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西安和郑州地区丙型肝炎患者的HCV基因分型 被引量：84
1
作者 霍艳英 徐德忠 +4 位作者 赵小宁 李如琳 刘蓬勃 王全楚 王歆 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第8期749-751,共3页
目的　了解西安和郑州地区丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型 ,比较两地基因型分布的差异 .方法　采用限制性长度多态性分析 (RFL P)法对采自西安地区的 4 6份和郑州地区的 4 0份 HCVRNA阳性标本进行 HCV基因型分型研究 .结果　西安地区 ... 目的　了解西安和郑州地区丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型 ,比较两地基因型分布的差异 .方法　采用限制性长度多态性分析 (RFL P)法对采自西安地区的 4 6份和郑州地区的 4 0份 HCVRNA阳性标本进行 HCV基因型分型研究 .结果　西安地区 4 6份标本中 ,2 5份 (5 4 .3% )为 1b型病毒 ,17份 (37.0 % )为 2 a型病毒 ,4份 (8.7% )为 1b/ 2 a混合型病毒 ;郑州地区 4 0份标本中 ,19份 (47.5 % )为 1b型 ,13份 (32 .5 % )为 2a型 ,3份 (7.5 % )为 1a型 ,4份 (10 .0 % )为 1b/ 2 a混合型病毒 ,1份 (2 .5 % )为 1a/ 1b混合型病毒 .结论　两地的优势株均为 HCV1b型 ,其次为 2 a型 ,郑州地区有 展开更多
关键词 西安地区 郑州地区 丙型肝炎 HcV 基因分型
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核酸扩增检测在血液筛查的初步应用 被引量：47
2
作者 黄呈辉 陈汝光 +3 位作者 黄建国 黎淦平 张健 赵文明 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期141-143,共3页
目的　为提高血站供血安全性 ,探讨核酸扩增检测在血站血液筛查中的可行性。方法　在酶联免疫吸附试验 (ELISA)常规筛查血液的基础上 ,采用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)方法 ,检测乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、丙型肝炎抗体 (抗 HCV)和人... 目的　为提高血站供血安全性 ,探讨核酸扩增检测在血站血液筛查中的可行性。方法　在酶联免疫吸附试验 (ELISA)常规筛查血液的基础上 ,采用荧光定量聚合酶链反应 (PCR)方法 ,检测乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、丙型肝炎抗体 (抗 HCV)和人免疫缺陷病毒抗体 (抗 HIV) 1/ 2呈阴性的献血者微量血浆汇集池标本 (2 0人份× 5 0 μl汇集 )中的丙肝病毒 (HCV)和乙肝病毒 (HBV)核酸 ,再对阳性汇集池中的标本进行单份检测。结果　 880 5份 (分 44 2个汇集池 )血液被检测HCVRNA ,结果有1例 (0 .0 1% )为阳性 ;144 1份血液被检测HBVDNA ,结果 6例 (0 .4% )为阳性。从标本汇集到筛查出单份阳性献血者大约需要 3d。结论　ELISA结合荧光定量PCR检测微量血浆汇集池标本的方法筛查血液HBV和HCV感染是可行的 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 c型肝炎样病毒属 供血者 基因扩增 血液筛查 ELISA PcR
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聚乙二醇干扰素α-2a与干扰素α-2a治疗慢性丙型肝炎疗效、安全性的评估 被引量：37
3
作者 徐道振 谢尧 +6 位作者 陆志檬 骆抗先 贾继东 王宇明 赵桂珍 张树林 张大志 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期221-224,共4页
目的　以干扰素α 2a(IFNα 2a ,罗荛愫 ,罗氏 )为对照 ,评估聚乙二醇干扰素α 2a(FEG IFNα 2a ,派罗欣 ,罗氏 )治疗中国慢性丙型肝炎的效果及其安全性和耐受性。方法　采用随机、开放和对照的多中心临床试验设计 ,将 2 0 8例慢性丙型... 目的　以干扰素α 2a(IFNα 2a ,罗荛愫 ,罗氏 )为对照 ,评估聚乙二醇干扰素α 2a(FEG IFNα 2a ,派罗欣 ,罗氏 )治疗中国慢性丙型肝炎的效果及其安全性和耐受性。方法　采用随机、开放和对照的多中心临床试验设计 ,将 2 0 8例慢性丙型肝炎患者随机分为PEG IFNα 2a组 (10 6例 )和IFNα 2a组 (10 2例 ) ,两组治疗前HCVRNA、基因型等临床资料具有可比性 ,以病毒学应答和生化应答作为疗效的主要评价指标。同时观察患者药物治疗后的不良反应。结果　PEG IFNα 2a组持续性病毒应答率 (SVR)显著高于IFNα 2a组 (分别是 4 1.5 1%和 16 .6 7% ,P <0 .0 0 0 1)。PEG IFNα 2a治疗HCV基因 1型和非基因 1型的SVR显著高于IFNα 2a组 (P =0 .0 0 3) ,PEG IFNα 2a治疗高病毒载量慢性丙型肝炎的SVR明显高于IFNα 2a组 (P =0 .0 0 0 3) ,但是低病毒载量的SVR两组之间差异无显著性 (P =0 .0 5 9)。PEG IFNα 2a与IFNα 2a有相似的不良反应 ,不良反应间差异无显著性 ,两组患者均无发生不良事件。结论　PEG IFNα 2a对慢性丙型肝炎患者的疗效优于传统干扰素IFNα 2a ,在中国慢性丙型肝炎人群中具有较好的安全性和耐受性。 展开更多
关键词 IFNΑ 慢性丙型肝炎 治疗 干扰素Α-2A 患者 不良反应 疗效 差异 对照 目的
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HLA-A2肽四聚体的构建及其在乙、丙型肝炎中的初步应用 被引量：35
4
作者 朴文花 何豫 +7 位作者 席宏丽 孙新婷 张恒辉 徐京航 赵鸿 许文燮 李在琉 王贵强 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第21期1818-1822,共5页
目的　分别构建乙型肝炎病毒 (HBV)和丙型肝炎病毒 (HCV)特异的HLA A2肽四聚体 ,为检测乙、丙型肝炎患者体内特异性的细胞毒T细胞 (CTL)提供直接、有效的方法 ,指导临床用药。方法　分别构建含有HLA A2 BSP(含有 15个可供识别生物素化... 目的　分别构建乙型肝炎病毒 (HBV)和丙型肝炎病毒 (HCV)特异的HLA A2肽四聚体 ,为检测乙、丙型肝炎患者体内特异性的细胞毒T细胞 (CTL)提供直接、有效的方法 ,指导临床用药。方法　分别构建含有HLA A2 BSP(含有 15个可供识别生物素化的氨基酸位点 )和 β2微球蛋白(β 2m)基因的原核表达载体 ,并进行表达、复性、鉴定及纯化。再分别将HBV和HCV特异性短肽与HLA A2 BSP和 β 2m蛋白在体外进行耦合 ,该复合物经纯化浓缩后进行生物素化。生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体 ,此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体 ,最后进行流式细胞仪检测。结果　获得了高效、稳定的pBV2 2 0 HLA A2 BSP和 pBV2 2 0 β 2m原核表达载体 ,表达量分别占菌体的 4 6 %和 2 6 %左右 ;纯度达 90 %以上。构建的四聚体可成功的检测急、慢性乙型和丙型肝炎患者中特异性的CTL ,急性HBV感染时CTL占 1 84 % ,慢性HBV感染时CTL占0 0 2 %～ 0 6 8% ,慢性HCV感染的CTL占 0 0 2～ 0 72 %。结论　高效、稳定的pBV2 2 0 HLA A2 BSP和 pBV2 2 0 β 2m原核表达载体大量的表达可用于构建各种肽特异性的四聚体复合物 ;在体外构建的MHC Ⅰ类分子四聚体 ,为特异性细胞毒T细胞的检测提供有效的工具。 展开更多
关键词 HLA-A2 四聚体 cTL 丙型肝炎 特异性 体外 HcV 原核表达载体 纯化 复性
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丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活SV40病毒早期启动子/增强子的研究 被引量：32
5
作者 刘妍 成军 +3 位作者 邵得志 王琳 钟彦伟 夏小兵 《军医进修学院学报》 CAS 2001年第3期186-188,共3页
目的 :探讨丙型肝炎病毒核心蛋白的反式激活作用。方法 :以重组质粒pcDNA3 core(含有HCV核心蛋白编码基因 )转染HepG2细胞 ,从转录和翻译水平鉴定核心蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2细胞 ,检测 β 半乳糖苷酶表达活性 ... 目的 :探讨丙型肝炎病毒核心蛋白的反式激活作用。方法 :以重组质粒pcDNA3 core(含有HCV核心蛋白编码基因 )转染HepG2细胞 ,从转录和翻译水平鉴定核心蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pSV lacZ共转染HepG2细胞 ,检测 β 半乳糖苷酶表达活性 ,酶的活性反映了表达的核心蛋白对SV40病毒早期启动子 /增强子功能的影响。结果 :质粒pcDNA3 core在HepG2细胞瞬时表达核心蛋白 ,共转染实验中pcDNA3 core组 β 半乳糖苷酶的表达是空质粒对照的 5 4倍。结论 :HepG2细胞中表达的核心蛋白具有反式激活SV40早期启动子 /增强子的特性 。 展开更多
关键词 反式激活 遗传学 多瘤病毒 猕猴 丙型肝炎病毒核心蛋白 丙型肝炎 启动子/增强子 HcV
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丙型肝炎病毒核心蛋白与转位蛋白相互作用的研究 被引量：30
6
作者 李克 王琳 +9 位作者 成军 陆荫英 张玲霞 牟劲松 洪源 刘妍 段惠娟 王刚 李莉 陈菊梅 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期673-677,共5页
目的　本文为了探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白 (core)在肝肿瘤中起作用的分子机制 ,研究核心蛋白是否与肿瘤相关蛋白的相互作用。方法　应用酵母双杂交系统 3构建HCV核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配... 目的　本文为了探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白 (core)在肝肿瘤中起作用的分子机制 ,研究核心蛋白是否与肿瘤相关蛋白的相互作用。方法　应用酵母双杂交系统 3构建HCV核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配合 ,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出 30个克隆 ,对既能在四缺营养缺陷培养基上生长 (SD/ Trp Leu His Ade) ,又能在涂有x α gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落 ,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后测序 ,进行生物信息学分析。发现一个可以引起染色体转位的基因即与肿瘤发生有关的基因转位蛋白基因 (Translin)同源。为了进一步证实转位蛋白基因所表达蛋白能与HCV核心蛋白相互作用 ,网织红细胞裂解物进行体外翻译、蛋白之间的免疫共沉淀。结果　结果显示 ,转位蛋白不但在酵母双杂交中能与HCV核心蛋白相互作用 ,而且在体外翻译后也能相互作用。结论　HCV核心蛋白可以和转位蛋白相互作用 ,推测此蛋白可能在HCV致癌中起一定作用 ,部分解释了HCV引起肿瘤的发病机制。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 转位蛋白 相互作用 研究
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丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达 被引量：25
7
作者 李克 王琳 +3 位作者 成军 张玲霞 陆荫英 李莉 《军医进修学院学报》 CAS 2002年第1期1-3,共3页
目的 :为探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因。方法 :用多聚酶链反应 (PCR)的方法在HCV全长质粒 pBRTM HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收连接到酵... 目的 :为探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因。方法 :用多聚酶链反应 (PCR)的方法在HCV全长质粒 pBRTM HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收连接到酵母表达质粒 pGBKT7中表达。提取酵母蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析。结果 :成功构建HCV核心蛋白基因酵母表达载体 ,Western免疫印迹显示了HCV核心蛋白在酵母细胞中表达。表达产物在胞内存在 ,分子量 2 2 0 0 0ku左右。结论 :HCV核心蛋白在酵母中表达成功。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒属 病毒核心蛋白质类 基因表达 载体 酵母
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量：13
8
作者 刘妍 段惠娟 +5 位作者 成军 王建军 陆荫英 牟劲松 王琳 张玲霞 《军医进修学院学报》 CAS 2003年第2期81-83,共3页
目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5A的反式激活作用。方法 :扩增HCVNS5A基因 ,构建HCVNS5A基因真核表达载体 pcDNA3 1( ) NS5A ;并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法检测转染细胞中HCVNS5A蛋白的瞬时表达 ;与报告... 目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5A的反式激活作用。方法 :扩增HCVNS5A基因 ,构建HCVNS5A基因真核表达载体 pcDNA3 1( ) NS5A ;并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法检测转染细胞中HCVNS5A蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒 pCAT3- promoter共转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附方法检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果 :质粒pcDNA3 1( ) NS5A在HepG2细胞瞬时表达HCVNS5A蛋白 ,共转染实验中 pcDNA3 1( ) NS5A组的CAT表达活性是空质粒对照组的 3 8倍。结论 :构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白 ,并能够反式激活SV4 0病毒早期启动子。本研究为进一步克隆HCVNS5A蛋白反式激活的靶基因 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白 NS5A反式激活SV40病毒 多瘤病毒
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肝炎病毒感染与肝门部胆管癌发病关系的探讨 被引量：4
9
作者 刘小方 邹声泉 裘法祖 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期420-422,T004,共4页
目的　探讨乙型肝炎 (乙肝 )和丙型肝炎 (丙肝 )病毒感染在肝门部胆管癌发病中的作用。　方法　采用免疫组织化学方法对 6 8例石蜡包埋肝门部胆管癌患者手术标本中乙肝病毒X蛋白和丙肝病毒C蛋白水平进行检测 ,并结合临床资料进行分析。... 目的　探讨乙型肝炎 (乙肝 )和丙型肝炎 (丙肝 )病毒感染在肝门部胆管癌发病中的作用。　方法　采用免疫组织化学方法对 6 8例石蜡包埋肝门部胆管癌患者手术标本中乙肝病毒X蛋白和丙肝病毒C蛋白水平进行检测 ,并结合临床资料进行分析。　结果　 6 8例肝门部胆管癌中乙肝病毒X蛋白阳性率为 8 8% (6 / 6 8) ,丙肝病毒C蛋白阳性率为 35 3% (2 4 / 6 8) ,两者均阳性 1例(1 5 % ) ;乙肝、丙肝病毒感染的肝门部胆管癌在分化程度 (χ2 =8 7,P <0 0 1)、浸润程度 (χ2 =6 7 8,P<0 0 1)、淋巴结转移 (χ2 =4 3,P <0 0 5 )、根治程度 (χ2 =5 1,P <0 0 5 )与非病毒感染的肝门部胆管癌比较差异有显著意义。　结论　乙肝病毒X蛋白、丙肝病毒C蛋白可能在乙肝、丙肝病毒感染肝门部胆管癌的发病原因中起重要作用。乙肝、丙肝病毒感染的肝门部胆管癌恶性程度高 。 展开更多
关键词 肝炎病毒感染 肝门部胆管癌 发病关系 乙型肝炎病毒 c型肝炎样病毒属
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RNAi对HCV ns5b基因表达的抑制作用 被引量：4
10
作者 雷迎峰 薛小平 +2 位作者 尹文 张伟 吕欣 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第12期1082-1084,共3页
目的 :研究RNAi(RNAinterference)效应对HCVns5b基因表达的抑制作用 .方法 :根据HCVns5b基因序列及其二级结构特征 ,依据Tuschl等设计siRNA的原则 ,确定并合成了针对ns5b基因的siRNAs;利用电转化方法将合成的siRNAs转染NS5B EGFPHepG2... 目的 :研究RNAi(RNAinterference)效应对HCVns5b基因表达的抑制作用 .方法 :根据HCVns5b基因序列及其二级结构特征 ,依据Tuschl等设计siRNA的原则 ,确定并合成了针对ns5b基因的siRNAs;利用电转化方法将合成的siRNAs转染NS5B EGFPHepG2细胞株 ,以未转染的细胞为对照 ;细胞爬片后经DAPI染色 ,荧光显微镜下观察和半定量RT PCR法检测siRNAs的抑制效应 .结果 :化学合成的siRNAs可以抑制HCVns5b基因的表达 ,效率可达 70 %-80 %以上 .结论 :在细胞水平上 ,化学合成的siRNAs可以抑制HCVns5b基因的表达 。 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属 非结构区5b基因 小干扰性RNA 抑制效应
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两种定量测定丙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应方法比较 被引量：5
11
作者 王露楠 邓巍 李金明 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期146-147,共2页
目的　观察荧光定量聚合酶链反应 (PCR)PE5 70 0测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法　所用临床评价血清盘由 36份血清组成 ,其中包括 1个 5倍倍比稀释系列 (7份 )、9份阴性血清和 2 0份阳性血清。使用临床评价血清盘比较 2种测定方法的... 目的　观察荧光定量聚合酶链反应 (PCR)PE5 70 0测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法　所用临床评价血清盘由 36份血清组成 ,其中包括 1个 5倍倍比稀释系列 (7份 )、9份阴性血清和 2 0份阳性血清。使用临床评价血清盘比较 2种测定方法的重复性、线性和临床样本符合情况。结果　实时荧光定量方法和全自动PCR ELISA内标法检测系统的线性回归系数分别为 0 .9732和0 .9995。全自动PCR酶联免疫吸附 (ELISA)内标法检测系统不同含量的样本批内变异系数 (log10 )均比实时荧光定量方法低。临床样本的检测实时荧光定量方法与全自动PCR ELISA内标法检测系统的相关系数为 0 .845。结论　实时荧光定量方法具有良好的线性和重复性 ,同时与全自动PCR 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属 丙型肝炎 HcV 聚合酶链反应 病毒RNA
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丙型肝炎病毒ns5b基因的克隆、表达及鉴定 被引量：4
12
作者 刘卫东 薛小平 +2 位作者 雷迎峰 尹文 吕欣 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第14期1265-1267,共3页
目的 :构建HCVns5b基因的重组原核表达质粒 ,并获得NS5B蛋白的高效表达 ,为制备抗NS5B抗体及以其为靶位的抗HCV感染研究创造条件 .方法 :利用PCR技术扩增HCVns5b基因 ,XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pRSETA上 ,转... 目的 :构建HCVns5b基因的重组原核表达质粒 ,并获得NS5B蛋白的高效表达 ,为制备抗NS5B抗体及以其为靶位的抗HCV感染研究创造条件 .方法 :利用PCR技术扩增HCVns5b基因 ,XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后连接到经同样酶切的原核表达载体pRSETA上 ,转化大肠杆菌JM 10 9菌株 ,获得阳性重组质粒pRSETA ns5b ,阳性质粒转化BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE和WesternBlot电泳进行鉴定 ,并以薄层扫描分析对其定量 .结果 :成功构建了HCVNS5B蛋白表达载体 pRSETA ns5b,经诱导明显表达出6His NS5B融合蛋白 ,表达产物主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白 2 5 % ,Western Blot结果显示表达蛋白保持活性 .结论 :HCVNS5B蛋白在体外得到了有效表达 . 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属 非结构区5B蛋白 重组融合蛋白质类 基因表达
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HCVC区基因在SP2/0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达 被引量：4
13
作者 张景霞 周红超 +2 位作者 徐德忠 黄莺 闫永平 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第24期2236-2239,共4页
目的　观察HCVC区基因在SP2 / 0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达情况 .方法　构建pEF HCVC重组质粒 ,转染SP2 / 0细胞 ,经G4 18进行筛选 ,建立稳定转染pEF HCVC的SP2 / 0细胞系 .并将转染后的SP2 / 0细胞接种于BALB/c小鼠皮下产生浆细胞瘤 .... 目的　观察HCVC区基因在SP2 / 0细胞及荷瘤小鼠瘤内的表达情况 .方法　构建pEF HCVC重组质粒 ,转染SP2 / 0细胞 ,经G4 18进行筛选 ,建立稳定转染pEF HCVC的SP2 / 0细胞系 .并将转染后的SP2 / 0细胞接种于BALB/c小鼠皮下产生浆细胞瘤 .结果　用斑点杂交方法检测转染后的细胞 ,有HCVmRNA .免疫组化检测瞬时转染以及稳定转染的SP2 / 0细胞涂片均发现存在有阳性信号 .另外 ,对瘤组织进行免疫组化检测 ,发现有HCVC蛋白表达 .结论　pEF HCVC重组质粒可以在SP2 / 0细胞中长期稳定表达 ,也可以在BALB/c小鼠浆细胞瘤内表达 . 展开更多
关键词 HcVc区基因 SP2/0细胞 荷瘤小鼠 丙型肝炎 基因表达
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丙型肝炎病毒1b型NS5A区基因复杂性与干扰素α疗效的关系 被引量：2
14
作者 刘斌 王宇明 +3 位作者 陈嵩 郭焕珍 黄燕萍 顾长海 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期90-93,共4页
目的　探讨丙型肝炎病毒 1b型 (HCV 1b)NS5A区基因的复杂性与干扰素α(IFN α)治疗效果之间的关系。方法　以 13例接受IFN α治疗的HCV 1b感染患者为研究对象 ,治疗前血清提取的RNA采用逆转录套式PCR (RT nested PCR)扩增HCVNS5A区基因 ... 目的　探讨丙型肝炎病毒 1b型 (HCV 1b)NS5A区基因的复杂性与干扰素α(IFN α)治疗效果之间的关系。方法　以 13例接受IFN α治疗的HCV 1b感染患者为研究对象 ,治疗前血清提取的RNA采用逆转录套式PCR (RT nested PCR)扩增HCVNS5A区基因 ,PCR产物纯化后与T载体连接并克隆入大肠杆菌 ,随机挑选 30个阳性克隆菌落 ,每一克隆菌落再进行PCR扩增 ,30个克隆的PCR产物在同一聚丙烯酰胺凝胶上采用单链构象多态性分析 (SSCP)分析和异源性双体分析 (HD)筛选HCVNS5A区克隆型 ,克隆型的多少反映HCVNS5A区基因的复杂程度。结果　完全应答组平均 6 .3种克隆型 ;部分应答组平均 8.6种克隆型 ;无应答组平均 15 .8种克隆型。结论　HCVNS5A区基因的复杂程度与IFN α的治疗效果呈负相关。 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属 基因 干扰素Α 疗效 NS5A区 1b型
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Gibbs抽样在HBV、HCV感染与肝癌关系的病例-对照研究meta分析中的应用 被引量：2
15
作者 周旭毓 方积乾 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期165-169,共5页
【目的】对中国人乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)及其双重感染与原发性肝癌关系的病例 对照研究结果进行定量综合 ,探讨Gibbs抽样方法在meta分析中的应用价值。【方法】制订meta分析的文献纳入和剔除标准 ,经分析筛选 ,有 16... 【目的】对中国人乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)及其双重感染与原发性肝癌关系的病例 对照研究结果进行定量综合 ,探讨Gibbs抽样方法在meta分析中的应用价值。【方法】制订meta分析的文献纳入和剔除标准 ,经分析筛选 ,有 16个研究纳入。在WinBUGS上由二项分布建模 ,拟合 3个Logistic模型 ,通过Gibbs抽样得到 3组 (HBV感染、HCV感染及双重感染 )参数的后验分布。【结果】HBV感染的效应合并值 μ10 为 2 86 (合并优势比OR为 18 0 5 ,95 %可信区间CI为 10 71～ 2 8 80 ) ,HCV感染的效应合并值 μ0 1为 2 4 9(合并OR为 13 11,95 %CI为 5 2 8～ 2 7 0 2 ) ,双重感染的效应合并值μ11为 4 4 9(合并OR为 93 5 4 ,95 %CI为 4 9 4 4～ 16 7 30 )。【结论】meta分析结果表明 ,HBV、HCV感染均为中国人原发性肝癌发生的主要病原学因素。双重感染大大增加发生原发性肝癌的危险性。Gibbs抽样能灵活地构造模型对复杂问题进行meta分析 ,特别是当经典方法不适用时。 展开更多
关键词 META分析 Bibbs后样 病例-对照研究 肝细胞癌 病因学 肝炎病毒 乙型肝炎样病毒鼠 双重感染
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抑制性RNA在细胞内对丙型肝炎病毒5′非编码区翻译启动的抑制作用 被引量：2
16
作者 梁雪松 周永兴 +2 位作者 连建奇 聂青和 贾战生 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期660-662,共3页
目的　研究核糖体内部进入位点 (IRES)特异性抑制性RNA(IRNA)在细胞内对HCV 5′非编码区 (NCR)IRES翻译启动功能的抑制作用。方法　通过脂质体介导的基因转染方法 ,转染IRNA真核表达体与带荧光素 (luc)的靶基因真核表达载体于人肝癌细胞... 目的　研究核糖体内部进入位点 (IRES)特异性抑制性RNA(IRNA)在细胞内对HCV 5′非编码区 (NCR)IRES翻译启动功能的抑制作用。方法　通过脂质体介导的基因转染方法 ,转染IRNA真核表达体与带荧光素 (luc)的靶基因真核表达载体于人肝癌细胞 (HHCC) ,应用发光仪检测luc报告基因的表达活性。结果　IRNA能有效地抑制由HCV 5′NCRIRES介导的luc基因表达 ,抑制率最高达90 %,最低 5 0 %,而IRNA突变体 (mIRNA)无此活性。结论　IRES特异性IRNA能有效地抑制HCV 5′NCR介导的蛋白翻译启动作用。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 c型肝炎样病毒属 抑制性RNA 基因治疗
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抗HCV不同位点核酶细胞内对病毒基因的抑制作用 被引量：2
17
作者 焦成松 周永兴 +1 位作者 贾战生 冯志华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期471-473,共3页
为探讨核酶细胞内对HCV基因表达的抑制作用 ,笔者设计合成了两个针对HCV 5′NCR2 13位点和C区 498位点的锤头结构核酶 ,并插入真核表达载体 pcDNA3。应用WISH nc转基因细胞模型 ,通过脂质体法转染核酶表达载体 ,经发光检测仪测定荧虫素... 为探讨核酶细胞内对HCV基因表达的抑制作用 ,笔者设计合成了两个针对HCV 5′NCR2 13位点和C区 498位点的锤头结构核酶 ,并插入真核表达载体 pcDNA3。应用WISH nc转基因细胞模型 ,通过脂质体法转染核酶表达载体 ,经发光检测仪测定荧虫素酶报告基因的表达变化以反应病毒基因的抑制率。结果显示 ,核酶2 13和核酶 498均能在细胞内降低荧虫素酶的表达 ,转染后 7日内的抑制率为 42 .94%～ 6 7.81%。提示增加核酶作用位点可防止病毒基因突变后的切割失效 。 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属 核酶 荧虫素酶 丙型肝炎 抗HcV
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丙型肝炎病毒体外感染肝癌细胞株HepG2的初步研究 被引量：2
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作者 闵峰 王素美 +2 位作者 郝飞 王宇明 刘冰 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期330-332,共3页
目的　研究人肝癌细胞株HepG2对丙型肝炎病毒 (HCV)的易感性 ,建立细胞感染模型。方法　将人肝癌细胞株HepG2与慢性丙型肝炎患者血清共同温育 6～ 8h ,收集不同时相点标本 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法分别检测细胞内或上清液中正... 目的　研究人肝癌细胞株HepG2对丙型肝炎病毒 (HCV)的易感性 ,建立细胞感染模型。方法　将人肝癌细胞株HepG2与慢性丙型肝炎患者血清共同温育 6～ 8h ,收集不同时相点标本 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法分别检测细胞内或上清液中正负链RNA ,免疫组织化学法检测细胞内HCVNS3、NS5特异性抗原的表达情况 ,以及原位杂交法检测细胞内HCV负链RNA。结果　接种感染血清 3～ 3 5d ,可在细胞内或培养上清液中检出HCV正负链RNA ;HCVNS3、NS5特异性抗原能在感染细胞内稳定表达 ,阳性物质位于胞浆中 ;原位杂交法证实细胞内存在负链RNA ,也位于胞浆中。结论　人肝癌细胞株HepG2不但对HCV易感 。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 体外感染 肝癌 HEPG2细胞 RT-PcR
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丙型肝炎病毒基因分型及核心区序列同源性分析 被引量：2
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作者 张庶民 庄辉 +3 位作者 李河民 Anders Widell 祁自柏 张华远 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期153-155,共3页
目的　研究不同地区丙型肝炎病毒 (HCV)基因型构成及基因变异。方法　HCV感染者血清 6 4份分别采自中国河南省 (2 5份 )和河北省 (18份 ) ,以及瑞典 (11份 )和德国 (10份 ) ,分别进行HCVRNA和基因型检测 ,对 11株HCV分离株核心区基因序... 目的　研究不同地区丙型肝炎病毒 (HCV)基因型构成及基因变异。方法　HCV感染者血清 6 4份分别采自中国河南省 (2 5份 )和河北省 (18份 ) ,以及瑞典 (11份 )和德国 (10份 ) ,分别进行HCVRNA和基因型检测 ,对 11株HCV分离株核心区基因序列进行测定 ,并用软件分析各地域HCV核心区基因序列的同源性。结果　从中国两省和欧洲两国分离的HCV基因型构成不同 ,在我国血清标本中发现 1b和 2a亚型 ,在瑞典和德国标本中还发现 1a、2c和 3a亚型。在同一地区分离的同一基因型HCV核心区序列的同源性高于不同地区。结论　HCV基因型的构成与地域有关 。 展开更多
关键词 基因型 序列同源性 序列分析 RNA 丙型肝炎 HcV
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新型多抗原肽检测丙型肝炎病毒基因高变区1抗体 被引量：1
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作者 王永刚 郝飞 +1 位作者 黄燕萍 王宇明 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期103-105,共3页
目的　寻求一种新的检测丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (HCV)感染血清中抗高变区 1(HVR1)抗体的方法 ,并探讨其与病毒血症的关系。方法　分别采用合成的HCV BJ株 (1b型 )HVR1390～ 411aa序列共 2 2个氨基酸的线性表位多肽 (LP)及多抗原肽 (MAP ... 目的　寻求一种新的检测丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (HCV)感染血清中抗高变区 1(HVR1)抗体的方法 ,并探讨其与病毒血症的关系。方法　分别采用合成的HCV BJ株 (1b型 )HVR1390～ 411aa序列共 2 2个氨基酸的线性表位多肽 (LP)及多抗原肽 (MAP ,对称 8分支 )为抗原 ,以间接酶联免疫吸附法 (ELISA) ,检测 5 9份丙肝患者血清及 75份其他类型肝炎患者血清中相应抗体 ;结合对血清HCVRNA检测情况进行分析。结果　 5 9份抗HCV阳性血清中 ,抗LP及抗MAP的阳性检出率分别为 2 9%和 5 8% ,其反应吸光度A4 50 均值为 :0 .145± 0 .16 6及 0 .46 1± 0 .5 90 ,两者差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;75份其他类型肝炎患者血清中 ,抗MAP阳性 5份 ,其中 4份HCVRNA亦阳性 ;40份抗HCV阳性血清中 ,检出HCVRNA阳性 2 3份 (5 7.5 % )。血清抗HVR1检出与相应血清中HCVRNA的存在无显著关联性 (P >0 .0 5 )。结论　设计并合成的针对于HCVHVR1序列的MAP显示有良好的反应原性 ,可以作为检测抗HVR1的抗原来源之一。 展开更多
关键词 丙型肝炎 多抗原肽 诊断 HcV-HVR1抗体
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