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甲胎蛋白启动子调控表达p53基因的肝癌细胞靶向性基因治疗载体的研究 被引量:9
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作者 程纪华 冷希圣 +5 位作者 彭吉润 何湘君 蔡胜利 张佑彬 王申五 杜如昱 《中华医学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期461-463,共3页
目的 利用含有人甲胎蛋白启动子的腺相关病毒载体 ,构建能在人肝癌细胞株中特异表达目的基因的质粒。方法 通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列并克隆到含有绿色荧光蛋白 ... 目的 利用含有人甲胎蛋白启动子的腺相关病毒载体 ,构建能在人肝癌细胞株中特异表达目的基因的质粒。方法 通过设计含有特定酶切位点的引物 ,选择性地从人基因组中扩增出人甲胎蛋白启动子 (AFPpromoter)序列并克隆到含有绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因的质粒pTR UF5上 ,构建成含报告基因的重组腺相关病毒质粒rAAV AFP GFP ;再通过平端连接的方法 ,构建成含p5 3基因的质粒rAAV AFP 5 3。通过用rAAV AFP GFP转染表达AFP的HepG2 细胞株和不表达AFP的 2 93细胞株 ,以检测AFP启动子的功能。rAAV AFP 5 3转染HLE肝癌细胞株后 ,用流式细胞分析检测对细胞周期的影响。结果 rAAV AFP GFP和经测序、酶切鉴定证实为含有人AFP启动子的质粒。细胞转染表明rAAV AFP GFP能特异地在AFP阳性细胞中高效表达目的基因 (质粒转染效率为 36 .5 % ) ;rAAV AFP 5 3使HLE的凋亡率达到 73 .88%。结论 成功构建了以腺相关病毒为载体、受人AFP启动子调控表达人野生型p5 3基因和报告基因的质粒。 展开更多
关键词 腺相关病毒 甲胎蛋白 启动子 基因治疗 肝癌
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5-羟色胺2C受体基因启动子区多态性与迟发性运动障碍的关联分析 被引量:7
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作者 张晓斌 张志珺 +3 位作者 侯钢 姚辉 张心保 沙维伟 《中华精神科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期198-201,共4页
目的 探讨 5 羟色胺 2C(5 HT2C)受体基因启动区 - 759C/T和 - 697G/C单碱基置换多态性与精神分裂症伴迟发性运动障碍 (TD)的相关性。方法 先用异常不自主运动量表 (AIMS)评定精神分裂症男性患者有无TD及其严重程度 ,再对 42例符合TD(A... 目的 探讨 5 羟色胺 2C(5 HT2C)受体基因启动区 - 759C/T和 - 697G/C单碱基置换多态性与精神分裂症伴迟发性运动障碍 (TD)的相关性。方法 先用异常不自主运动量表 (AIMS)评定精神分裂症男性患者有无TD及其严重程度 ,再对 42例符合TD(AIMS总分≥ 3分 )者和与TD组严格相匹配的 50例非TD者 ,采用简明精神病评定量表 (BPRS)评定精神症状 ,并应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性方法分析 5 HT2C受体基因的分布频率。结果  (1 )TD组的 - 697C(突变型 )半合子型频率 (38% )高于非TD组 (1 8% ;χ2 =4 7,P =0 0 3 ,OR =2 8)。TD组 - 759T(突变型 )半合子型频率和 - 759T/ - 697C突变型单倍体频率虽高于非TD组 ,但差异均无显著性 (χ2 值分别为 2 9和 4 9,P =0 0 9)。 (2 )TD组的AIMS和BPRS评分分别为 (6 5± 1 8)分和 (51 2± 7 8)分 ,非TD组分别为 0分和(50 0± 7 3)分 ,差异无显著性 (P >0 0 5)。结论  5 HT2C受体基因启动控制区的 - 展开更多
关键词 5-羟色胺2C受体 启动区 多态现象 迟发性运动障碍 精神分裂症 血清素 遗传学 抗精神病药 药物反应
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EB病毒相关胃癌及鼻咽癌组织病毒主要潜伏期基因启动子甲基化状态分析 被引量:6
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作者 张霞 刘霞 +3 位作者 荆永正 邢晓明 王云 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2010年第5期399-403,406,共6页
目的研究分析青岛地区EB病毒(EBV)相关胃癌及鼻咽癌组织中EBV主要潜伏期编码基因启动子甲基化状态。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢盐-基因组测序法(BGS),分析32例EBV相关胃癌及20例EBV阳性鼻咽癌标本中编码EBV核抗原EBNAs基... 目的研究分析青岛地区EB病毒(EBV)相关胃癌及鼻咽癌组织中EBV主要潜伏期编码基因启动子甲基化状态。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢盐-基因组测序法(BGS),分析32例EBV相关胃癌及20例EBV阳性鼻咽癌标本中编码EBV核抗原EBNAs基因的启动子Cp、Wp、Qp以及LMP1和LMP2A编码基因启动子的甲基化状态。结果 EBV相关胃癌及鼻咽癌肿瘤标本中EBV编码基因启动子的甲基化状态与肿瘤细胞的潜伏感染类型一致:Cp和Wp呈高甲基化状态,而Qp未发生甲基化;2种EBV阳性肿瘤标本中LMP1和LMP2A编码基因启动子甲基化状态有所不同,两者在EBV相关胃癌组织甲基化程度明显高于其在EBV阳性的鼻咽癌(χ2=19.15、11.01,P<0.01)。结论甲基化是调控EBV主要潜伏期基因启动子活动的重要机制之一。 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 胃肿瘤 鼻咽肿瘤 DNA甲基化 启动区(遗传学)
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弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1启动子的克隆及鉴定 被引量:1
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作者 安娜 张瑞岩 +3 位作者 赵志远 商立民 刘全 魏峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期602-604,共3页
目的克隆弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的启动子序列,为弓形虫基因操作提供工具。方法应用PCR方法扩增弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的5′非编码区、致密颗粒蛋白GRA2的3′编码区和红色荧光蛋白(RFP)基因,并构建重组质粒pMD/SAG-RFP-GRA... 目的克隆弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的启动子序列,为弓形虫基因操作提供工具。方法应用PCR方法扩增弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的5′非编码区、致密颗粒蛋白GRA2的3′编码区和红色荧光蛋白(RFP)基因,并构建重组质粒pMD/SAG-RFP-GRA,经电穿孔法将其转染弓形虫速殖子,倒置荧光显微镜观察RFP的表达。结果重组质粒pMD/SAG-RFP-GRA经双酶切和测序证明构建正确,质粒转染弓形虫速殖子24h,荧光显微镜下可观察到红色荧光,表明克隆的SAG1启动子具有转录活性。结论已成功克隆了弓形虫速殖子特异表达蛋白SAG1的启动子序列,并能介导外源基因在弓形虫体内的表达。 展开更多
关键词 弓形虫病 速殖子 启动区(遗传学) 克隆
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Association of HLA-DQB1 coding region with unexplained recurrent spontaneous abortion 被引量:8
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作者 汪希鹏 林其德 +2 位作者 陆佩华 马政文 赵爱民 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2004年第4期492-497,共6页
Background DNA analysis has shown a lack of significant compatibility between couples affected by unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) compared with normal fertile couples, 8 although one study that ma... Background DNA analysis has shown a lack of significant compatibility between couples affected by unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) compared with normal fertile couples, 8 although one study that made use of a PCR-sequence-specific oligonucleotide (SSO) method did observe evidence of significant compatibility in the HLA-DQA1 and DQB1 alleles between patients and aborted fetuses. 9 This study was designed to investigate whether URSA were associated with particular DQ alleles or promoter alleles.Methods Thirty-two patients with URSA and 54 women who had had at least one successful pregnancy were included in this study. HLA-DQ genotyping was performed by the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. The HLA-DQB1 promoter was detected by the SSO and sequence-specific primer (SSP) methods. The DQA1, DQB1, and DQB1 promoter (QBP) gene frequencies in the patients were compared with the gene frequencies in normal controls. The data were analyzed statistically with the χ 2 and Fisher’s exact tests.Results The results showed that the frequency of DQB1 *0604/0605 was significantly higher and the frequency of DQB1 *0501/0502 was significantly lower in the patient group as compared with the normal controls. In addition, the frequencies of the DQA1 *01-DQB1 *0604/0605 and QBP6.2-DQB1 *0604/0605 haplotypes were overrepresented in the patients relative to the controls. Our results did not show any differences between URSA patients and the controls with regard to DQA1 and QBP allele frequencies. Conclusions Our data suggest that URSA is associated with the HLA-DQB1 coding region, and is not associated with its upstream regulatory region. The DQB1 *0604/0605, DQA1 *01-DQB1 *0604/0605, and QBP6.2-DQB1 *0604/0605 haplotypes may confer susceptibility to URSA, while the DQB1 *0501/0502 allele may protect women from URSA. 展开更多
关键词 ABORTION spontaneous · HLA-DQB1 · open reading frames · promoter region (genetics)
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