颅内动脉粥样硬化血管壁中人巨细胞病毒即刻早期基因的表达 被引量：12

1

作者 易立 王得新 +1 位作者 赵伟琴 冯子敬 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期66-68,共3页

目的　通过检测颅内动脉血管壁中人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期 (IE)基因的表达 ,研究HCMV感染与动脉粥样硬化的相关性。方法　选取 35份有动脉粥样硬化的死亡病例颅内动脉和2 0份死亡病例的正常颅内动脉 ,分别应用原位杂交和PCR方法检... 目的　通过检测颅内动脉血管壁中人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期 (IE)基因的表达 ,研究HCMV感染与动脉粥样硬化的相关性。方法　选取 35份有动脉粥样硬化的死亡病例颅内动脉和2 0份死亡病例的正常颅内动脉 ,分别应用原位杂交和PCR方法检测动脉管壁中HCMVIE基因DNA。结果　两种方法均发现动脉粥样硬化组HCMVIE基因检出率较正常对照组高 ,二者相比差异有显著意义 (P =0 0 18,P =0 0 32 ) ,而且Ⅲ～Ⅳ级动脉粥样硬化的检出率高于Ⅰ～Ⅱ级动脉粥样硬化 (P =0 0 2 7,P =0 0 0 9)。结论　颅内动脉粥样硬化的血管壁中有HCMV存在 ,因此推测HCMV感染与颅内动脉粥样硬化的病理过程及病变程度有关。HCMVIE基因的表达可能是血管组织病变的早期改变。 展开更多

关键词 颅内动脉粥样硬化 巨细胞病毒感染 即刻早期基因 基因表达 致病机制

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中药补肾益气活血作用对生长受限胎鼠脑及肝细胞外信号调节激酶-1与丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1表达的影响 被引量：3

2

作者 吴云霞 黄光英 李靖 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期672-675,共4页

目的　探讨补肾益气活血方剂对生长受限胎鼠脑及肝细胞外信号调节激酶 1(ERK 1)和丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)表达的影响。方法　采用被动吸烟法建立孕鼠的生长受限模型 ,对 48只孕鼠随机分成生长受限组 (12只 )、精氨酸治疗组 ... 目的　探讨补肾益气活血方剂对生长受限胎鼠脑及肝细胞外信号调节激酶 1(ERK 1)和丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)表达的影响。方法　采用被动吸烟法建立孕鼠的生长受限模型 ,对 48只孕鼠随机分成生长受限组 (12只 )、精氨酸治疗组 (12只 )、补肾益气活血方剂 (简称中药 )中药治疗组 (12只 ) ,另选 12只正常孕鼠组成正常组。运用Western blot方法 ,分别检测各组孕鼠所生产胎鼠的脑组织及肝组织内ERK 1和MKP 1的表达。结果　 (1)脑组织 :生长受限组、精氨酸治疗组、中药治疗组和正常组ERK 1的表达分别为 7 63± 0 2 2、10 0 3± 0 41、11 0 3± 0 3 0、11 44± 0 0 9;MKP 1的表达分别为 7 41± 0 3 8、10 3 5± 0 60、10 60± 0 14、11 60± 0 62。 (2 )肝组织 :生长受限组、精氨酸治疗组、中药治疗组和正常组ERK 1的表达分别为 4 73± 0 5 4、5 83± 0 17、11 3 7± 0 12、12 3 4± 0 14;MKP 1的表达分别为 9 0 7± 0 61、10 66± 0 0 8、14 2 7± 0 73、14 92± 0 17。 (3 )在肝组织和脑组织中 ,生长受限组ERK 1和MKP 1的表达较正常组明显降低 (P <0 0 1) ,中药治疗组较生长受限组明显升高 (P <0 0 1) ,且接近于正常组的表达水平 (P >0 0 5 )。脑组织ERK 1的表达 ,中药治? 展开更多

关键词 胎儿生长迟缓 补肾 益气活血 有丝分裂素激活蛋白激酶类 蛋白质酪氨酸磷酸酶 即早蛋白质类

原文传递

免疫共沉淀联合质谱分析筛选与HCMV IE86相互作用蛋白 被引量：2

3

作者 李朝华 胡明 +1 位作者 钱冬萌 王斌 《青岛大学学报（医学版）》 CAS 2018年第1期1-5,9,共6页

目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免... 目的利用免疫共沉淀联合质谱分析的方法,在人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞和胶质瘤细胞系U87MG细胞中,筛选与人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期蛋白IE86相互作用的病毒蛋白和剪接相关蛋白。方法通过HCMV感染细胞使IE86蛋白在细胞中表达,采用免疫共沉淀的方法富集两种细胞系中的IE86结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,从胶中切取IE86结合蛋白条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用分析及数据库检索,筛选与IE86相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析,在MRC-5细胞中,共鉴定到与IE86相互作用的病毒编码的蛋白质17种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白25种;在U87MG细胞中,共鉴定到病毒编码的蛋白质4种,宿主细胞编码的剪接相关蛋白8种。结论与胶质瘤细胞系U87MG相比,人胚肺成纤维细胞MRC-5中有更多种病毒蛋白及剪接相关蛋白与IE86有相互作用,协同参与IE86的剪接及病毒早、晚期蛋白的表达,这为进一步研究HCMV在不同细胞环境中的复制机制提供了基础。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 即早蛋白质类 免疫沉淀法 质谱分析法 蛋白质相互作用

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结缔组织生长因子与转化生长因子及Smad信号通路在兔角膜创伤愈合中的作用 被引量：10

4

作者 杨咏梅 吴欣怡 杜立群 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期918-924,共7页

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子β_1(TGF-β_1)在兔角膜创伤愈合过程中的表达和对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的 Smad 信号传导通路作初步研究。方法选择 Albino 纯种白兔26只,随机分为4组:(1)空... 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)与转化生长因子β_1(TGF-β_1)在兔角膜创伤愈合过程中的表达和对创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的 Smad 信号传导通路作初步研究。方法选择 Albino 纯种白兔26只,随机分为4组:(1)空白对照组:2只兔(4只眼),未做任何处理。(2)单纯角膜创伤组:又分术后2、6h,1、3、7、21 d 亚组,每个亚组2只兔(4只眼)。(3)TGF 抗体组:颞侧球结膜下注射15.5μg TGF 抗体,又分为3、7、21d 亚组,每个亚组2只兔(4只眼)。(4)Smad4抗体组:颞侧球结膜下注射20μg Smad4抗体,又分为3、7、21d 亚组,每个亚组2只兔(4只眼)。实验眼首先行直径3mm、包含约0.05mm 实质层的板层角膜切除术,然后 TGF 抗体组术眼球结膜下注射 TGF-β_1抗体,Smad4抗体组术眼球结膜下注射 Smad4抗体,用免疫组织化学和mRNA 原位杂交方法分别检测 CTGF、TGF-β_1、纤维粘连蛋白(FN)在术后2、6h、1、3、7、21d 的表达和Ⅰ型胶原、CTGF mRNA 在术后6h、3、7、21d 的表达及角膜纤维细胞活化增生情况。结果 (1)正常兔眼角膜未发现 CTGF 蛋白和 mRNA 的表达。TGF-β_1蛋白在正常角膜上皮中有表达。(2)术后6h角膜纤维细胞开始活化,创伤后 TGF-β_1在上皮和实质中的表达显著增加,同时 CTGF mRNA 表达上调;术后3d TGF-β_1蛋白、CTGF 及Ⅰ型胶原 mRNA 的表达到高峰;术后7d,3者在上皮中表达明显,TGF-β_1蛋白在实质中表达减少;术后21d,绝大多数纤维细胞恢复到伤前状态,CTGF 蛋白和 mRNA在上皮中偶见表达。(3)TGF 抗体使实质中的 TGF-β_1、CTGF、FN 表达减少,同时下调上皮中 CTGFmRNA 的表达。(4)Smad4抗体抑制实质层 TGF 的表达,而对 CTGF 表达无影响。结论创伤能引起TGF-β_1蛋白、CTGF 蛋白及 mRNA 的表达增加,Ⅰ型胶原和 FN 蛋白合成增加。TGF-β_1促进角膜纤维细胞活化,上调 CTGF 的表达;CTGF 主要调节Ⅰ型胶原和 FN 生成,从而影响角膜� 展开更多

关键词 角膜 伤口愈合 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 转化生长因子β 信号传递

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蛋白尿负荷幼鼠肾组织核转录因子κB、致纤维化因子及纤维连接蛋白核酸表达的研究 被引量：7

5

作者 马宏 李晓惠 +5 位作者 李钊 阴怀清 王晓红 李卫卫 栗红 刘琼 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期814-818,共5页

目的探讨幼年大鼠持续蛋白尿致肾损伤的不同时间点肾组织NF-κB亚单位P65/Rel-A及凝血酶敏感蛋白(TSP-1)、转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN) mRNA动态表达的趋势.方法 3周龄幼年Wistar雌性大鼠80只,分... 目的探讨幼年大鼠持续蛋白尿致肾损伤的不同时间点肾组织NF-κB亚单位P65/Rel-A及凝血酶敏感蛋白(TSP-1)、转化生长因子(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN) mRNA动态表达的趋势.方法 3周龄幼年Wistar雌性大鼠80只,分为BSA组(40只)和对照组(40只), 采用BSA诱导制备蛋白负荷肾病模型;考马斯亮蓝比色测大鼠尿蛋白;HE染色评价肾组织常病理变化;原位杂交检测P65/Rel-A、TSP-1、TGF-β1及CTGF mRNA表达;Northern blot检测FN mRNA表达.SPSS10对实验数据进行统计学处理.结果 (1)BSA组大鼠至3～4周蛋白尿达大量蛋白尿程度,肾间质炎症细胞浸润,肾小管蛋白管型形成,间质水肿,间质区加宽.(2)BSA组各级肾小管上皮细胞P65/Rel-A mRNA于细胞核的表达强度趋于增加,第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.33±0.20、2.76±0.12、2.96±0.19、 3.76±0.18(F=37.34,P<0.01).(3) BSA组 TSP-1 mRNA表达第1、2、3、4周半定量积分分别为: 2.60±0.28、3.39±0.41、2.77±0.08、2.71±0.13,于第2周时达高峰(F=11.14,P<0.01).(4)伴随蛋白尿的加重,BSA组TGF-β1及CTGF的mRNA于各级肾小管上皮细胞表达趋势进行性增强,与对照组比较及自身各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.01).(5)Northern blot结果提示,BSA组FN mRNA于第2周明显上调,至第4周是对照组的3.6倍,是第1周的2.7倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结论大量持续蛋白尿过程中肾组织NF-κB信号途径活化,TSP-1、TGF-β1、CTGF的异常表达,肾间质FN的合成和异常集聚,可能是促进肾间质进一步损伤的机制之一. 展开更多

关键词 蛋白尿 NF-κB 凝血酶敏感蛋白1 转化生长因子β 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 纤连蛋白类

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腺病毒早表达蛋白1A对大鼠细胞间黏附分子1的影响 被引量：7

6

作者 陈娟 李冰 +2 位作者 罗健东 张丹丹 冉丕鑫 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期582-587,共6页

目的探讨腺病毒早表达蛋白1A(E1A)对脂多糖、肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠肺泡上皮细胞炎症介质细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及其机制。方法致炎因素脂多糖和 TNF-α作用于稳定表达 E1A 的大鼠肺泡卜皮细胞、对照质粒转染细... 目的探讨腺病毒早表达蛋白1A(E1A)对脂多糖、肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的大鼠肺泡上皮细胞炎症介质细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及其机制。方法致炎因素脂多糖和 TNF-α作用于稳定表达 E1A 的大鼠肺泡卜皮细胞、对照质粒转染细胞和正常大鼠肺泡上皮细胞,采用流式单抗和 RT-PCR 法分析 ICAM-1蛋白水平和 mRNA 水平的表达情况;转录因子报告系统和凝胶电泳迁移变动分析(EMSA)研究核因子(NF-κB)、活化蛋白1与 ICAM-1基因上游调控元件结合的情况。结果 (1)与对照质粒组和正常细胞组相比,E1A 阳性组细胞经10 mg/L 脂多糖和10 pg/L TNF-α刺激后,ICAM-1蛋白表达(任意荧光强度)为109±15和185±20,比对照质粒转染组细胞(60±13,86±22)和正常 CCL149细胞(61±20,89±12)明显升高(F 值分别为14.46、73.64,P 均<0.01);(2)RT-PCR 显示 E1A 阳性组细胞 ICAM-1 mRNA 的表达在脂多糖、TNF-α刺激后3h和6h 均比对照质粒转染组细胞明显增高;(3)转录因子荧光素酶报道系统及 EMSA 结果显示,E1A组在脂多糖、TNF-α作用前后,细胞核内 NF-κB与 ICAM-1基因上游调控序列结合形成的阻滞条带强度均明显高于埘照组;而活化蛋白1与 ICAM-1基因上游调控序列特异性结合形成的阻滞条带在E1A 阳性组和对照组在刺激因素作用前后比较无明显差异;(4)在脂多糖作用后,NF-κB抑制剂 N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)可使 E1A 组 ICAM-1蛋白表达强度下降(109±15,50±10);TNF-α作用后 E1A 组 ICAM-1蛋白表达强度也明显下降(185±20,55±13),TPCK 处理前后比较,差异有统计学意义(t 值分别为8.4、12.2,P 值分别为0.01和0.00)。结论 E1A 可明显上调炎症介质ICAM-1的表达,上调转录因子 NF-κB、活化蛋白1的活性;E1A 上调 ICAM-1的表达主要通过 NF-κB实现。 展开更多

关键词 腺病毒科 病毒潜伏期 即早蛋白质类 炎症

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结缔组织生长因子与肝脏纤维化 被引量：6

7

作者 谢永鹏 臧秀贤 +2 位作者 吴扬 李迎今 张楠 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第1期103-106,共4页

结缔组织生长因子(CTGF)具有促成纤维细胞增殖、胶原及细胞外基质合成等作用,是一种促器官纤维化的重要细胞因子。CTGF与肝纤维化的发生密切相关,在人肝纤维化、肝硬化及实验性肝纤维化模型中CTGF的表达显著增加,而抑制肝细胞CTGF的表... 结缔组织生长因子(CTGF)具有促成纤维细胞增殖、胶原及细胞外基质合成等作用,是一种促器官纤维化的重要细胞因子。CTGF与肝纤维化的发生密切相关,在人肝纤维化、肝硬化及实验性肝纤维化模型中CTGF的表达显著增加,而抑制肝细胞CTGF的表达可显著减少胶原等细胞外基质的表达,有效的阻抑肝纤维化的进程。有关CTGF的进一步研究将对于揭示肝纤维化及肝硬化发病和治疗机理以及临床诊治等具有重要的意义。本文对CTGF的功能及其在肝纤维化形成、诊断和治疗中作用进行了综述和讨论。 展开更多

关键词 胞间信号肽类和蛋白质类 即早蛋白质类 肝硬化

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HCMV-IE2对果糖诱导的UL122转基因模型小鼠肝脏脂肪变性的影响

8

作者 周晓琼 张现娟 王斌 《精准医学杂志》 2024年第1期15-20,共6页

目的探讨人巨细胞病毒即刻早期蛋白2(HCMV-IE2)对果糖诱导的UL 122转基因模型小鼠肝脏脂肪变性的影响。方法构建UL 122转基因小鼠模型作为实验组,以同龄野生型小鼠作为对照组,以60%的高果糖饲料饲养8周,监测小鼠体质量、血糖的变化,并... 目的探讨人巨细胞病毒即刻早期蛋白2(HCMV-IE2)对果糖诱导的UL 122转基因模型小鼠肝脏脂肪变性的影响。方法构建UL 122转基因小鼠模型作为实验组,以同龄野生型小鼠作为对照组,以60%的高果糖饲料饲养8周,监测小鼠体质量、血糖的变化,并行葡萄糖耐量实验和胰岛素耐量实验后处死小鼠,测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝脏组织中三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平;取小鼠肝脏组织行HE染色和油红O染色进行组织病理学观察;流式细胞术检测肝脏组织中巨噬细胞极化情况;RT-qPCR和Western blot方法检测肝脏脂质合成相关基因mRNA和蛋白的表达水平。结果与对照组相比,实验组小鼠体质量和空腹血糖水平明显升高(F=12.78~100.05,P<0.05),出现了明显的糖耐量异常和胰岛素抵抗,GTT和ITT曲线下面积明显增大(t=3.25、4.70,P<0.05),血清中ALT、AST水平和肝脏中TG、TC水平显著增高(t=4.52~13.12,P<0.05)。实验组小鼠肝脏组织中M1型巨噬细胞比例明显升高,而M2型巨噬细胞比例明显下降(t=4.81~12.12,P<0.05),肝脏脂质合成基因SREBP1c、ACC 1、FAS和CD 36的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(t=3.54~9.96,P<0.05)。结论HCMV-IE2可能通过诱导肝脏中巨噬细胞M1型极化影响肝脏脂质代谢平衡,从而促进果糖诱导的非酒精性脂肪肝的进展。 展开更多

关键词 非酒精性脂肪性肝病 果糖 小鼠 转基因 即早蛋白质类 葡糖耐受不良 胰岛素抵抗 巨噬细胞

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LY333531下调大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子表达 被引量：5

9

作者 马强 吴永贵 +2 位作者 吴国仲 齐向明 林辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第1期34-37,共4页

　目的　探讨LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法　建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分对照组,糖尿病组及LY333531给药组 ( 10mg/(kg·d),灌胃。8周后观察各组体重、肾重、肾重 /体重、... 　目的　探讨LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法　建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分对照组,糖尿病组及LY333531给药组 ( 10mg/(kg·d),灌胃。8周后观察各组体重、肾重、肾重 /体重、24h尿白蛋白排泄率 (AER)及肾组织蛋白激酶C(PKC)活性的变化,行PAS染色肾小球病理形态学观察及CTGF免疫组化。结果　LY333531给药组大鼠体重明显高于模型组 (P<0 05),肾重、肾重 /体重、AER及肾小球面积(AG)、肾小球容量 (VG)及系膜区面积 (AM)明显低于糖尿病组(P<0 05,P<0 01);模型组肾组织PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显高于对照组(P<0 05, P<0 01);LY333531给药组PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显低于模型组 (P<0 05)。模型组肾小球CTGF表达明显高于对照组 (P<0 01),LY333531对其有明显抑制作用 (P<0 05 )。结论　LY333531对糖尿病肾脏有明显保护作用,机制可能与抑制肾组织CTGF过度表达有关。 展开更多

关键词 糖尿病 肾组织 PKC 大鼠 CTGF 对照组 药组 LY 面积 结论

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腺病毒E1A蛋白对核因子-κB活化的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预作用 被引量：6

10

作者 陈娟 李冰 冉丕鑫 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期51-55,共5页

目的探讨腺病毒E1A蛋白（E1A蛋白）对转录因子核因子-κB（NF-κB）、活化蛋白-1（AP-1）转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞（E1A组）及对照质粒转染细胞（对照组... 目的探讨腺病毒E1A蛋白（E1A蛋白）对转录因子核因子-κB（NF-κB）、活化蛋白-1（AP-1）转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞（E1A组）及对照质粒转染细胞（对照组），每组5×10’个细胞，试验重复3次。采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）进行刺激，NAC进行干预，荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-κB和AP-1转录活性的变化，Western blot法检测核因子-κB和AP-1蛋白的表达。两个样本均数的比较采用t检验，多个样本均数的比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD—t检验，结果荧光素酶活性（相对光单位）：刺激前E1A组为9698±98，在脂多糖和TNF-α刺激后分别为101195±234和170385±443，均明显高于对照组（2077±107、67846±332和95743±211）；刺激前转染AP-1的E1A组为9034±78，在脂多糖和TNF—α刺激后分别为26343±398和31731±332，均明显高于对照组（2845±93、10772±432和11005±556）。细胞内核因子-κB蛋白表达（积分吸光度值）：刺激前E1A组分别为79．3±4．6和80．3±3．8，在脂多糖和TNF-α刺激后分别为81．8±3．9～89．9±1．6和94．1±1．9～99．8±1．6，均明显高于对照组（刺激前分别为68．3±3．8和69．4±4．3，刺激后分别为70．1±2．8～80．8±3．6和73．4±4．9～83．2±6．7）；在脂多糖和TNF-α作用后E1A组细胞核内AP-1蛋白表达的积分吸光度值（72±4—73±4和83±4～86±8）与对照组（71±4～744-7和84±6～86±6）无明显差别。给予NAC预处理后再用脂多糖和TNF—α刺激，E1A组核因子-κB蛋白表达的积分吸光度值（1．98±0．20和1．90±0．20）明显低于脂多糖或TNF-α单独作用组（3．20±0．10和3．30±0．10）。结论腺病毒E1A蛋白持续表达可引起细胞内核因子-κB的过度活化，抗氧化物质NAC能明显拮抗E1A蛋白上调核� 展开更多

关键词 腺病毒科 病毒潜伏期 即早蛋白质类 氧化性应激

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LipoxinA_4受体样蛋白基因转染增强LipoxinA_4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖 被引量：4

11

作者 陆超 陈吉庆 +8 位作者 吴升华 吴元俊 赵非 潘晓勤 费莉 郭梅 黄松明 郭锡熔 陈荣华 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期288-292,共5页

目的克隆LipoxinA4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF)。观察其增强LipoxinA4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用。方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳... 目的克隆LipoxinA4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF)。观察其增强LipoxinA4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用。方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP。用10nmol/LLipoxinA4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30min后,加入1μg/mlCTGF诱导细胞增殖。MTT法检测细胞增殖抑制率。流式细胞术检测细胞周期。Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量。凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力。结果(1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株。(2)1μg/mlCTGF刺激24h,可显著诱导HLF增殖。LipoxinA4预处理对其有抑制作用,10nmol/LLipoxinA4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05)。(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10nmol/LLipoxinA4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05)。(4)10nmol/LLipoxinA4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05)。(5)10nmol/LLipoxinA4拮抗CTGF诱导的STAT3DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05)。 展开更多

关键词 肺成纤维细胞增殖 结缔组织生长因子 基因转染 受体 细胞周期蛋白D1 mol/L 增殖抑制率 HLF细胞 人肺成纤维细胞 流式细胞术检测 Western CTGF 细胞增殖作用 真核表达载体 融合基因 绿色荧光蛋白 MTT法检测 BLOT检测 细胞生长停滞

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反义寡核苷酸对转化生长因子β2刺激的人眼球筋膜囊成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响 被引量：4

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作者 胡义珍 王育红 +1 位作者 曹阳 张明昌 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期157-162,共6页

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）在滤过泡瘢痕化形成中的作用。方法对照实验研究。应用二甲基四氮唑盐（MTT）法检测脂质体对人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTF）活性的影响；用脂质体包裹CTGF的反义寡核苷酸（ASODN）处理经转化生长因子β... 目的研究结缔组织生长因子（CTGF）在滤过泡瘢痕化形成中的作用。方法对照实验研究。应用二甲基四氮唑盐（MTT）法检测脂质体对人眼球筋膜囊成纤维细胞（HTF）活性的影响；用脂质体包裹CTGF的反义寡核苷酸（ASODN）处理经转化生长因子β2（TGF-β2）刺激的HTF，然后用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术和免疫细胞化学法检测纤维连接蛋白（Fn）的合成，用RT-PCR和免疫印迹法检测CTGF的表达。结果3个不同浓度组的脂质体作用HTF后，其吸光度（A）值分别为0．178±0．069、0．196±0．071、0．141±0．036，与正常对照组（0．202±0．073）比较，差异无统计学意义（F=1．65，P〉0．05）；单纯的TGF-β2刺激组（T组）与加入了脂质体的TGF-β2刺激组（D组）分别从基因和蛋白水平比较CTGF和Fn的表达，差异无统计学意义（t=0．90，2．32,0．75，2．11；P〉0．05）；转染12h后CTGF与Fn的mRNA水平比较，脂质体介导的CTGF反义寡核苷酸治疗组（A组）的相对灰度RI值明显高于脂质体介导的CTGF正义寡核苷酸对照组（S组）和D组（F=15．25,19．73；P〈0．05）；CTGF与FN的蛋白表达水平与mRNA表达水平相一致。结论CTGF的ASODN能够抑制TGF-β2对HTF表达CTGF和Fn的刺激作用。 展开更多

关键词 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类 寡核苷酸类 反义 转化生长因子β 纤连蛋白类 成纤维细胞

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糖皮质激素及NAC对腺病毒E1A蛋白上调IL-8及ICAM-1的抑制作用 被引量：4

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作者 郭园园 冉丕鑫 +3 位作者 张锦 郑西卫 李冰 陈娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期235-240,共6页

目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。... 目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。用TNF-α刺激、DXM以及NAC干预细胞,用ELISA检测炎症因子IL-8蛋白的表达,流式细胞术检测ICAM-1的表达。结果E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞IL-8蛋白浓度分别为(48.49±0.27)ng.L-1和(22 841.75±12.92)ng.L-1,明显高于E1A-组作用前的(1.67±0.07)ng.L-1和作用后的(3 576.04±3.20)ng.L-1,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导下IL-8的高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞ICAM-1蛋白浓度(荧光强度)分别为17.12±3.32和35.12±3.19,均高于E1A-组作用前0.59±0.09和作用后29.72±3.32,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导的ICAM-1的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 E1A蛋白能够增加TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1蛋白的表达。DXM和NAC能够明显拮抗TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1的蛋白表达,具有较强的抗炎作用。腺病毒E1A蛋白对NAC及DXM的抗炎作用无明显拮抗作用。 展开更多

关键词 腺病毒科 即早蛋白质类 糖皮质激素 N-乙酰半胱氨酸 炎症反应 慢性阻塞性肺疾病

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辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子和α-平滑肌肌动蛋白表达的影响 被引量：3

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作者 林斐莉 沈汉超 +1 位作者 朱斌 林开清 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期511-516,共6页

目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组)。模型建立后,第6周及第12... 目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组)。模型建立后,第6周及第12周时各组处死大鼠10只,称取体重、肾重,测定血糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr),留取尿液测定24 h尿白蛋白排泄量(UAE),并用免疫组化方法检测肾间质结缔组织CTGF、α-SMA。结果:6周及12周时各组间SCr、LDL、HDL及TG相比无显著性差异(P>0.05);6周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但与C组相比无显著性差异(P>0.05)。12周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但高于C组(P<0.05)。结论:非降脂剂量的辛伐他汀可能通过抑制CTGF的表达和减少肾间质肌成纤维细胞的数量延缓肾小管间质纤维化进展。 展开更多

关键词 糖尿病 实验性 斯伐他汀/药理学 肌动蛋白类/代谢 胞间信号肽类和蛋白质类/生物合成 即早蛋白质类/生物合成 肾小球硬化症 病灶性/药物疗法

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结缔组织生长因子在胃癌组织中的表达及其与预后的关系 被引量：1

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作者 刘鲁英 吴淑华 +2 位作者 赵铭锋 吕增华 朱玉红 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第10期2274-2276,共3页

目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在胃癌组织中的表达并探讨CTGF表达在患者预后判断中的意义。方法:应用免疫组织化学染色方法检测108例胃癌组织中CTGF的表达情况,分析CTGF表达与患者临床病理特征、术后生存时间之间的关系。结果:CTGF... 目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在胃癌组织中的表达并探讨CTGF表达在患者预后判断中的意义。方法:应用免疫组织化学染色方法检测108例胃癌组织中CTGF的表达情况,分析CTGF表达与患者临床病理特征、术后生存时间之间的关系。结果:CTGF高表达常见于发生淋巴结转移的病例(P=0.038),CTGF表达水平低的患者术后五年生存率(48.4%)显著高于表达水平高的患者(23.9%,双侧log-rank检验,P=0.003 5)。Cox回归分析证明患者TNM分期(P<0.001)、肿瘤分化(P=0.027)和CTGF表达水平(P=0.016)是胃癌的独立预后因子。结论:胃癌组织中CTGF高表达与发生淋巴结转移和患者预后不良显著相关。 展开更多

关键词 即早蛋白质类/代谢 胞间信号肽类和蛋白质类/代谢 胃肿瘤/代谢/诊断 淋巴转移 预后 人类

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人巨细胞病毒感染妊娠早期绒毛组织中即刻早期基因与晚期基因的表达及形态学变化的体外研究 被引量：3

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作者 张龑 闻良珍 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期743-746,共4页

目的观察妊娠早期绒毛组织感染人巨细胞病毒(hCMV)后,即刻早期基因与晚期基因的表达及绒毛组织形态学变化。方法采用绒毛组织体外培养技术,建立体外hCMV感染妊娠早期绒毛模型;采用间接免疫荧光法和原位杂交法,检测不同hCMV浓度、不同感... 目的观察妊娠早期绒毛组织感染人巨细胞病毒(hCMV)后,即刻早期基因与晚期基因的表达及绒毛组织形态学变化。方法采用绒毛组织体外培养技术,建立体外hCMV感染妊娠早期绒毛模型;采用间接免疫荧光法和原位杂交法,检测不同hCMV浓度、不同感染时间,即刻早期蛋白(IEP)72-IEP86和晚期基因(LG)mRNA的表达;同时应用透射电镜观察妊娠早期绒毛组织的形态学变化。结果(1)以浓度为100半数致细胞病变滴度(TCID50)、200TCID50及300TCID50的hCMV感染绒毛组织后,细胞滋养细胞、合体滋养细胞及间质细胞均可见IEP72-IEP86表达。(2)100TCID50hCMV感染后,绒毛组织无LG mRNA表达;200TCID50及300TCID50hCMV感染第0～2天后,合体滋养细胞及间质细胞LG mRNA均呈阳性表达,细胞滋养细胞LG mRNA呈强阳性表达。(3)妊娠早期绒毛组织与经hCMV感染后的妊娠早期绒毛组织,共同于体外连续培养10d,妊娠早期绒毛组织保持了正常的形态学特征;不同浓度hCMV感染后的妊娠早期绒毛组织的形态均发生了不同程度的变化,合体滋养细胞表面微绒毛水肿、粗面内质网扩张,细胞滋养细胞多见,溶酶体增生及毛细血管腔扩张。结论(1)hCMV感染妊娠早期绒毛组织的早期,hCMV可在绒毛组织细胞中完整复制,IEP72-IEP86可长期存在于感染后的绒毛组织中。(2)hCMV感染妊娠早期绒毛组织,可引起绒毛组织细胞的超微结构变化。 展开更多

关键词 巨细胞病毒感染 绒毛膜绒毛 妊娠初期 即早蛋白质类 基因表达 超微结构

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结缔组织生长因子在进行性肌营养不良中的表达 被引量：2

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作者 孙桂莲 姚芳 +2 位作者 姜红堃 李萍 荻野谷和裕 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期753-757,共5页

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在进行性肌营养不良(PMD)中的作用。方法使用Duchenne型肌营养不良(DMD)8例、Becker型肌营养不良(BMD)2例、先天性肌营养不良(CMD)6例患儿的肌肉活检标本,借助免疫组织化学、双免疫荧光方法及Western印... 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在进行性肌营养不良(PMD)中的作用。方法使用Duchenne型肌营养不良(DMD)8例、Becker型肌营养不良(BMD)2例、先天性肌营养不良(CMD)6例患儿的肌肉活检标本,借助免疫组织化学、双免疫荧光方法及Western印迹分析检测CTGF的免疫表达和定位。结果免疫组织化学和双免疫荧光法显示CTGF在正常肌肉的血管处明显表达;免疫组织化学法和Western印记分析均显示在PMD的萎缩肌肉中CTGF的免疫反应明显增强,所有病变肌肉组织中,CTGF在再生纤维的膜、胞浆及胞核中、巨噬细胞及巨噬细胞浸润的坏死纤维中强烈表达,也免疫定位在非再生纤维的肌纤维膜、肌内膜及肌束膜的结缔组织中;双免疫标记显示在肌内膜及肌束膜的大多数激活的成纤维细胞表达CTGF;但年长的CMD患儿的晚期纤维化中CTGF弱表达或无表达。结论结果表明CTGF可能参与了PMD的发病过程,肌肉内的CTGF可能在肌纤维再生和肌肉纤维化的病变过程中起重要作用。 展开更多

关键词 肌营养不良 即早蛋白质类 胞间信号肽类和蛋白质类

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染料木黄酮对HCMV感染的人星形胶质细胞即刻早期蛋白表达影响 被引量：2

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作者 张志超 李玲 +3 位作者 于向民 卢桂玲 王斌 钱冬萌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2015年第6期631-633,637,共4页

目的探讨染料木黄酮（Gen）对人巨细胞病毒（HCMV）感染的人星形胶质细胞（AS）即刻早期蛋白72（IE72）表达的影响。方法选取对数生长期的AS进行以下实验。HCMV组：HCMV感染AS;Gen组：用含40μmol/L的Gen与含体积分数0.02的FBS的DMEM/F1... 目的探讨染料木黄酮（Gen）对人巨细胞病毒（HCMV）感染的人星形胶质细胞（AS）即刻早期蛋白72（IE72）表达的影响。方法选取对数生长期的AS进行以下实验。HCMV组：HCMV感染AS;Gen组：用含40μmol/L的Gen与含体积分数0.02的FBS的DMEM/F12培养液培养AS;Gen＋HCMV组：用含40μmol/L的Gen与含体积分数0.02FBS的DMEM/F12培养液预培养AS 4h后,HCMV感染AS;对照组：仅以含体积分数0.02FBS的DMEM/F12培养液培养AS。分别用噻唑蓝（MTT）法检测Gen对AS增殖的影响,Real-time PCR和Western blot方法检测IE72mRNA和蛋白的表达。结果 MTT法检测结果显示,Gen＋HCMV组24、48、72h的吸光度值均高于HCMV组（t=5.94～12.99,P〈0.05）。48h时,HCMV组细胞有明显的细胞病变效应（CPE）,而Gen＋HCMV组细胞状态良好,CPE不明显。Western blot方法检测结果显示,Gen＋HCMV组IE72蛋白表达水平低于HCMV组（t=4.90～7.67,P〈0.05）。Real-time PCR结果显示,感染24、48、72和96h时,Gen＋HCMV组IE72mRNA的表达低于HCMV组（t=9.70～18.61,P〈0.05）。结论适当浓度的Gen能抑制HCMV感染所致的AS异常增殖,并抑制IE72蛋白的表达。 展开更多

关键词 染料木黄酮 巨细胞病毒 即刻早期蛋白 星形胶质细胞

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乙肝病毒X蛋白对肝星状细胞的增殖及其表达TGFβ1和CTGF的影响

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作者 陈红英 陈治新 王小众 《福建医科大学学报》 2013年第3期127-132,共6页

目的研究乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝星状细胞(HSC)增殖的影响及其可能的分子机制。方法运用分子生物学方法构建稳定表达HBV X基因的HL-7702肝细胞株(L02/x)。RT-PCR、Western blot鉴定L02/x细胞HBV X基因的稳定表达。将HSC细胞分别与L02/x... 目的研究乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝星状细胞(HSC)增殖的影响及其可能的分子机制。方法运用分子生物学方法构建稳定表达HBV X基因的HL-7702肝细胞株(L02/x)。RT-PCR、Western blot鉴定L02/x细胞HBV X基因的稳定表达。将HSC细胞分别与L02/x、转染空质粒和未转染的肝细胞共培养36h,分别命名为HSC/x、HSC/ctr和HSC/NC。CCK-8法检测各组HSC增殖,Real-time PCR法检测在HSC增殖中起重要作用的TGFβ1和CTGF基因在各组HSC中的mRNA表达。结果 RT-PCR和Western blot结果显示,L02/x细胞中有HBV X基因mRNA和蛋白的表达。CCK-8法检测显示,HSC/x的增殖(0.737 7±0.014 2)显著高于HSC/ctr(0.497 0±0.008 5)和HSC/NC(0.491 3±0.018 6),差别具有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR显示,HSC/x细胞中的TGFβ1和CTGF mRNA相对表达量(3.146 1±0.070 5,2.982 9±0.031 5)均显著高于HSC/ctr(1.004 6±0.004 0,1.022 2±0.062 7)和HSC/NC(1.000 0±0.000 0,1.000 0±0.000 0),差别具有统计学意义(P均<0.01)。结论肝细胞中表达的HBV X基因可以上调HSC细胞TGFβ1和CTGF基因的表达,促进共培养的HSC增殖。 展开更多

关键词 病毒蛋白质类 肝炎病毒 乙型 转化生长因子β 肝细胞 星形细胞 即早蛋白质类

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伪狂犬病病毒立即早期蛋白基因缺失突变体对SV_(40)启动子的调控作用

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作者 赵凤云 涂长春 +1 位作者 张玉静 欧阳红生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期564-566,共3页

用多次 PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白 ( imm ediate early protein,IE180 )基因进行部分缺失 ,测序证实缺失序列正确后 ,构建了 IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达载体 pc P1 P2 、pc P1 P3P2 、pc P6 P2 。将这些真核表... 用多次 PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白 ( imm ediate early protein,IE180 )基因进行部分缺失 ,测序证实缺失序列正确后 ,构建了 IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达载体 pc P1 P2 、pc P1 P3P2 、pc P6 P2 。将这些真核表达载体与带有 SV4 0 早期基因启动子和报告基因 CAT(氯霉素乙酰转移酶 )的 p CAT3- control载体质粒混合后 ,用质脂体介导的方法 ,共转染 Hela细胞。通过 CAT的 EL ISA方法检测瞬时表达结果表明 :突变体 P1 P2 和 P1 P3P2 对 SV4 0 启动子具有较强的激活能力 ,而 P6 P2 则对 SV4 0 启动子有较明显的抑制作用。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 立即早期蛋白 基因缺失突变体 SV40启动子 调控作用 多次PCR

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