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三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究 被引量:43
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作者 章尧 赵燕 陈昌杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期206-208,共3页
目的 探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法 不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60... 目的 探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法 不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果 在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论 As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 展开更多
关键词 肿瘤细胞 细胞凋亡 端粒酶催化亚单位 细胞凋亡 HL-60细胞 三氧化二砷
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胃黏膜癌变过程中hTERT和相关基因表达的变化及其临床意义 被引量:13
2
作者 陈陵 陈婷 +6 位作者 蔡永国 汤旭东 李晶晶 房殿春 罗元辉 余松涛 杨仕明 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2006年第5期443-447,共5页
目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜(normalmucosa,NM)、肠化(intestinalmeta-plasia,IM)、异型增生(dysplasia,DYS)、早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)和进展期胃癌(advancedgastriccancer,AGC)中... 目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜(normalmucosa,NM)、肠化(intestinalmeta-plasia,IM)、异型增生(dysplasia,DYS)、早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)和进展期胃癌(advancedgastriccancer,AGC)中的表达水平、相互联系及其临床意义。方法经手术或胃镜病理证实的不同病变胃黏膜组织132例为研究对象(其中NM20例、IM30例、DYS15例、EGC24例、AGC43例),采用免疫组化SP法分别检测其hTERT、c-myc、bcl-2、NF-κB的表达水平,并对各指标阳性表达率、相关性及临床病理联系进行比较分析。结果在胃黏膜癌变过程中,除bcl-2外,hTERT、c-myc、NF-κB的表达随着胃黏膜病变程度的加重而逐渐增加,各组间比较差异显著;进一步分析表明hTERT与c-myc在IM、DYS、AGC等3组中具有显著的相关性(P<0·05),而hTERT与bcl-2、NF-κB在IM、DYS、EGC、AGC等各组中均无显著的相关性(P>0·05);临床病理分析表明,hTERT在低分化及未分化中的表达显著高于高、中等程度分化(P<0·05),而与性别、年龄、肿瘤大小等无关。结论hTERT随着胃黏膜病变程度的加重,其阳性表达率逐渐增高,提示hTERT可能在胃黏膜癌变过程中具有重要意义,是胃黏膜癌变的早期事件;c-myc过表达可能是激活hTERT过表达的重要调节因素;hTERT不仅可以作为胃黏膜癌变的早期诊断指标,而且有可能成为胃癌或其他肿瘤基因治疗或免疫治疗的良好靶位。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 胃癌 C-MYC
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三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响 被引量:9
3
作者 马学斌 谷志远 +5 位作者 宋海静 韩为东 司艺玲 郝好杰 李琦 赵亚力 《军医进修学院学报》 CAS 2004年第1期26-28,共3页
目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人宫颈癌细胞 (Hela细胞 )端粒酶活性及端粒酶逆转录酶 (hTERTmR NA)表达的影响。方法 :以 2 μmol/L的As2 O3 作用于人宫颈癌Hela细胞 ,在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化 ,用流式细胞仪检... 目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人宫颈癌细胞 (Hela细胞 )端粒酶活性及端粒酶逆转录酶 (hTERTmR NA)表达的影响。方法 :以 2 μmol/L的As2 O3 作用于人宫颈癌Hela细胞 ,在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化 ,用流式细胞仪检测细胞周期的变化 ,用RT PCR法检测hTERTmRNA表达的变化 ,用TRAP ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果 :随着As2 O3 作用时间的延长 ,Hela细胞的活力逐渐降低 ,G0 /G1期细胞所占比例升高 ,S期细胞所占比例减少 ,hTERTmRNA表达水平逐渐降低 ,端粒酶活性逐渐下降。结论 :As2 O3 可引起Hela细胞周期阻滞 ,hTERTmRNA的表达水平下调 ,端粒酶活性降低。 展开更多
关键词 三氧化二砷 HELA细胞 htertmRNA表达 端粒酶 肿瘤 AS2O3
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4′-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究 被引量:8
4
作者 杨最素 罗莉 +2 位作者 朱利群 仇黎丽 徐昌芬 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1203-1206,共4页
目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对... 目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P<0.01);4-MS作用72h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。40mg/L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P<0.01)。20、40mg/L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P<0.01)。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。 展开更多
关键词 4'甲醚-黄芩素(4-MS) JAR细胞 早期凋亡 细胞内CA^2+浓度 人端粒酶逆转录酶(htert)
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逆转录病毒介导反义hTERT对肺癌细胞的抑制作用 被引量:7
5
作者 田凤军 王智勇 +2 位作者 马俊义 赵云霞 卢炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期545-549,共5页
背景与目的:抑制端粒酶活性可以抑制细胞端粒延长,进而抑制永生细胞的增殖。为了探讨以端粒酶为靶的肺癌基因治疗可能性,本实验观察反义人端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)cDNA对A549肺癌细胞的端粒酶活... 背景与目的:抑制端粒酶活性可以抑制细胞端粒延长,进而抑制永生细胞的增殖。为了探讨以端粒酶为靶的肺癌基因治疗可能性,本实验观察反义人端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)cDNA对A549肺癌细胞的端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用。方法:RT-PCR扩增hTERTmRNA5'起始端835bp的cDNA,分别正向和反向插入到逆转录病毒表达载体pLXSN质粒中,转染包装细胞PT67后获得重组病毒,病毒感染肺癌A549细胞。Westernblot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化和绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况,流式细胞仪和DNA片段电泳观察凋亡情况。结果:反义hTERT作用肺癌A549细胞后hTERT蛋白表达下降,端粒酶活性被抑制,细胞增殖受到抑制并出现明显的细胞凋亡。结论:反义hTERT对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,hTERT有可能成为肺癌基因治疗靶点。 展开更多
关键词 逆转录病毒 介导反义 htert 肺癌细胞 抑制作用
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重组人肿瘤坏死因子调节端粒酶活性的体外研究 被引量:6
6
作者 谢渭芬 林勇 +4 位作者 张兴荣 陈伟忠 张新 张忠兵 王皓 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期156-158,共3页
目的 研究重组人肿瘤坏死因子 (rhTNF)对端粒酶活性的调节作用。方法 将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1 6细胞 ,以TRAP ELISA方法测定其端粒酶活性 ;采用Lipofect脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位—端粒酶逆转录酶 (hTE... 目的 研究重组人肿瘤坏死因子 (rhTNF)对端粒酶活性的调节作用。方法 将不同浓度rhTNF加入肝癌细胞株HepG2和HepG1 6细胞 ,以TRAP ELISA方法测定其端粒酶活性 ;采用Lipofect脂质体转染法将携带端粒酶催化亚单位—端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子的质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞 ,2h后加入不同浓度的rhTNF ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。 结果 在 10~ 10 0 0IU/ml浓度范围内 ,rhTNF可抑制端粒酶活性 ,同时在该浓度范围内 ,rhTNF可显著抑制hTERT启动子的表达 ,其抑制作用与rhTNF剂量呈正相关。结论 rhTNF杀伤肿瘤细胞的机制可能与其抑制hTERT的表达有关。 展开更多
关键词 重组人肿瘤坏死因子 端粒酶逆转录酶 基因调控 肿瘤 抑制作用
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3种卵巢癌细胞中hTERT转录水平及其与端粒酶活性的相关性研究 被引量:6
7
作者 宋悦 孔北华 +2 位作者 刘培淑 马道新 江森 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期486-491,共6页
背景与目的:端粒酶在约90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平。端粒酶、hTERT、hTERT启动... 背景与目的:端粒酶在约90%的肿瘤细胞中有活性而在绝大多数正常细胞中受抑,催化亚单位端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)是端粒酶的重要组成部分,其表达的调控主要发生在转录水平。端粒酶、hTERT、hTERT启动子三者之间密切相关。本研究探讨卵巢癌细胞系中hTERT启动子的活性及其与hTERTmRNA表达和端粒酶活性之间的关系。方法:应用脂质体转染法将hTERT核心启动子基因转入3种卵巢癌细胞OVCAR3、SKOV3、3AO及正常卵巢上皮细胞中,并用荧光素酶检测实验检测其中hTERT启动子的活性;应用RT-PCR半定量法检测这4种细胞中hTERTmRNA的表达水平;应用PCR-ELISA定量检测这4种细胞中端粒酶的活性。同时以端粒酶阳性的永生化人胚肾成纤维细胞HEK293作为阳性对照,以端粒酶阴性的人胚肺成纤维细胞HELF作为阴性对照。结果:OVCAR3、SKOV3、3AO细胞及正常卵巢上皮细胞中的hTERT启动子活性(视每种细胞中pGL3-control的启动子活性为100%)分别为31.4%、20.3%、17.7%和0.3%;hTERTmRNA的相对表达水平(视SKOV3的表达水平为1.00)分别为1.30、1.00、0.63和0;端粒酶活性分别为0.580、0.414、0.386和0.103(>0.200时定为阳性)。3种卵巢癌细胞中hTERT启动子活性、hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性均特异性增高。 展开更多
关键词 卵巢癌细胞 htert转录 端粒酶活性 相关性 研究
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hTERT基因转染对人胚胎大脑皮质神经元生长的影响 被引量:7
8
作者 张洁 廖亚平 +3 位作者 吴灵芝 孔令平 郑敏 汪华侨 《解剖学研究》 CAS 2008年第4期251-254,260,共5页
目的观察hTERT基因转染后对人胚胎大脑皮质神经元生长活力的影响。方法制备pSU-CMV-hTERT腺病毒,以MOI感染人胚胎大脑皮质神经元。免疫细胞化学荧光染色观察神经元内hTERT表达。MTT法测量接种病毒后24h、72h、1周、2周、3周的神经元活... 目的观察hTERT基因转染后对人胚胎大脑皮质神经元生长活力的影响。方法制备pSU-CMV-hTERT腺病毒,以MOI感染人胚胎大脑皮质神经元。免疫细胞化学荧光染色观察神经元内hTERT表达。MTT法测量接种病毒后24h、72h、1周、2周、3周的神经元活力。结果经鉴定正确的重组质粒pSU-CMV-hTERT与骨架质粒正确重组,经包装扩增后得到含hTERT基因的腺病毒。病毒转染24h时荧光染色可见神经元内有hTERT表达,第3周末表达减弱。hTERT基因转染后的神经元平均活力较对照组高,转染病毒后24h、72h、1周、2周、3周,hTERT基因转染对神经元的保护率分别为27.4%、42.4%、17.3%、7.4%和15.9%。结论hTERT基因转染对人胚胎大脑皮质神经元有一定的保护作用。 展开更多
关键词 人端粒酶催化亚基(hTEET) 端粒酶 大脑皮质神经元 阿尔茨海默病
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人端粒酶逆转录酶基因启动子区的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:4
9
作者 郭玉忠 李杰 +2 位作者 姜国忠 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期44-47,共4页
目的 :构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体。方法 :用核酸内切酶NotⅠ和KpnⅠ酶切报告基因GFP ,插入pcDNA3.1 (+)载体 ,得到pcDNA3.1 (+) -GFP(PG)载体 ;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列 ,测序后用核酸内切酶Bg... 目的 :构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体。方法 :用核酸内切酶NotⅠ和KpnⅠ酶切报告基因GFP ,插入pcDNA3.1 (+)载体 ,得到pcDNA3.1 (+) -GFP(PG)载体 ;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列 ,测序后用核酸内切酶BglⅡ和KpnⅠ酶切插入PG载体 ,得到pcDNA3.1 (+) -GFP -hTERT(PGT)载体。将PGT载体转染人食管癌EC970 6细胞系 ,经G4 1 8筛选 ,荧光显微镜下观察。结果 :克隆得到的启动子序列与文献相符 ,重组载体经酶切鉴定方向正确 ,含有人端粒酶逆转录酶基因启动子序列。经转染人食管癌EC970 6细胞系 ,在荧光显微镜下观察到绿色的阳性克隆。结论 :克隆的人端粒酶逆转录酶基因启动子序列在真核细胞中具有启动子活性。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 启动子 真核表达载体
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反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响 被引量:6
10
作者 司艺玲 韩为东 +3 位作者 赵亚力 宋海静 李琦 郝好杰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1061-1063,共3页
目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测... 目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测基因转染前后VEGFC及其受体Flt4mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGFC、Flt4蛋白表达。结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGFC及其受体VEGFR3(Flt4)mRNA和蛋白表达均受到明显抑制。结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGFC及其受体Flt4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移。 展开更多
关键词 DNA 反义 人端粒酶逆转录酶 胃肿瘤 血管内皮生长因子类
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hTERT基因转染对人神经元活力的影响 被引量:6
11
作者 吴灵芝 李水彬 +2 位作者 程刚卫 汪华侨 孔令平 《赣南医学院学报》 2014年第2期170-173,共4页
目的:观察人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)对Aβ诱导的人胚胎大脑皮质神经元细胞活力的影响。方法:人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,以hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35诱导神经元的凋亡,72 h后用... 目的:观察人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)对Aβ诱导的人胚胎大脑皮质神经元细胞活力的影响。方法:人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,以hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35诱导神经元的凋亡,72 h后用MTT检测各组细胞数量和活力,并计算其保护率。结果:hTERT重组腺病毒转染后72 h进行Aβ干预,此时hTERT对神经元的保护力为29.8%,活细胞的数量及细胞活力(0.310±0.033)明显高于非转染组(0.237±0.081),P=0.002,差异有统计学意义。结论:Aβ干预后的神经元,其活力明显下降,而hTERT重组腺病毒转染可以促进神经元存活,对Aβ干预的人胚胎大脑皮质神经元具有保护作用。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶( htert) 人胚胎大脑皮质神经元 阿尔茨海默病
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实时PCR检测单细胞中人端粒酶hTERT基因mRNA的表达 被引量:6
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作者 李楠 黄莉 +6 位作者 何冰 钟艳平 林若芸 李力 薛林涛 王世凯 黎丹戎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期383-388,共6页
人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与端粒酶活性密切相关,而多项研究表明,端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达... 人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的表达与端粒酶活性密切相关,而多项研究表明,端粒酶在肿瘤发生、发展、细胞永生化方面起重要作用.为探讨单细胞技术检测卵巢癌SKOV3细胞转导hTERT前后其mRNA表达的差异,前期已通过慢病毒转染,将携带hTERT基因的表达质粒载体LV4-pGLV-EF1a-EGFP-hTERT转入卵巢癌SKOV3细胞系,构建了稳定表达hTERT蛋白的细胞株(SKOV3 h),同时设空载体感染组(SKOV3 b)和未处理组(SKOV3)为对照组,采用流式细胞术,分选不同数量的细胞进行实时PCR.结果显示,初步摸索的细胞数在50个以内,且随着细胞数目的增多,Ct值逐渐增大(P<0.05);SKOV3 h组hTERT基因mRNA表达最高,SKOV3 b组次之,SKOV3组表达最低(P<0.05).提示SKOV3细胞转导hTERT基因后可促进该基因的mRNA表达.同时用该法检测了单个卵裂球内hTERT基因的表达,为利用单细胞单基因遗传学诊断研究及肿瘤学研究提供基础. 展开更多
关键词 单细胞 实时PCR 人端粒酶逆转录酶基因(htert) 流式细胞术
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人端粒酶催化亚基基因启动子调控的表达载体的构建 被引量:4
13
作者 韩明鲲 张惠中 成诗银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期384-386,共3页
目的:构建人端粒酶催化亚基(humantelomerase reversetranscriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异。方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将... 目的:构建人端粒酶催化亚基(humantelomerase reversetranscriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异。方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将其插入荧光素酶报告载体中,经SacI和HindIII酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异。结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表达;而在正常细胞中的表达极低。结论:hTERT基因的启动子具有肿瘤特异性,有可能解决肿瘤基因治疗中的靶向性问题。 展开更多
关键词 端粒酶催化亚基 启动子 荧光素酶基因表达载体
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短发夹RNA沉默hTERT基因抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的实验研究 被引量:5
14
作者 孙卫东 于如同 马衍刚 《徐州医学院学报》 CAS 2007年第5期290-294,共5页
目的研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中hTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸... 目的研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中hTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。将成功造模的36只裸鼠随机分为3组(每组12只)。hTERT shRNA组肿瘤体内原位注射hTERT质粒shRNA(pshRNA)20μg+脂质体60μl+PBS;PBS组肿瘤体内原位注射PBS 150μl;空质粒组肿瘤体内原位注射空质粒20μg+脂质体60μl+PBS。观察肿瘤生长情况。苏木精-伊红染色观察肿瘤组织的病理改变,W estern b lot检测hTERT蛋白的表达,钙依赖性磷脂结合蛋白V+碘化丙啶双染流式细胞仪测凋亡率。结果成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。治疗5周后hTERT shRNA组肿瘤体积较PBS组和空质粒组明显缩小,抑瘤率为58.2%;病理学检查hTERT shRNA组肿瘤生长受到抑制,肿瘤细胞散在稀疏,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡;W estern b lot示hTERT shRNA组hTERT蛋白表达受抑制;流式细胞仪检测hTERT shRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于PBS组和空质粒组(P<0.01)。结论hTERT shRNA可在裸鼠移植瘤体内有效发挥作用,抑制人端粒酶逆转录酶蛋白在体内表达,从而能有效抑制裸鼠胶质瘤增殖生长,促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 RNA干扰 人端粒酶逆转录酶 脑肿瘤 胶质瘤 基因治疗
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hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景 被引量:4
15
作者 张敏 陈小云 +3 位作者 王磊 王栋 蒋桃珍 王静文 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第2期58-62,共5页
人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作... 人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作一综述。 展开更多
关键词 永生化 端粒 端粒酶 人端粒酶逆转录酶基因(htert)
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hTERT转录调控区克隆及在人癌细胞的转录特异性分析 被引量:4
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作者 杨邵敏 张波 +1 位作者 廖松林 侯琳 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期470-474,共5页
目的 通过克隆人癌细胞中端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因上游转录调控区并观察其在不同人癌细胞和正常细胞中的转录活性 ,探讨人hTERT基因在细胞癌变中的激活机制。方法 用PCR方法克隆HeLa和PG癌细胞hTERT基因转录调控区 ,并进行DNA序列... 目的 通过克隆人癌细胞中端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因上游转录调控区并观察其在不同人癌细胞和正常细胞中的转录活性 ,探讨人hTERT基因在细胞癌变中的激活机制。方法 用PCR方法克隆HeLa和PG癌细胞hTERT基因转录调控区 ,并进行DNA序列测定 ;将转录调控区重组于荧光酶报告载体 ,瞬时转染人癌细胞HeLa、PG、2 93和正常人二倍体细胞 2BS后 ,测定荧光酶活性以确定调控区转录活性。结果 于人HeLa和PG癌细胞分别克隆hTERT基因转录起始点附近 6 36bp(- 5 31~ +90 )和 95 0bp(- 5 31~ +40 4 )的转录调节区 ,其序列与GenBank人hTERT启动子序列相同。将两转录调控区分别重组于荧光酶报告载体pGL2 ,得到pGL2 6 36和pGL2 95 0 ,并同时构建了pGL2 X(- 5 31~ - 2 72 )和pGL2 S (第一内含子区 )。瞬时转染细胞后发现 :pGL2 6 36和pGL2 95 0在癌细胞中的转录活性明显增高 ,而在人二倍体 2BS细胞中几无转录活性。重组体pGL2 S和pGL2 X在端粒酶阳性肿瘤细胞中的转录活性明显降低 ,pGL2 S的转录活性略高于pGL2 X。结论 人HeLa和PG癌细胞中hTERT转录调控区无基因突变并高度保存 ;hTERT调控区具有癌细胞特异性转录调节活性 ,表明hTERT转录水平的激活与端粒酶阳性及细胞癌变密切相关 ;hTERT上游 2 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 荧光酶分析法 基因调控 基因克隆
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去甲斑蝥素对食管癌细胞株Eca-109中hTERT的表达和PTPRO基因启动子甲基化影响的实验研究 被引量:4
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作者 薛晓婕 汪宏良 陈婷 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2016年第4期293-296,共4页
目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管... 目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;TUNEL法配合激光共聚焦扫描显微镜检测NCTD+Eca-109组(实验组)和Eca-109组(对照组)细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR(MSP)检测实验组和对照组中PTPRO基因启动子的甲基化状态,Western blotting检测实验组和对照组hT ERT蛋白的表达。结果 MTT检测显示,NCTD可抑制Eca-109细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,不同作用时间和浓度的细胞增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法结合激光共聚焦扫描显微镜观察显示,实验组细胞内部结构发生剧烈的变化,较对照组细胞核染色质致密浓染,核形缩小;MSP检测显示,对照组PTPRO基因启动子发生明显甲基化;Western blotting检测显示,实验组hT ERT蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论NCTD对食管癌细胞Eca-109有细胞毒性,能够抑制细胞生长,其机制可能与下调hT ERT蛋白表达和PTPRO基因启动子去甲基化有关。 展开更多
关键词 食管癌 受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO) 人端粒酶逆转录酶(htert) 去甲斑蝥素(NCTD)
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端粒酶催化亚基hTERT在肿瘤治疗中的研究进展 被引量:3
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作者 沈瑛 张永 丁健 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第7期584-588,共5页
人端粒酶催化亚基hTERT基因转录的从头激活是端粒酶活化的限速步骤,受到多种癌基因和抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体,使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达,有望用于肿瘤基因治疗。... 人端粒酶催化亚基hTERT基因转录的从头激活是端粒酶活化的限速步骤,受到多种癌基因和抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体,使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达,有望用于肿瘤基因治疗。本文首先简单介绍了hTERT蛋白的结构和表达调控机制,然后对其在肿瘤发生发展中的生物治疗的功能作一简要综述。 展开更多
关键词 端粒酶 人端粒酶催化亚基 肿瘤 基因治疗
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人端粒酶逆转录酶——肿瘤免疫治疗新靶点 被引量:3
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作者 庞建新 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期893-895,共3页
以人端粒酶逆转录酶(hTERT)这一新的肿瘤相关抗原为基础的肿瘤免疫研究正在兴起。来源于hTERT的抗原肽与MHC-I分子结合后递呈在多种肿瘤细胞膜表面,在正常人或肿瘤患者体内外激发细胞毒性T细胞(CTL)反应。体内外实验表明,CTL能识别hTER... 以人端粒酶逆转录酶(hTERT)这一新的肿瘤相关抗原为基础的肿瘤免疫研究正在兴起。来源于hTERT的抗原肽与MHC-I分子结合后递呈在多种肿瘤细胞膜表面,在正常人或肿瘤患者体内外激发细胞毒性T细胞(CTL)反应。体内外实验表明,CTL能识别hTERT抗原肽并以MHC限制性方式特异性杀伤TERT阳性的多种肿瘤细胞,而对体内极少数TERT阳性的正常细胞如造血干细胞或激活的T淋巴细胞没有影响。在活动性肿瘤病人体内进行的Ⅰ期临床试验结果进一步证实引起自身免疫反应的可能性极小。这些结果表明,以hTERT这一新的肿瘤抗原为靶点的肿瘤免疫学治疗及预防具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶 肿瘤 免疫治疗 新靶点
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Expression of Telomerase Subunits in Gastric Cancer
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作者 陈凤花 胡丽华 +1 位作者 李一荣 王琳 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2005年第6期741-743,共3页
To detect the expression of telomerase subunits (human telomerase reverse transcriptase, human telomerase associated protein 1 and human telomerase RNA) in gastric cancer and to examine the role that different telom... To detect the expression of telomerase subunits (human telomerase reverse transcriptase, human telomerase associated protein 1 and human telomerase RNA) in gastric cancer and to examine the role that different telomerase subunits play in the gastric carcinogenesis, reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect telomerase suhunits messenger RNA in 24 samples of gastric cancer and corresponding non-cancerous tissue. The results showed that the positive rate of hTERT mRNA from gastric cancer and corresponding non-cancerous tissues was 100% and 25 %, respectively. The former was significantly higher than the latter (X^2 = 26.4, P〈0.01). The positive rate of hTEP1 mRNA from gastric cancer and corresponding non-cancerous tissues was 100 % and 91.7%, respectively and no significant difference was found between them (X^2 =2.1, P〉0.05). The positive rates of hTR for gastric cancer and corresponding non-cancerous tissues were both 100 % and no significant difference existed between them. It is concluded that in contrast to hTEP1 and hTR, the up-regulation of hTERT mRNA expression may play a more important role in the development of gastric cancer. 展开更多
关键词 gastric cancer human telomerase reverse transcriptase htert human telomerase associated protein 1 (hTEP1) human telomerase RNA (hTR)
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