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三七皂甙对造血细胞GATA-1和GATA-2转录调控蛋白的诱导作用 被引量：59
1
作者 高瑞兰 徐卫红 +2 位作者 林筱洁 陈小红 吴超群 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期281-284,共4页
目的　观察三七总皂甙 (PNS)对锌指结构GATA族转录调控蛋白的诱导作用 ,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径。方法　选择恰当浓度的PNS作用于正常人骨髓单个核细胞、HL 6 0、K5 6 2、CHRF 2 88和Meg 0 1细胞 ,2周后提取核蛋白 ,用GATA 1... 目的　观察三七总皂甙 (PNS)对锌指结构GATA族转录调控蛋白的诱导作用 ,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径。方法　选择恰当浓度的PNS作用于正常人骨髓单个核细胞、HL 6 0、K5 6 2、CHRF 2 88和Meg 0 1细胞 ,2周后提取核蛋白 ,用GATA 1和GATA 2抗体行Western印迹杂交 ,检测GATA 1和GATA 2的表达情况。用3 2 P标记的GATA双链寡核苷酸探针行电泳带移动阻滞试验 (EMSA)和抗体胶移动实验 ,检测GATA DNA复合物及亚型。结果　PNS能够促进人骨髓红系、粒系祖细胞增殖。Western印迹杂交显示PNS诱导K5 6 2、CHRF 2 88和Meg 0 1细胞的GA TA 1和GATA 2蛋白表达量增高 ,分别是未经处理细胞的 1 .5～ 2 .8倍和 2 .0～ 3.1倍 ;EMSA结果表明PNS诱导三株细胞的GATA DNA结合复合物条带密度明显增高 ;HL 6 0细胞在PNS处理前后均未显示GATA活性。抗体胶移动实验证明PNS诱导的GATA DNA复合物的主要成分为GATA 1和GATA 2。免疫沉淀显示PNS诱导的GATA 1和GATA 2蛋白均处于磷酸化的功能激活状态。结论　PNS可通过诱导GATA 1和GATA 2蛋白合成增加 ,与相关基因上游调控区的启动子和 (或 )增强子结合的活性增高 ,而调控与造血细胞增殖。 展开更多
关键词 三七皂甙 造血细胞 PNS GATA-1 GATA-2 调控蛋白 诱导作用 转录调控
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BrdU体外标记大鼠骨髓间充质干细胞的研究 被引量：40
2
作者 冯善伟 姚晓黎 +3 位作者 李中 柳太云 黄文 张成 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期184-186,共3页
目的探讨连续培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)最佳标记时间、剂量。方法差速贴壁法对SD鼠MSCs进行体外传代培养;第6代细胞行流式细胞仪鉴定细胞的表面抗原;以终浓度分别为5、10、15μmol/L的BrdU检测最佳标记剂... 目的探讨连续培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)最佳标记时间、剂量。方法差速贴壁法对SD鼠MSCs进行体外传代培养;第6代细胞行流式细胞仪鉴定细胞的表面抗原;以终浓度分别为5、10、15μmol/L的BrdU检测最佳标记剂量;在细胞生长融合前72、48、36、24、12、3h加入BrdU,使终浓度为10μmol/L,并分别孵育至细胞融合,测定BrdU的标记率,找出最佳标记时间;免疫组化分析BrdU标记率。结果流式细胞仪检测所标记的细胞表达CD29和CD44,不表达CD11b和CD45;终浓度为10μmol/L和孵育48hBrdU标记率均>98%,并且连续传5代均可检测到。结论传代后贴壁生长的梭形细胞为MSCs,终浓度为10μmol/L和孵育48hBrdU标记率均>98%,且可以连续检测到,提示BrdU标记可用于MSCs移植入体内后存活、生长和分化的动态观察。 展开更多
关键词 尿嘧啶核苷酸类 流式细胞术 细胞 培养的 细胞分离 造血干细胞 骨髓细胞
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骨髓间质干细胞移植治疗原发性扩张型心肌病的疗效与安全性 被引量：44
3
作者 王建安 谢小洁 +5 位作者 何红 孙勇 蒋峻 骆荣华 樊友启 董樑 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期107-110,共4页
目的研究自身骨髓间质干细胞经冠状动脉内移植治疗原发性扩张型心肌病的临床疗效及其安全性。方法入选24例原发性扩张型心肌病患者,随机分为对照组和细胞移植组各12例,两组均予常规抗心衰药物治疗。细胞移植组接受自身骨髓间质干细胞冠... 目的研究自身骨髓间质干细胞经冠状动脉内移植治疗原发性扩张型心肌病的临床疗效及其安全性。方法入选24例原发性扩张型心肌病患者,随机分为对照组和细胞移植组各12例,两组均予常规抗心衰药物治疗。细胞移植组接受自身骨髓间质干细胞冠状动脉内移植,对照组冠状动脉内注射等量生理盐水。两组术前、术后48H、3个月和6个月分别检测血清白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子Α(TNFΑ)和高敏C反应蛋白(HSCRP),术前、术后3个月和6个月分别行血浆脑钠肽(BNP)、超声心动图、动态心电检测和6MIN步行试验。结果细胞移植组术后上述三时间点的血清IL6、TNFΑ和HSCRP与对照组和自身术前比较均无统计学意义(P>0.05)。细胞移植组术后3个月和6个月BNP水平,较自身术前增高[(378.10±147.47),(420.40±148.50)比(292.40±148.54)NG/L,P<0.05],但较对照组降低,差异具统计学意义[3个月:(378.10±147.47)比(473.10±106.31)NG/L;6个月:(420.40±148.50)比(544.60±93.11)NG/L,P<0.05]。术后6个月,细胞移植组6MIN步行路程增加,与对照组和自身术前比较亦具统计学意义[(519.00±43.28)比(396.33±42.19),(464.00±76.5)M,P<0.05]。术后心超示两组间左室舒张末容积和左室射血分数无统计学意义(P>0.05)。围手术期及术后6个月随访中未见任何严重致心律失常等不良反应发生。随访期间两组患者生存率无统计学意义。结论自身骨髓间质干细胞经冠状动脉内移植治疗原发性扩张型心肌病,可降低血浆BNP水平,延长6MIN步行路程,在一定程度上增加运动耐量,无明显的致心律失常、栓塞和免疫炎症反应。 展开更多
关键词 心肌疾病 造血干细胞 细胞移植
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趋化素样因子(CKLF1)对骨髓细胞增殖活性的研究 被引量：41
4
作者 韩文玲 芮珉 +5 位作者 张颖妹 陈英玉 钟英成 狄春辉 宋泉声 马大龙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期119-122,共4页
目的 研究趋化素样因子 1(CKLF1)对造血功能的调节作用。方法 利用 MTT法，检测 CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中，对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用；并在半固体培养基中，观察其对人低密度骨髓细胞集落... 目的 研究趋化素样因子 1(CKLF1)对造血功能的调节作用。方法 利用 MTT法，检测 CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中，对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用；并在半固体培养基中，观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS-7细胞表达的 CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖，并能促进人骨髓细胞的集落形成，与 GM-CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干 展开更多
关键词 趋化素样因子1 造血干细胞 集落形成 骨髓细胞增殖
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枸杞多糖对小鼠骨髓造血干细胞、粒单系祖细胞增殖分化的影响 被引量：28
5
作者 周志文 周金黄 邢善田 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期44-46,共3页
枸杞多糖(LBP)10mg·kg^(-1)·d^(-1)ip,连续3d,可促进正常小鼠骨髓造血干细胞(CFU-S)增殖,明显增加骨髓粒单系祖细胞(CFU-GM)数量,促进CFU-GM向粒系分化。
关键词 枸杞 造血干细胞 粒单系祖细胞
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当归补血汤调控骨髓造血机理及对造血微环境的影响 被引量：39
6
作者 薄华本 陈启助 +3 位作者 沈晗 吴凤麟 邵宏伟 黄树林 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期824-828,共5页
目的探讨当归补血汤调控骨髓造血的机理。方法 50只ICR小鼠随机分为5组,每组10只。除正常组外其他组小鼠连续腹腔注射多柔比星4 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3 d,正常组给予同等体积的生理盐水。注射多柔比星3 d后,当归补血汤低、中... 目的探讨当归补血汤调控骨髓造血的机理。方法 50只ICR小鼠随机分为5组,每组10只。除正常组外其他组小鼠连续腹腔注射多柔比星4 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3 d,正常组给予同等体积的生理盐水。注射多柔比星3 d后,当归补血汤低、中、高剂量组分别连续腹腔注射补血汤5、15、25 g·kg^(-1)·d^(-1),共7 d,正常组和模型组给予同等体积的生理盐水。给药结束制备骨髓单细胞悬液,体外培养观察骨髓基质细胞生长状态,流式细胞仪检测骨髓细胞增殖和黏附情况。结果当归补血汤组骨髓基质细胞生长状态好于正常组和模型组,骨髓细胞之间的聚集明显。模型组聚集细胞数占总细胞比例为(4.00±1.10)%,低于正常组[(3.07±2.35)%],但无显著差异(P>0.05)。当归补血汤低、中、高剂量组聚集细胞数目占总细胞数比例分别为(5.40±2.91)%、(7.36±2.32)%和(9.27±3.35)%,均高于模型组(P<0.05或P<0.01)。正常组G2期细胞比例高于其他四组(P<0.05),当归补血汤各剂量组G2/M期细胞比例与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论当归补血汤可能通过改善基质细胞的状态、增强骨髓细胞之间的黏附来改善骨髓造血微环境。 展开更多
关键词 当归补血汤 骨髓 造血干细胞 细胞黏附 造血微环境
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黄芪和当归的主要活性成分配伍促进衰老造血干细胞增殖作用的研究 被引量：38
7
作者 朱嘉欢 黄小平 邓常清 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期111-119,共9页
目的探讨黄芪和当归的主要活性成分黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和阿魏酸配伍对衰老造血干细胞(HSCs)增殖的影响,并从细胞周期调控研究其作用机制。方法以三丁基过氧化氢(T-BHP)构建小鼠HSCs衰老模型,研究不同质量浓度... 目的探讨黄芪和当归的主要活性成分黄芪甲苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和阿魏酸配伍对衰老造血干细胞(HSCs)增殖的影响,并从细胞周期调控研究其作用机制。方法以三丁基过氧化氢(T-BHP)构建小鼠HSCs衰老模型,研究不同质量浓度5种活性成分对HSCs衰老和增殖的影响,寻找可促进细胞增殖的主要活性成分。在此基础上,采用正交试验研究5种活性成分配伍对HSCs衰老和增殖的影响,寻找5种活性成分促进细胞增殖的合理配伍。最后,采用HSCs衰老模型,制备黄芪-当归1∶1配伍含药血浆,设立对照组、模型组、空白血浆组、阿魏酸组、黄芪甲苷组、芒柄花素组、毛蕊异黄酮组、毛蕊异黄酮苷组、活性成分配伍组、黄芪-当归1∶1含药血浆组,药物作用于衰老细胞,以SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法测定HSCs衰老率,CCK-8法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting法检测Cyclin D1、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白表达。结果阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素均可显著促进衰老HSCs增殖和降低细胞衰老率,而毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷单独应用对HSCs增殖和细胞衰老率无显著影响。正交试验发现,以阿魏酸、芒柄花素和黄芪甲苷为基础因子,毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷为次要因子进行配伍的5种活性成分组合促细胞增殖和降低细胞衰老率的作用最强。阿魏酸、黄芪甲苷、芒柄花素、活性成分配伍、含药血浆均可降低细胞衰老率,使G0/G1期细胞减少,G2/M+S期细胞增加,并使Cyclin D1和CDK4蛋白表达增强。以上效应以活性成分配伍组和含药血浆组最强。结论黄芪和当归的主要活性成分阿魏酸、黄芪甲苷和芒柄花素对衰老HSCs具有促增殖和改善衰老作用,而毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷单用时并无明显的作用。当5种活性成分配伍后对衰老HSCs的促增殖作用最强,� 展开更多
关键词 造血干细胞 阿魏酸 黄芪甲苷 芒柄花素 毛蕊异黄酮 毛蕊异黄酮苷 黄芪 当归 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白依赖性激酶
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当归多糖抑制氧化损伤延缓造血干细胞衰老 被引量：38
8
作者 张先平 王乾兴 +5 位作者 陈斌 魏强 徐春燕 姜蓉 王建伟 王亚平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期407-412,共6页
目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照... 目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制。方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照射,建立小鼠HSCs衰老模型;正常、衰老ASP干预组在建模期间均予ASP灌胃;而正常组、衰老组予等体积NS灌胃。免疫磁珠分离HSCs,通过β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期分析和混合集落培养观察HSCs生物学特性变化;流式细胞术与免疫荧光检测ROS产量;比色法检测T-AOC;荧光定量PCR检测p16 mRNA表达。结果:与正常组比较,3.0 Gy/8 F的X线能显著增加衰老组HSCs SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例;增加ROS产量,上调p16 mRNA表达;混合集落形成能力和T-AOC下降。与衰老组比较,ASP能显著降低衰老组HSCs的SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例,减少ROS产量,下调p16 mRNA;增加混合集落形成能力和T-AOC。结论:3.0 Gy/8 F的X线能诱导小鼠HSCs衰老;ASP则能通过抑制氧化损伤及下调p16 mRNA表达延缓小鼠HSCs衰老。 展开更多
关键词 当归多糖 造血干细胞 细胞衰老 氧化应激
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甲壳动物血细胞及其在免疫防御中的功能 被引量：31
9
作者 姚翠鸾 王志勇 相建海 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期549-557,共9页
甲壳动物的免疫反应主要依靠吞噬、包囊和凝集,属于非特异性免疫。血细胞在甲壳动物的免疫系统中具有重要作用。造血组织和造血干细胞为血细胞的生成、补充和更新提供了保障。血细胞成熟后分为不同类型,对血细胞分型的研究正在从采用传... 甲壳动物的免疫反应主要依靠吞噬、包囊和凝集,属于非特异性免疫。血细胞在甲壳动物的免疫系统中具有重要作用。造血组织和造血干细胞为血细胞的生成、补充和更新提供了保障。血细胞成熟后分为不同类型,对血细胞分型的研究正在从采用传统的形态学方法向采用生物技术方法的方向发展,单克隆抗体技术已经应用于血细胞分型,结果更为客观准确。不同类型的血细胞在细胞化学特性与功能方面表现出明显差异。在甲壳动物的免疫反应中,血细胞数量在不同的免疫应激状态下发生明显变化。当外来病原体较小时,血细胞通过吞噬作用吞入病原体,在细胞内部将病原杀灭;而当入侵的病原体或寄生虫的个体大于10μm时则以多个血细胞的包囊作用或凝集作用来完成。甲壳动物的免疫反应是一个交互作用的复杂过程,必然涉及多层次、多个因子的参与。其中造血组织的结构,血细胞的产生及调控机理,采用单克隆抗体技术对血细胞进行分型标准的建立,免疫因子在免疫反应中的功能及它们之间的相互作用的网络关系等尚需深入研究。 展开更多
关键词 甲壳动物 血细胞 造血组织 造血干细胞 免疫反应
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更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响 被引量：23
10
作者 刘文君 刘斌 +5 位作者 郭渠莲 张迎春 袁亚杰 付晓冬 邓正华 林江 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期490-494,共5页
目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ... 目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV +黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E。 展开更多
关键词 更昔洛韦 黄芪 巨细胞病毒感染 造血祖细胞 细胞增殖 抑制作用
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骨髓源性肝干细胞的确认及定向分化的实验研究 被引量：14
11
作者 蔡云峰 闵军 +3 位作者 何劲松 魏菁 莫隽全 陈积圣 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2003年第4期287-290,共4页
目的　确定骨髓源性肝干细胞的表面标记 ,体外培养诱导其分化为肝细胞。方法　采用流式细胞仪检测多种大鼠肝损伤模型骨髓中干细胞标记的细胞群体的数量变化 ,寻找可能的肝干细胞 ,免疫磁珠分离各骨髓干细胞标记的细胞群体 ,进行体外培... 目的　确定骨髓源性肝干细胞的表面标记 ,体外培养诱导其分化为肝细胞。方法　采用流式细胞仪检测多种大鼠肝损伤模型骨髓中干细胞标记的细胞群体的数量变化 ,寻找可能的肝干细胞 ,免疫磁珠分离各骨髓干细胞标记的细胞群体 ,进行体外培养诱导分化 ,观察细胞形态的变化 ,免疫组化技术检测清蛋白 (白蛋白 ) ,AFP ,CK 8/ 18等肝细胞标记的表达。结果　各模型大鼠骨髓内 β2微球蛋白阴性 (β2 m- )细胞显著增高 ,体外培养经诱导后呈多角形细胞表现 ,清蛋白 ,AFP ,CK 8/ 18表达阳性。其他干细胞类型细胞数量变化小 ,体外培养未见肝细胞样变化。结论　β2 m- 细胞的数量随肝损伤而变化 ,在体外具有向肝细胞分化的能力 。 展开更多
关键词 造血干细胞 集落形成单位测定 肝/细胞学
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从胚胎干细胞诱导发育为浆细胞的体外实验研究 被引量：18
12
作者 乔春平 李树浓 +3 位作者 黄绍良 徐令 梁晓燕 张秀明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期24-27,共4页
目的：建立胚胎干细胞体外定向诱导分化为浆细胞的体系，为研究造血发生的基因调控及Ｂ淋巴细胞发育过程奠定基础。方法：分阶段培养，第一、二阶段使用半固体培养，分组加入细胞因子、２－巯基乙醇和胚胎细胞条件培养液，用流式细胞仪... 目的：建立胚胎干细胞体外定向诱导分化为浆细胞的体系，为研究造血发生的基因调控及Ｂ淋巴细胞发育过程奠定基础。方法：分阶段培养，第一、二阶段使用半固体培养，分组加入细胞因子、２－巯基乙醇和胚胎细胞条件培养液，用流式细胞仪、免疫组化及Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ染色鉴定细胞，第三阶段移入骨髓基质细胞滋养层。结果：第一阶段：加入ＳＣＦ、ＴＰＯ、ＩＬ－６、ＩＬ－３、Ｅｐｏ、和Ｇ－ＣＳＦ，４ｄ后细胞大片坏死，仅加入２－巯基乙醇可形成胚胎体。第二阶段：加入ＳＣＦ和ＴＰＯ，细胞增殖缓慢，再加入条件培养液，发育３～４ｄ可形成ＣＤ３４＋的细胞集落。第三阶段：移至骨髓基质细胞饲养层后，发育为浆细胞。结论：胚胎干细胞在体外可定向分化为浆细胞。胚胎干细胞在早期发育不需要细胞因子，胚胎细胞的条件培养液可促使其向造血细胞发育。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 细胞活素 造血干细胞 体外培养
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人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响 被引量：21
13
作者 刘斌 刘文君 +4 位作者 郭渠莲 詹平 胡晓 林江 邓正华 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期39-41,共3页
目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测... 目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 造血干细胞 细胞分化 脐血
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人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响 被引量：20
14
作者 李琨 王清文 +4 位作者 陈奋华 邓红珠 肖作源 黄略峰 何政贤 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期271-274,T001-T002,共6页
目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对多向造血祖细胞 (CFU Mix)的抑制作用及其机制。方法　采用造血祖细胞体外半固体培养技术 ,研究HCMVAD 16 9株对脐血CFU Mix集落生长的影响 ;用原位聚合酶链反应 (IS PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA ;用... 目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对多向造血祖细胞 (CFU Mix)的抑制作用及其机制。方法　采用造血祖细胞体外半固体培养技术 ,研究HCMVAD 16 9株对脐血CFU Mix集落生长的影响 ;用原位聚合酶链反应 (IS PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA ;用免疫组化方法检测集落细胞中HCMV早期蛋白P 5 2。结果　HCMVAD 16 9在体外能明显抑制CFU Mix集落生长 ,集落数随病毒感染滴度的增高而减少 ,抑制幅度亦加大的趋势 ;经IS PCR检测发现病毒感染组CFU Mix集落细胞中有HCMVDNA存在 ;免疫组化检测发现病毒感染组CFU Mix集落细胞中有HCMVP 5 2的表达。结论　HCMVAD 16 9可抑制CFU Mix的分化、增殖 ;HCMVAD 16 9对CFU Mix有直接损害作用。此作用可能是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少、贫血的主要原因 ;并证实CFU 展开更多
关键词 巨细胞病毒属 造血干细胞 细胞分裂
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人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老及其相关机制 被引量：22
15
作者 周玥 杨斌 +2 位作者 姜蓉 姚欣 王亚平 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第48期3421-3425,共5页
目的 探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞（HSC）衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法 提供理论指导和实验依据.方法 免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋HSC后分5组：对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶（SA-... 目的 探讨人参皂苷Rg1调控造血干细胞（HSC）衰老的机制,为寻找延缓HSC衰老方法 提供理论指导和实验依据.方法 免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋HSC后分5组：对照组、衰老组、Rg1组、Rg1治疗衰老组、Rg1延缓衰老组.β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察Rg1延缓Sca-1＋HSC衰老的生物学作用.反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测衰老相关基因p161NK4a、p19Arf、p53、p21Cipl/Wafl mRNA的表达.Western印迹检测p16INK4a、p21 Cipl/Wafl、细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4、CDK2蛋白表达.结果 Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1＋HSC的SA-β-Gal染色阳性率（30.1%±2.4%,21.5%±2.8%）低于衰老组（69.5%±5.0%）;G1期细胞比例（81.4%±1.2%,78.2%±1.4%）低于衰老组（87.5%±4.0%）;生成CFU-Mix数[（8.0±2.2）个/104Sca-1＋HSC、（9.2±1.8）个/104 Sca-1＋HSC]高于衰老组[（3.0±1.6）个/104Sca-1＋HSC];Rg1治疗衰老组及Rg1延缓衰老组Sca-1＋HSC的p16INK4a、p19Arf、p53、p21 Cipl/Wafl mRNA及p16INKa、p21 Cipl/Wafl、cyclinD1蛋白表达均下调（均P＜0.01）,CDK4、CDK2、cyclinE蛋白表达均上调（均P＜0.01）.Rg1延缓衰老组各检测指标均较Rg1治疗组变化明显.结论 Rg1具有延缓及治疗Sca-1＋HSC衰老的作用,p16INK4a-Rb及p19Aarf-Mdm2-p53-p21Cipl/Wafl信号通路在其中可能发挥重要作用. 展开更多
关键词 人参皂苷 造血干细胞 细胞衰老 抗衰老药(中药)
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体外定向诱导小鼠胚胎干细胞发育为造血干/祖细胞方法的初步研究 被引量：16
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作者 何志旭 黄绍良 +1 位作者 周其峰 李树浓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期443-447,T002,共6页
目的 :探讨体外定向诱导胚胎干细胞 (ESC)发育为造血干细胞 (HSC)的方法。方法 :将小鼠E14胚胎干细胞在含干细胞生长因子 (SCF)和血管内皮生长因子 (VEGF)的甲基纤维素培养基中首先诱导发育为胚胎体(EB) ,再将EB置于均含SCF、VEGF、IL ... 目的 :探讨体外定向诱导胚胎干细胞 (ESC)发育为造血干细胞 (HSC)的方法。方法 :将小鼠E14胚胎干细胞在含干细胞生长因子 (SCF)和血管内皮生长因子 (VEGF)的甲基纤维素培养基中首先诱导发育为胚胎体(EB) ,再将EB置于均含SCF、VEGF、IL - 3、IL - 6及促红细胞生成素 (EPO)的 3种不同培养体系中定向分化为HSC ,并观察HSC表面标志性抗原、造血集落形成及瑞氏 -姬姆萨染色的结果。结果 :经两阶段诱导ESC分化为HSC ,发现在甲基纤维素半固体培养体系中HSC发育缓慢 ,分化 14d后CD34+/Sca - 1+细胞数最高为 ( 31 5± 4 7) %;而在骨髓基质细胞饲养层上HSC发育较快 ,细胞数量较多 ,分化第 10dCD34+/Sca - 1+细胞数即达到峰值 ,为 ( 47 8±6 3) %;骨髓基质细胞饲养层 +胎肝基质细胞上清培养体系中HSC发育同样迅速 ,所产生的CD34+/Sca - 1+细胞数量在 3个体系中最高 ,为 ( 5 3 6± 7 2 ) %。经瑞氏 -姬姆萨染色证实上述细胞为早期造血细胞 ,均有形成各系造血细胞集落的能力。结论 :使用骨髓基质细胞饲养层 +胎肝基质细胞上清培养体系及SCF、VEGF、IL - 3、IL - 6及EPO等细胞因子 ,通过两阶段诱导分化 ,可从小鼠ESC获得较高比例的HSC。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 造血干细胞 骨髓细胞 分化 小鼠 体外定向
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当归多糖对小鼠衰老造血干细胞细胞周期蛋白的调控 被引量：21
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作者 张先平 王乾兴 +4 位作者 陈斌 刘俊 魏强 王建伟 王亚平 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第3期320-324,共5页
目的观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSC)细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨ASP调控HSC衰老的可能机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组、衰老组、ASP干预对照组和ASP干预衰老组,衰老组采用X线全身均匀照射,建立小鼠HSC衰老模型;AS... 目的观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSC)细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨ASP调控HSC衰老的可能机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组、衰老组、ASP干预对照组和ASP干预衰老组,衰老组采用X线全身均匀照射,建立小鼠HSC衰老模型;ASP干预衰老组在照射期间给予ASP灌胃;对照组和ASP干预对照组分别给予NS和ASP灌胃。免疫磁珠分离HSC,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色和混合集落培养(CFU-Mix)观察HSC生物学特性变化;流式细胞术分析细胞周期;Western blot检测P16、P21、CDK2、CDK6、CyclinD及CyclinE表达。结果与对照组比较,X线能显著增加衰老对照组HSC SA-β-Gal染色阳性率、G1期比例及P16、P21表达;降低CFU-Mix、S期比例及CDK6、CyclinD和CyclinE表达。与衰老组比较,ASP能显著抑制衰老HSC SA-β-Gal染色阳性率、G1期比例及P16和P21表达的增加;抑制S期比例、CFU-Mix、CDK6、CyclinD及CyclinE表达的减少;而对CDK2表达无影响。结论 ASP可能通过调节P16、P21、CDK6、CyclinD及CyclinE表达延缓小鼠HSC衰老。 展开更多
关键词 当归多糖 细胞衰老 造血干细胞 细胞周期
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脐血CD_(34)^+细胞和外周血单核细胞两种来源的树突状细胞特性的比较研究 被引量：14
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作者 王晓 裴雪涛 +2 位作者 李梁 冯凯 白慈贤 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第11期583-585,共3页
目的　体外大量扩增和纯化具有典型表型、形态和功能的树突状细胞（ＤＣ），以进行相关基础研究和临床应用。方法　采用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ３４ ＋ 细胞及外周血去Ｂ、去Ｔ淋巴细胞的单个核细胞（ 单核细胞） ，然后以ＧＭＣＳＦ... 目的　体外大量扩增和纯化具有典型表型、形态和功能的树突状细胞（ＤＣ），以进行相关基础研究和临床应用。方法　采用免疫磁珠法分离脐血ＣＤ３４ ＋ 细胞及外周血去Ｂ、去Ｔ淋巴细胞的单个核细胞（ 单核细胞） ，然后以ＧＭＣＳＦ、ＩＬ４、ＴＮＦα、Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ）、ＳＣＦ等不同的细胞因子配伍，分别诱生ＤＣ，通过流式细胞仪、电镜、光镜分析其特性，同时检测其刺激同种Ｔ细胞增殖的能力。结果　脐血与外周血诱生ＤＣ的方案不同，由脐血ＣＤ３４＋ 细胞诱导ＤＣ 时，ＧＭＣＳＦ＋ ＴＮＦα＋ ＳＣＦ＋ ＦＬ 组合可使ＣＤ１ａ＋ 细胞比例增至（２７ ．１８ ±１－５６）％ ，明显高于单独应用ＧＭＣＳＦ组［（０．６５±０ ．３８）％ ］ 。外周血单核细胞诱导的ＤＣ，则ＧＭＣＳＦ＋ 高剂量ＩＬ４（１０００ Ｕ／ｍｌ） 组合效率最高，诱生的ＣＤ１ａ ＋ 细胞可达（２１ ．８０ ±０－３２） ％ 。两种来源的ＤＣ在表型及形态上差异无显著性，两者同样具有刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。结论　从脐血和外周血均可诱生ＤＣ，根据应用目的的不同对其进行选择，这为ＤＣ用于临床治疗选择不同细胞来源提供了实验基础。 展开更多
关键词 树突细胞 造血干细胞 单核细胞 脐血 CD34^+细胞
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脐带血干细胞的基础与应用研究 被引量：17
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作者 顾东生 刘斌 韩忠朝 《生命科学》 CSCD 2006年第4期323-327,共5页
作为造血干/祖细胞(hematopoieticstemcells/hematopoieticprogenitorcells,HSCs/HPCs)的另一来源,脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时,脐带血中还存在... 作为造血干/祖细胞(hematopoieticstemcells/hematopoieticprogenitorcells,HSCs/HPCs)的另一来源,脐带血已经应用于临床治疗多种恶性和非恶性疾病。脐带血中HSCs/HPCs的质与量是决定其临床应用效果的最重要因素。同时,脐带血中还存在多种非造血的干细胞和前体细胞,如间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)、内皮前体细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)和非限制性体干细胞(unrestrictedsomaticstemcells,USSCs)等,这些细胞可能会在未来的细胞治疗和再生医学中发挥重要作用。本综述还讨论了脐带血的临床应用及HSCs/HPCs的体外扩增、增加HSCs归巢和再植能力等提高其临床应用能力的相关研究。 展开更多
关键词 脐带血 造血干细胞 移植
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关于干细胞研究的思考 被引量：13
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作者 王正国 《中国临床康复》 CSCD 2003年第2期177-177,196,共2页
干细胞是近年来细胞生物学和医学研究中最热门的课题之一。由于它在防治疾病上实际的和潜在的重要性以及新型药物研制等方面可能有的巨大商机,特别是伦理上的争议,引起学术界和社会各界的广泛关注。目前,科学文献上不断有关于干细胞研... 干细胞是近年来细胞生物学和医学研究中最热门的课题之一。由于它在防治疾病上实际的和潜在的重要性以及新型药物研制等方面可能有的巨大商机,特别是伦理上的争议,引起学术界和社会各界的广泛关注。目前,科学文献上不断有关于干细胞研究动态和进展的介绍,新闻媒体常常是跟踪追击,有时还作了夸大其词和不真实的报道,对此科技工作者应有所认识和警惕。 展开更多
关键词 干细胞 细胞分化 应用 造血干细胞 骨髓间充质干细胞
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