巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略 被引量：17

1

作者 胡世界 罗素兰 +1 位作者 张吉贞 长孙东亭 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期78-83,共6页

毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达... 毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高水平表达 表达策略

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影响外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达和分泌的研究进展 被引量：7

2

作者 张丞斌 傅正伟 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第7期1382-1384,共3页

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的外源蛋白表达系统。但外源基因在该系统中表达时,由于受自身特性及环境等诸多因素的影响,在表达过程中出现表达量不够稳定或较低,甚至不表达的情况。本文对影响巴斯... 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的外源蛋白表达系统。但外源基因在该系统中表达时,由于受自身特性及环境等诸多因素的影响,在表达过程中出现表达量不够稳定或较低,甚至不表达的情况。本文对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析,并就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了简要的综述。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 基因表达

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酵母分子生物学理论及应用研究进展 被引量：3

3

作者 宋宏新 李敏康 《陕西科技大学学报（自然科学版）》 2001年第4期78-83,共6页

对酵母分子生物学从基础理论到在食品发酵工业中应用的研究进展进行了综述 ,阐述了酿洒酵母的基因组、基因表达特点以及基因操作技术 。

关键词 酿酒酵母 甲醇酵母 酵母分子生物学 基因表达系统 基因工程

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毕赤酵母高效表达外源蛋白的分子水平策略 被引量：5

4

作者 张欣然 凌焱 杨英 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第17期321-328,共8页

毕赤酵母表达系统具有许多优异特性,并且是目前最成功的外源蛋白表达系统之一。通过近几十年的快速发展,该系统已引起各界的广泛关注,并产生了巨大的经济和社会价值。与其他现有表达系统相比,毕赤酵母在目的蛋白翻译后修饰上有着极大优... 毕赤酵母表达系统具有许多优异特性,并且是目前最成功的外源蛋白表达系统之一。通过近几十年的快速发展,该系统已引起各界的广泛关注,并产生了巨大的经济和社会价值。与其他现有表达系统相比,毕赤酵母在目的蛋白翻译后修饰上有着极大优势,已被广泛应用于表达外源蛋白。但是另一方面,由于该系统受包括外源基因的特性、菌种、表达环境和发酵技术等多种因素的影响,,其在不同外源蛋白的表达上也表现出很大差异。该文着眼于分子水平上的基因转录、蛋白质加工、蛋白质降解以及转运分泌4个模块,介绍了利用毕赤酵母表达系统通过优化密码子、高拷贝数外源基因、引导肽筛选、敲除蛋白酶基因、共表达促折叠因子等途径提高外源蛋白表达效率的相关策略,并简要展望了该系统的发展前景,以期为构建高效毕赤酵母细胞工厂提供指导。 展开更多

关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高效表达 分子水平 外源蛋白

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α-mating factor在毕赤酵母中引导蛋白分泌表达研究进展

5

作者 林钰煊 黄义德 《生物技术》 CAS 2024年第1期102-107,共6页

毕赤酵母表达系统广泛用于外源蛋白分泌表达,如何提高外源蛋白的表达效率在毕赤酵母中的表达量是该系统的研究重点,分泌蛋白通过分泌途径的效率是限制外源蛋白表达的一个重要制约因素。α-mating factor信号序列常用于毕赤酵母中,酿酒... 毕赤酵母表达系统广泛用于外源蛋白分泌表达,如何提高外源蛋白的表达效率在毕赤酵母中的表达量是该系统的研究重点,分泌蛋白通过分泌途径的效率是限制外源蛋白表达的一个重要制约因素。α-mating factor信号序列常用于毕赤酵母中,酿酒酵母α-mating factor信号序列是毕赤酵母表达系统应用最早的一条信号序列,可引导大部分蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,同时存在其他物种的α-mating factor信号序列能够在毕赤酵母中引导蛋白分泌表达。基于α-mating factor信号序列在毕赤酵母表达系统中的重要性,该文系统阐述了其在毕赤酵母中的研究进展,并描述了其结构和功能特点,提出了分析与思考,对α-mating factor信号序列的未来研究进行展望。 展开更多

关键词 毕赤酵母 酿酒酵母 α-mating factor 信号肽 酵母表达系统 外源蛋白 分泌表达 信号序列

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抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较 被引量：3

6

作者 胡立强 郑文 +3 位作者 钟艺 杜丹 杨浩 龚萌 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期14-20,共7页

RC28蛋白是从野生蕈类皱盖罗鳞伞中分离得到的新型抗病毒蛋白。前期通过3'-RACE方法,从皱盖罗鳞伞总RNA中克隆获得包含RC28编码区的c DNA,并通过TA克隆获得质粒p MD18-T-RC28。以该质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增RC28片段,分别... RC28蛋白是从野生蕈类皱盖罗鳞伞中分离得到的新型抗病毒蛋白。前期通过3'-RACE方法,从皱盖罗鳞伞总RNA中克隆获得包含RC28编码区的c DNA,并通过TA克隆获得质粒p MD18-T-RC28。以该质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增RC28片段,分别插入大肠杆菌表达载体p ET28a(+)和毕赤酵母表达载体p PIC9K中,形成在N端表达组氨酸标签的重组RC28表达粒体。将这两种RC28表达质粒转化各自的宿主菌后,筛选阳性克隆,构建稳定表达体系。诱导表达后,用SDS-PAGE电泳和Western blot分析RC28的表达情况。放大表达体系后用Ni-NTA柱纯化获得RC28蛋白,并用MTT法测试重组表达蛋白质的抗病毒活性。在实验条件下,大肠杆菌和毕赤酵母中均能表达可溶性重组RC28,纯化后蛋白质得率分别是3.5mg/L发酵液及0.2mg/L发酵液。但抗病毒活性实验表明,大肠杆菌体系表达的RC28蛋白活性较差,而毕赤酵母系统表达的RC28蛋白的抗病毒活性与天然蛋白接近。 展开更多

关键词 大肠杆菌 毕赤酵母 表达纯化 抗病毒RC28

原文传递

抑瘤素M在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量：2

7

作者 路萍 吕星 邢瑞云 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2001年第1期39-41,74,共4页

目的 :构建抑瘤素M (oncostatinM ,OSM)的酵母表达体系。方法 :将人OSMcDNA连入pPIC9K酵母表达载体 ,转染毕赤酵母 (Pichiapastoris) ,用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子 ,用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定酵母转化... 目的 :构建抑瘤素M (oncostatinM ,OSM)的酵母表达体系。方法 :将人OSMcDNA连入pPIC9K酵母表达载体 ,转染毕赤酵母 (Pichiapastoris) ,用MD和MM营养缺陷型培养基筛选具有正确表型的重组转化子 ,用RNA印迹法和蛋白质印迹法鉴定酵母转化菌株中OSMmRNA转录和OSM相对分子质量。MTT法鉴定OSM蛋白对人黑素瘤细胞生长的抑制活性。结果 :构建的毕赤酵母体系可实现人OSM分泌表达 ,表达量占外分泌蛋白的 70 %以上。表达蛋白相对分子质量约 30 0 0 0 ,对黑素瘤细胞生长可产生明显抑制作用。结论 :OSM的酵母分泌表达体系表达量可观 ,表达蛋白集中于培养液上清 ,便于纯化 ,是日后进行OSM大规模制备的可行途径。 展开更多

关键词 抑瘤素M 毕赤酵母 酵母表达体系 活性鉴定 肿瘤抑制作用

原文传递

重组人肝素酶在毕赤酵母中的表达

8

作者 刘至玄 高红伟 +2 位作者 田曙光 章扬培 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期423-425,共3页

目的:建立肝素酶表达系统,大量制备人肝素酶,用于肝素酶的深入研究,及其抑制剂筛选模型的建立。方法:采用RT-PCR方法从肝癌细胞HepG2中克隆肝素酶全长cDNA,转入毕赤酵母表达体系,经甲醇诱导表达。结果:四唑蓝活性检测结果表明,表达产物... 目的:建立肝素酶表达系统,大量制备人肝素酶,用于肝素酶的深入研究,及其抑制剂筛选模型的建立。方法:采用RT-PCR方法从肝癌细胞HepG2中克隆肝素酶全长cDNA,转入毕赤酵母表达体系,经甲醇诱导表达。结果:四唑蓝活性检测结果表明,表达产物具有肝素酶活性;Western印迹证实表达产物可被肝素酶抗体识别。结论:表达产物中含具有肝素酶活性的重组人肝素酶。 展开更多

关键词 人肝素酶 毕赤酵母 蛋白表达

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抗菌肽牛乳铁多肽素(LfcinB)在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量：15

9

作者 易俊波 黄德新 +1 位作者 李凌云 林枫 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期265-269,共5页

利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastors)系统表达抗菌肽——牛乳铁多肽素(bovine lactoferricin,简称Lf-cinB),获得的分泌型表达产物具有较强的抗菌活性。首先将人工合成的LfcinB基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得... 利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastors)系统表达抗菌肽——牛乳铁多肽素(bovine lactoferricin,简称Lf-cinB),获得的分泌型表达产物具有较强的抗菌活性。首先将人工合成的LfcinB基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组质粒pPIC9K-LfcinB通过限制性内切酶SalⅠ酶切线性化,经电穿孔法转化入毕赤酵母细胞SMD1168内。G418抗性筛选,得到高拷贝转化子,经PCR检测LfcinB基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinB。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽素基因已经整合到酵母细胞基因组中并获得表达,表达产物具有较强的杀菌作用。 展开更多

关键词 牛乳铁多肽素(LfcinB) 基因 表达载体 毕赤酵母表达系统

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提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的研究进展 被引量：5

10

作者 肖生科 王磊 陈毓荃 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第2期23-26,30,共5页

巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,... 巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,由于受基因内部的结构、分泌信号、甲醇诱导的浓度及诱导时间、培养温度、启动子、表达环境的 pH值等诸多因素的影响 ,一些外源蛋白的表达也存在着表达不够稳定、表达量较低 ,甚至不表达的情况。对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析 ,结合具体实践经验 ,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了综述。 展开更多

关键词 外源基因 巴斯德毕赤酵母 表达量 基因工程 真核表达系统 表达产物

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牛乳铁蛋白多肽的合成及抗菌活性试验 被引量：5

11

作者 史芳芳 王亮 +1 位作者 吕自力 王安江 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期20-23,共4页

用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽LfcinB基因片段。合成片段与酵母表达载体pPICZαA重组,构建胞外分泌表达载体pPICZαA-LfcinB,通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母X-33宿主菌,Zeocin抗性筛选,经PCR检... 用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽LfcinB基因片段。合成片段与酵母表达载体pPICZαA重组,构建胞外分泌表达载体pPICZαA-LfcinB,通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母X-33宿主菌,Zeocin抗性筛选,经PCR检测LfcinB基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinB,诱导表达6 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽基因已整合到酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较高抗菌活性的抗菌肽,表达产物具有较强杀菌作用。 展开更多

关键词 牛乳铁多肽(LfcinB) 毕赤酵母表达系统 抗菌活性

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胰岛素原基因的高效分泌表达系统——甲醇酵母Pichia pastoris 被引量：1

12

作者 吴颖 钱凯先 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1091-1095,共5页

为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水... 为了提高重组人胰岛素的表达效率,使用了近年发展起来的真核表达系统-甲醇酵母Pichia pastoris. Pichia pastoris以甲醇为其惟一碳源,而乙醇氧化酶基因的启动子是强启动子,可用来调控异源蛋白的表达.该系统具有操作技术简单,可进行高水平的胞内或胞外表达,及对表达产物进行翻译后修饰与加工等显著优点.将含有小C肽或不含有C肽的人胰岛素原类似物基因整合到酵母基因组上来发酵生产人胰岛素原,在表达量上,每升发酵液中可以得到胰岛素原250～300mg,分泌水平约占总蛋白量的20%,重组人胰岛素具有与猪胰岛素相同的受体结合能力和生物活性. 展开更多

关键词 胰岛素原 甲醇酵母 pichia PASTORIS 乙醇氧化酶(AOX) 表达系统

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精子蛋白SP22在毕赤氏酵母中的表达、纯化和鉴定 被引量：1

13

作者 宛传丹 黄宇烽 许晓风 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期391-395,403,共6页

目的:克隆人睾丸精子蛋白SP22基因在毕赤氏酵母中表达,并对表达产物进行纯化和鉴定。方法:RT-PCR克隆出睾丸SP22基因,导入pGEM-T克隆载体。再亚克隆到酵母真核分泌型表达载体pHIL-S1。电击转化将重组质粒pHIL-S1/SP22导入GS115酵母菌株... 目的:克隆人睾丸精子蛋白SP22基因在毕赤氏酵母中表达,并对表达产物进行纯化和鉴定。方法:RT-PCR克隆出睾丸SP22基因,导入pGEM-T克隆载体。再亚克隆到酵母真核分泌型表达载体pHIL-S1。电击转化将重组质粒pHIL-S1/SP22导入GS115酵母菌株。筛选出阳性克隆,以甲醇诱导分泌表达。镍离子亲和层析法从培养上清中纯化目的蛋白。结果:SP22编码序列与人致癌基因DJ1基本相同。重组质粒正确插入酵母基因组后,甲醇诱导SP22表达并分泌至培养上清中,表达量约占上清总蛋白的20%。纯化出的目的蛋白为糖蛋白,能被免疫印迹证实。结论:成功构建了酵母GS115/pHIL-S1/SP22重组型表达菌株,并纯化获得糖基化的蛋白,为进一步研究该蛋白的结构及生理功能打下了基础。 展开更多

关键词 精于蛋白SP22 基因克隆 毕赤氏酵母表达系统 镍离子亲和层析

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抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量：1

14

作者 李忠清 王亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期145-149,共5页

利用巴斯德毕赤酵母系统表达抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽简称LfcinBD,获得的表达产物具有较强的抗菌活性。将人工设计的用化学合成法合成的以酵母偏爱密码子编码的LfcinBD基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组... 利用巴斯德毕赤酵母系统表达抗菌肽牛乳铁蛋白肽衍生肽简称LfcinBD,获得的表达产物具有较强的抗菌活性。将人工设计的用化学合成法合成的以酵母偏爱密码子编码的LfcinBD基因片段克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得的重组质粒pPIC9K-LfcinBD通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化,电击法转化毕赤酵母GS115宿主菌,G418抗性筛选,得到高拷贝转化子。经PCR检测,LfcinBD基因与毕赤酵母染色体稳定整合。阳性克隆经甲醇诱导表达LfcinBD,诱导表达5 d,每24 h取上清1 mL,进行抑菌试验。结果表明,抗菌肽牛乳铁多肽衍生肽基因已整合到酵母细胞基因组中并获得表达,经0.5%甲醇在30℃诱导48 h可产生较强抗菌活性的抗菌肽,而且对氨苄青霉素抗性的大肠杆菌亦有较强的抑菌作用。 展开更多

关键词 牛乳铁蛋白肽衍生肽(LfcinBD) 毕赤酵母表达系统 抗菌活性

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