢固的原代细胞，在室温条件下（22～25℃）通过多管灌流给药... 目的探讨急性缺氧对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiralganglioncell，SGC）外向钾通道电流的影响。方法分离并酶解出生1～3dSprague Dawley（SD）大鼠SGC，37℃培养8h获得贴壁牢固的原代细胞，在室温条件下（22～25℃）通过多管灌流给药系统持续给予无糖低氧灌流液（20％CO2和80％N2混合气体充分饱和，pH值6．5）5～15min，采用全细胞膜片钳技术记录SGC胞膜外向电流，并观察K＋通道阻断剂四乙胺（tetraethylammonium，TEA）和四氨基吡啶（4-AP）对电流的影响。结果乳鼠SGC激活的外向电流具有电压门控外向整流特性，主要包括对TEA敏感的大电导钙激活钾电流（BKCa）和对4-AP敏感的电压门控钾离子通道电流（Kv）。当钳制电压在-60mV时，急性缺氧能电压依赖性地增强SGC的外向电流，以增强0±60mV电压区间的激活电流为主，＋60mV时激活的电流幅度从（1160．0±129．1）pA增加到（2428．0±239．3）pA，差异具有统计学意义（n=9，P〈0．01）。预灌流TEA（1mmol／L）后，缺氧对SGC外向电流的增强作用明显减小，＋60mV激活电压时，TEA＋缺氧组与缺氧组相比，外向电流幅度从（2070．8±115．7）pA降低到（1062．6±30．9）pA，差异具有统计学意义（n=6，P〈0．05）。而预灌流4-AP（1mmol／L）后，缺氧对SGC外向电流的增强作用无明显改变（n=6，P〉0．05）。结论急性缺氧可能通过增强大鼠SGC的BK。引起K’外流，使细胞膜电位超极化，细胞兴奋性降低，影响SGC的兴奋传导功能。 展开更多
关键词 螺旋神经节 细胞低氧 大电导钙激活钾通道 钾通道 电压门控 膜片钳术 大鼠 SPRAGUE—DAWLEY
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人Bcl-2基因重组腺病毒的构建及其在螺旋神经节细胞中的表达 被引量：5
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作者 罗凌惠 龚树生 +2 位作者 宋鹏 鄢开胜 刘英鹏 《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期513-516,共4页
目的构建表达人Bcl2基因的重组腺病毒,并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiralganglioncells,SGC)的表达特性。方法采用细菌内同源重组法,从pUCCAGGS/Bcl2质粒中获得人Bcl2cDNA,克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV上,后者和腺病毒骨架质... 目的构建表达人Bcl2基因的重组腺病毒,并研究其在原代培养螺旋神经节细胞(spiralganglioncells,SGC)的表达特性。方法采用细菌内同源重组法,从pUCCAGGS/Bcl2质粒中获得人Bcl2cDNA,克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV上,后者和腺病毒骨架质粒pAdEasy1在细菌内同源重组,在HEK293细胞中包装成为重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl2腺病毒,电镜观察病毒颗粒,用病毒感染原代培养的大鼠螺旋神经节细胞,在荧光显微镜下观察感染效率,用逆转录聚合酶链反应方法检测Bcl2基因在螺旋神经节细胞的转录表达,用WesternBlot检测其蛋白的表达。结果经酶切鉴定证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在,呈规则六边形。荧光显微镜下观测到感染病毒的SGC细胞发出明亮的绿色荧光。分别在mRNA水平及蛋白水平证实有外源性Bcl2基因的表达。结论细菌内同源重组法是一种简便、高效的制备方法。构建的重组Ad增强型绿色荧光蛋白/Bcl2腺病毒能有效的感染SGC,并可在SGC中正确地转录和翻译,为进一步研究腺病毒介导的Bcl2基因对螺旋神经节损伤的保护作用奠定基础。 展开更多
关键词 螺旋神经节细胞 基因重组腺病毒 增强型绿色荧光蛋白 Bcl-2基因 细菌内同源重组法 HEK293细胞 聚合酶链反应方法 Western 螺旋神经节损伤 显微镜下观察 BLOT检测 mRNA水平 原代培养 病毒颗粒 cells 腺病毒介导 构建表达
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小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的研究 被引量：5
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作者 孙伟 丁大连 +3 位作者 金晓杰 Richard J Salvi 李兴启 于宁 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期178-182,I001,共6页
目的　了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法　采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果　采用出生后 0至 5d的C5 7BL/ 10J小鼠 (n =30 ) ,耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出 ... 目的　了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电压依赖性离子通道的特性。方法　采用耳蜗螺旋神经节细胞与耳蜗基底膜整体培养和膜片钳全细胞记录方法。结果　采用出生后 0至 5d的C5 7BL/ 10J小鼠 (n =30 ) ,耳蜗螺旋神经节细胞与基底膜一道取出 ,培养 8～ 48h后 ,基底膜内侧和周围散落的螺旋神经节细胞贴壁良好 ,便于进行生理学记录。螺旋神经节细胞根据在电流钳记录下有无动作电位来鉴别 ,健康的细胞在刺激电流的起始端和结束端均可记录到动作电位。细胞平均静息电位 ( x±s,下同 )为 (- 5 5± 5 )mV(n =39) ,平均动作电位幅度为 (- 6 1± 11)mV(n =31)。用电压钳方法在Hank液中可记录到快速的TTX敏感型内向钠电流和TEA、4-AP敏感型外向持续性钾电流 ,平均电流幅度 ( x±s,下同 )分别为 (- 2 .0± 1.1)nA(n =39)和 (3.0± 1.3)nA(n =39)。在含有高浓度钡离子的细胞外液中 ,阻断钾电流和钠电流后 ,可记录到幅度为 (- 1.0± 0 .7)nA(n =2 0 )的钙电流。部分细胞还记录到大约 2 0次 /s的自发性放电 (n =4) ,放电幅度约为 2nA。结论　新生小鼠 (小于 5d)螺旋神经节细胞可随基底膜一道从耳蜗中分离培养。培养 8～ 48h后的螺旋神经节细胞活性良好 ,便于进行生理学记录。达到全细胞记录状态后 ,大部分细胞可记录到动作? 展开更多
关键词 耳蜗 螺旋神经节 细胞培养 膜片钳术 电压依赖性离子通道
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新生豚鼠谷氨酸钠内耳螺旋神经节损伤模型 被引量：4
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作者 魏佑震 洪岸 +2 位作者 魏丽华 冯庆兴 孙波 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2002年第23期2164-2167,共4页
目的　研究谷氨酸钠不同用药剂量对新生豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞及听力损伤的程度 ,以探索稳定而可靠的谷氨酸钠耳聋模型 .方法　豚鼠随机分成 4组 ,每组 (G0 ,G1,G2 ,G4 )分别按 0 ,1,2 ,4g·kg- 1 ·d- 1 ,ip给予谷氨酸钠 (Glu... 目的　研究谷氨酸钠不同用药剂量对新生豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞及听力损伤的程度 ,以探索稳定而可靠的谷氨酸钠耳聋模型 .方法　豚鼠随机分成 4组 ,每组 (G0 ,G1,G2 ,G4 )分别按 0 ,1,2 ,4g·kg- 1 ·d- 1 ,ip给予谷氨酸钠 (Gluta mate ,G) ,连续 7d ,停药后饲养 35d .处死前测其耳廓反射以及脑干听觉诱发电位 .后取耳蜗 ,纵向石蜡切片 ,焦油紫染色 ,光镜观察 .结果　G0组死亡率为 0 10 ,听阈为 (43 5± 3 4 )dB ,平均细胞密度为 (4345 7± 2 4 1 4 )个·mm- 2 ;G1组死亡率为2 10 ,听阈为 (43 8± 9 4 )dB ,细胞密度为 (42 15 4± 2 95 2 )个·mm- 2 ;G2组死亡率为 4 10 ,听阈为 (6 7 3± 2 3 3)dB ,细胞密度为 (1997 5± 10 19 8)个·mm- 2 ;G4组死亡率为 2 0 2 0 .经方差分析 ,F检验 ,G2组与其他组比较 ,差异显著 ,P <0 0 1,GO组与G1组 ,差异无显著性 ,P >0 0 5 .结论　谷氨酸钠对新生豚鼠毒性损伤存在剂量依赖关系 ,2g·kg- 1 ·d- 1 ,ip可引起豚鼠均匀一致的耳蜗螺旋神经节细胞的消失 ,听力下降明显 ,死亡率较低 ,模型较为稳定 . 展开更多
关键词 豚鼠 谷氨酸钠 螺旋神经节损伤 新生儿
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