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鸡白细胞介素2增强传染性法氏囊病病毒多聚蛋白DNA疫苗免疫原性的研究 被引量:36
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作者 于涟 李建荣 +2 位作者 黄耀伟 梁雪芽 孟松树 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期652-657,共6页
鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d... 鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因是新近被确定的非哺乳类IL 2基因。将鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV)多聚蛋白基因 (VP2 VP4 VP3 )分别插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游 ,制备DNA疫苗 ,免疫 14日龄SPF鸡 ,14d后二免 ,二免后 3d攻击标准强毒株。结果表明共注射鸡IL 2质粒能明显增强DNA疫苗对强毒攻击 ,保护率达 80 % ;能增强DNA疫苗诱导的中和抗体效价 (P <0 0 5 ) ;能显著促进鸡胸腺、脾脏和外周血液T淋巴细胞及法氏囊B淋巴细胞增殖反应 (P <0 0 5 )。这些结果提示鸡IL 2能明显增强IBDV多聚蛋白DNA疫苗的免疫原性 ,是一种优良的禽类DNA疫苗佐剂。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素2 IL-2 传染性法氏囊病病毒 多聚蛋白基因 DNA疫苗 免疫原性
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禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性 被引量:27
2
作者 陈化兰 于康震 +2 位作者 田国斌 唐秀英 卢景良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期555-558,共4页
禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N... 禽流感病毒(AIV)的表面结构蛋白血凝素(HA)是其主要保护性抗原。本研究参考已发表的H7亚型AIV的HA基因序列,设计合成了1对H7HA特异引物,以AIVA/Afri.Star./Eng-Q/983/79/(H7N1)(A/Afri.Star./Eng)核酸为模板,通过RT-PCR扩增出1条1.7kbcDNA片段。将这一片段定向克隆到pUC18中,对其5′端及3′端部分序列测定后,确证其为HAcDNA。将HA基因置于SV40启动子和增强子下游,构建了这一基因的真核表达质粒pSVH7。以此质粒100μg肌肉注射免疫3周龄SPF鸡6只,4周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,1周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离;免疫后1~6周每周对所有鸡翅静脉采血,分离血清,检测HI抗体。结果,100μg免疫组鸡病毒分离数为0/6,对照组为6/6;攻毒后1周免疫组鸡HI效价为1∶32~1∶64,对照组为1∶4~1∶16。表明所构建的HA基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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禽流感HA基因疫苗脂质体的制备及其理化性质 被引量:17
3
作者 陈吉祥 李广林 +4 位作者 薛飞群 陈化兰 于康震 赵荣材 李树本 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期230-232,共3页
用改良的逆相蒸发法制备了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体。电镜观察表明,该脂质体多呈球形的单层或多层结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围20~700nm,平均粒径163nm,主要粒径分... 用改良的逆相蒸发法制备了H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体。电镜观察表明,该脂质体多呈球形的单层或多层结构,脂质体粒径分布均匀,粒径范围20~700nm,平均粒径163nm,主要粒径分布位于50~200nm(84.80%)。重组质粒DNA在脂质体的制备过程中保持了稳定性,并能抵抗DNA酶的水解破坏作用。吸收光谱表明,在248nm及268nm处脂质体有2个特征吸收峰,DNA的存在不改变吸收峰的位置,但能增加吸收峰的强度。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 疫苗 脂质体 理化性质
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新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报) 被引量:33
4
作者 郭万柱 徐志文 +3 位作者 王小玉 程陆 王印 汪铭书 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第1期1-3,10,共4页
以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 1... 以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 15等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示 ,该基因缺失株对多种动物安全 ,具有良好的免疫原性 ,有望成为一株优秀的PRV疫苗候选株。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 基因缺失 疫苗 生物学特性
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肿瘤生物治疗新进展 被引量:18
5
作者 罗荣城 尤长宣 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期143-146,共4页
生物治疗已经成为肿瘤综合治疗中的第四种模式,越来越受到重视。主要包括:体细胞疗法与细胞因子疗法,肿瘤疫苗与树突状细胞,肿瘤分子靶向治疗,放射免疫靶向治疗,肿瘤基因治疗和生物化疗。现对这些治疗方法和存在问题及展望做一综述。
关键词 生物治疗 基因治疗 体细胞疗法 细胞因子疗法 肿瘤疫苗
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猪囊尾蚴抗原与猪白细胞介素-4基因融合DNA疫苗载体的构建 被引量:20
6
作者 吴丹 郭瀛军 孙树汉 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期172-174,共3页
目的: 为增强猪囊尾蚴抗原c C1 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素4( I L4)与 c C1 抗原融合蛋白的 D N A 疫苗载体。方法: 通过聚合酶链反应( P C R),分别扩增猪 I L4c D N A 和c C1c ... 目的: 为增强猪囊尾蚴抗原c C1 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素4( I L4)与 c C1 抗原融合蛋白的 D N A 疫苗载体。方法: 通过聚合酶链反应( P C R),分别扩增猪 I L4c D N A 和c C1c D N A 片段并进行融合,获得的嵌合基因 I L4c C1 中含有10 个氨基酸的中间接头序列,同时对其5’ A U G 侧翼序列进行翻译优化突变。结果:经酶切鉴定,证实有一1.5 kb 的片段插入载体,其 D N A 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论:表达猪 I L4 与猪囊尾蚴抗原c C1 融合蛋白的 D N A 疫苗载体构建成功。 展开更多
关键词 囊尾蚴病 抗原 基因融合 DNA疫苗 IL-4
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禽流感病毒的分子生物学研究进展 被引量:18
7
作者 傅生芳 独军政 +1 位作者 常惠芸 陈怀涛 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期22-24,共3页
禽流感是一种主要感染禽类的烈性传染病,能引起巨大的经济损失。该病也能传染人,因此,对禽流感病毒的研究已成为一大热点。目前研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以期能更有效地防制本病。文章从基因组及其编码的蛋白质、病... 禽流感是一种主要感染禽类的烈性传染病,能引起巨大的经济损失。该病也能传染人,因此,对禽流感病毒的研究已成为一大热点。目前研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以期能更有效地防制本病。文章从基因组及其编码的蛋白质、病毒毒力、毒力变异、基因疫苗和诊断技术等方面系统论述了禽流感病毒的分子生物学方面的研究进展,为进一步研制禽流感病毒基因工程疫苗及诊断制品,预防该病提供了理论基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 分子生物学 研究进展 基因工程疫苗 烈性传染病 经济损失 病毒毒力 毒力变异 诊断技术 基因疫苗 理论基础 蛋白质 基因组 系统论 禽类
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新型H7N9禽流感病毒研究进展 被引量:23
8
作者 修文琼 郑奎城 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期636-644,共9页
新型H7N9禽流感病毒对中国的突袭引起了全球的高度关注。本文从H7N9禽流感病毒可能的起源和基因重组事件、病毒基因的多样性、重要突变位点与病毒致病性、采样与实验室检测、流行病学调查、临床症状、治疗、疫苗研究和预防等多个方面对... 新型H7N9禽流感病毒对中国的突袭引起了全球的高度关注。本文从H7N9禽流感病毒可能的起源和基因重组事件、病毒基因的多样性、重要突变位点与病毒致病性、采样与实验室检测、流行病学调查、临床症状、治疗、疫苗研究和预防等多个方面对国际、国内有关H7N9禽流感病毒的研究进展进行综述,以期为H7N9禽流感病毒的防控提供参考。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 基因重组 基因突变 流行病学调查 临床症状与治疗 疫苗 预防
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IL-12及HBV基因疫苗共同免疫小鼠的效果 被引量:20
9
作者 杜德伟 周永兴 +2 位作者 冯志华 姚志强 李光玉 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第2期128-130,共3页
目的 观察编码鼠IL-12的真核表达载体对HBV DNA疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的影响。 方法 肌肉注射DNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h ^(51)Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。 结果 免疫8wk后,注射pCR3.1组、注射pCR3.1-S组及共注... 目的 观察编码鼠IL-12的真核表达载体对HBV DNA疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的影响。 方法 肌肉注射DNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h ^(51)Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性。 结果 免疫8wk后,注射pCR3.1组、注射pCR3.1-S组及共注射IL-12真核表达载体的血清A(OD值)分别为0.04±0.01,0.87±0.1及1.67±0.15。CTL细胞杀伤活性分别为10.1%±6.4%,50.5%±6.4%及73.3%±8.8%,后两组与pCR3.1组比较均有显著差异(P<0.01),后两组比较均有显著差异(P<0.01).脾细胞悬液经抗CD4^+单克隆抗体处理后分别为48.3%±5.9%,75.6%±9.1%,抗CD8^+单克隆抗体处理后分别为10.6%±1.4%,16.9%±2.3%。 结论 IL-12的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,CTL细胞杀伤活性主要由CD8^+执行。基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染。 展开更多
关键词 基因疫苗 真核表达载体 IL-12 乙型肝炎病毒
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Adenovirus-mediated gene delivery:Potential applications for gene and cell-based therapies in the new era of personalized medicine 被引量:21
10
作者 Cody S.Lee Elliot S.Bishop +19 位作者 Ruyi Zhang Xinyi Yu Evan M.Farina Shujuan Yan Chen Zhao Zongyue Zeng Yi Shu Xingye Wu Jiayan Lei Yasha Li Wenwen Zhang Chao Yang Ke Wu Ying Wu Sherwin Ho Aravind Athiviraham Michael J.Lee Jennifer Moriatis Wolf Russell R.Reid Tong-Chuan He 《Genes & Diseases》 SCIE 2017年第2期43-63,共21页
With rapid advances in understanding molecular pathogenesis of human diseases in the era of genome sciences and systems biology,it is anticipated that increasing numbers of therapeutic genes or targets will become ava... With rapid advances in understanding molecular pathogenesis of human diseases in the era of genome sciences and systems biology,it is anticipated that increasing numbers of therapeutic genes or targets will become available for targeted therapies.Despite numerous setbacks,efficacious gene and/or cell-based therapies still hold the great promise to revolutionize the clinical management of human diseases.It is wildly recognized that poor gene delivery is the limiting factor for most in vivo gene therapies.There has been a long-lasting interest in using viral vectors,especially adenoviral vectors,to deliver therapeutic genes for the past two decades.Among all currently available viral vectors,adenovirus is the most efficient gene delivery system in a broad range of cell and tissue types.The applications of adenoviral vectors in gene delivery have greatly increased in number and efficiency since their initial development.In fact,among over 2000 gene therapy clinical trials approved worldwide since 1989,a significant portion of the trials have utilized adenoviral vectors.This review aims to provide a comprehensive overview on the characteristics of adenoviral vectors,including adenoviral biology,approaches to engineering adenoviral vectors,and their applications in clinical and preclinical studies with an emphasis in the areas of cancer treatment,vaccination and regenerative medicine.Current challenges and future directions regarding the use of adenoviral vectors are also discussed.It is expected that the continued improvements in adenoviral vectors should provide great opportunities for cell and gene therapies to live up to its enormous potential in personalized medicine. 展开更多
关键词 ADENOVIRUS Adenoviral vector Cell therapy gene transfer gene therapy Oncolytic virus Regenerative medicine vaccine development
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鸭瘟病毒的分子生物学研究进展 被引量:13
11
作者 陈建君 张毓金 +1 位作者 杨增岐 宋长绪 《动物医学进展》 CSCD 2003年第6期25-28,共4页
鸭瘟病毒属疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科。其核酸结构为线状双股 DNA,衣壳为二十面体对称 ,有囊膜。鸭瘟病毒的 DNA具典型的疱疹病毒 DNA的特征 ,大小约为 1 50 kb,两端为末端重复序列 ,中间有内部重复序列。囊膜蛋白为疱疹病毒的主要... 鸭瘟病毒属疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科。其核酸结构为线状双股 DNA,衣壳为二十面体对称 ,有囊膜。鸭瘟病毒的 DNA具典型的疱疹病毒 DNA的特征 ,大小约为 1 50 kb,两端为末端重复序列 ,中间有内部重复序列。囊膜蛋白为疱疹病毒的主要保护性抗原 ,它在介导病毒进入细胞 ,以及病毒的成熟与释放中均起重要的作用。疱疹病毒的囊膜蛋白主要有糖蛋白 B( Glycoprotein B,g B)、g C、g D、g E、g I等。其他蛋白如 Ul3 6、Ul3 7等在病毒的成熟与释放中也起重要的作用。国内外已有多人建立起鸭瘟的PCR检测方法 ,而其基因工程疫苗的研究报道较少。但参考其他疱疹病毒特别是伪狂犬病的基因工程疫苗的研究 ,可以推测鸭瘟的基因工程疫苗研究也大有可为。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分子生物学 形态结构 装配释放 基因组特征 病毒蛋白
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猪流行性腹泻病毒S基因研究进展 被引量:20
12
作者 陈弟诗 任玉鹏 +3 位作者 张斌 李丽 聂艳如 周莉媛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第7期77-81,共5页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是猪腹泻的重要病原之一,广泛流行于世界多地,引起较大经济损失。PEDV为冠状病毒属不分节段的单股正链RNA病毒,其S基因编码病毒纤突蛋白,与病毒对宿主细胞的吸附入侵相关。研究发现,不同分离株PEDV S基因N端序列... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是猪腹泻的重要病原之一,广泛流行于世界多地,引起较大经济损失。PEDV为冠状病毒属不分节段的单股正链RNA病毒,其S基因编码病毒纤突蛋白,与病毒对宿主细胞的吸附入侵相关。研究发现,不同分离株PEDV S基因N端序列具变异性,推测其与病毒抗原性改变相关;试验证实S基因具有良好的免疫原性,可刺激机体产生中和抗体,故可作为新型疫苗开发的候选基因,同时S基因保守区域也可以作为诊断方法建立的靶点。论文主要对PEDV S基因结构、功能及其在疫苗与诊断技术方面的研究进展进行综述,为研究病毒感染机制,开发用于临床的快速诊断技术和新型疫苗提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 遗传变异 疫苗 诊断
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H9N2亚型禽流感病毒HA基因的克隆及其DNA疫苗的动物免疫试验 被引量:15
13
作者 何宏轩 秦曦明 +4 位作者 张强哲 汤义 刘丽艳 郑昌学 段明星 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-166,共4页
血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将H... 血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcDNA片段 .将HA基因插入pVAX1中 ,构建了真核表达质粒pVAX H9.采用活体电击法免疫 3周龄SPF鸡 1 0只 ,剂量为 5 0 μg/只 ,3周后加强免疫一次 ,5周后以 1 0 0倍鸡胚感染剂量 (EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒 .其间每周检测抗体水平变化 ,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离 .结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为 9log2~ 1 0log2 ,对照组为 2log2~ 4log2 ;免疫组病毒分离数为 0 / 1 0 ,对照组为 1 0 / 1 0 . 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 RT-PCR 克隆 DNA疫苗
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日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区cDNA核酸疫苗的研究 被引量:16
14
作者 朱建国 林矫矫 +3 位作者 冯新港 吴祥甫 周元聪 蔡幼民 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期27-30,共4页
目的 为研究血吸虫性别特异性表达基因的核酸免疫特性。方法 本研究将所克隆的编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因保守区cDNA片段克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,得到的重组质粒直接免疫昆明系小鼠 ,感染血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小... 目的 为研究血吸虫性别特异性表达基因的核酸免疫特性。方法 本研究将所克隆的编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因保守区cDNA片段克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,得到的重组质粒直接免疫昆明系小鼠 ,感染血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数。结果 其减虫率为 32 4 % ,肝脏减卵率为 4 6 9% ,与对照组比较差异显著。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抱雌沟蛋白 保守区编码 cDNA核酸疫苗 免疫保护功能
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甲型H1N1流感病毒基因特征及耐药性研究 被引量:19
15
作者 赵红玲 章文 黄涛 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第9期811-815,共5页
目的研究甲型H1N1流感病毒的基因特征和变化规律,为流感疫苗评价提供依据。方法选取2009年6月-2013年4月本院分离出的15株甲型H1N1病毒分离株,提取病毒RNA进行反转录。采用PCR方法扩增15株甲型H1N1流感病毒HA和NA全基因并进行测序分析... 目的研究甲型H1N1流感病毒的基因特征和变化规律,为流感疫苗评价提供依据。方法选取2009年6月-2013年4月本院分离出的15株甲型H1N1病毒分离株,提取病毒RNA进行反转录。采用PCR方法扩增15株甲型H1N1流感病毒HA和NA全基因并进行测序分析。利用软件Bioedit和MEGA软件对序列进行拼接,绘制种系发生树,采用邻位相临法构建进化树。结果 15株甲型H1N1流感病毒均为低致病性病毒,对神经氨酸酶抑制剂敏感,对金刚烷胺类呈耐药性。实验毒株HA基因序列与国内和国外毒株同源性为99.1%-99.7%。该地区流感毒株抗原变异程度较大,其中毒株HA发生14个氨基酸点位改变,分别为:A215E,D127E,E235K,E374K,G170E,H138R,L161I,I321V,L191I,P83S,R45K,S185T,S203T和V234I。其中第83位和第321位与国内代表株相同,但是与国外代表株不同。NA发生15个氨基酸点位改变,分别为A20V,N44S,V83M,V106I,E128G,H144Y,I188T,V241I,S247N,N248D,S334N,N369K,N449K,D451G和G454S。其中所有毒株均发生V106I和S247N的变化。结论通过对HA和NA基因序列对比分析,该地区流感疫苗对当地居民有保护作用,但是毒株与疫苗株间发生相对抗原漂移,需要进一步观察毒株变异情况。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 基因序列分析 疫苗评价
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鸡新城疫病毒HeB02分离株F基因的克隆及其DNA疫苗的研究 被引量:14
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作者 李楠 孙一敏 赵宝华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期445-450,共6页
根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核... 根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物,以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板,通过RT-PCR扩增出了1·66kb左右的F基因片段,序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为88·1%、84·9%和83·8%。将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达质粒pSV-F,通过脂质体转染COS-7细胞,SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带;Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明:真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应,说明F蛋白具有很好的免疫原性。采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡,剂量为50μg/只,3周后加强免疫1次,5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒,攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定。结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价,攻毒后检测效价为3·0log2±1·40,并且于攻毒后第9天全部死亡;活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价,第5周最高,HI效价分别为8·3log2±1·30和7·2log2±1·23,攻毒1周后HI效价分别达9·8log2±1·55和8·9log2±1·77,极显著高于对照组(P<0·01)。免疫组未分离到新城疫病毒,对照组全部分离到新城疫病毒。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 克隆和表达 DNA疫苗
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弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1-ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察 被引量:15
17
作者 杨婷婷 何深一 +5 位作者 张加勤 周怀瑜 丛华 古钦民 李瑛 赵群力 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期410-413,共4页
目的构建弓形虫主要表面抗原SAG1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白ROP2的复合基因疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒pcDNA3.1SAG1及pcDNA3.1SAG1ROP2。将两核酸疫苗分别免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体、IFNγ... 目的构建弓形虫主要表面抗原SAG1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白ROP2的复合基因疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒pcDNA3.1SAG1及pcDNA3.1SAG1ROP2。将两核酸疫苗分别免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体、IFNγ、IL4;流式细胞仪测定T细胞亚群;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。结果获得pcDNA3.1SAG1、pcDNA3.1SAG1ROP2重组质粒;pcDNA3.1SAG1ROP2组小鼠IgG抗体(P<0.05)、IFNγ(P<0.01)及CD8+细胞比例(P<0.05)均高于pcDNA3.1SAG1组;实验组组均未测到IL4;复合基因组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫不同生活阶段的抗原基因复合疫苗较单基因疫苗具有更好的免疫保护性。 展开更多
关键词 弓形虫 SAG1 ROP2 复合基因 DNA疫苗 流式细胞术
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PRRSV NJ-a株ORF5基因A表位的修饰与糖基化位点的突变对其DNA疫苗免疫效力的影响 被引量:13
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作者 郑其升 李鹏 +5 位作者 毕志香 牛明福 曹瑞兵 周斌 陈德胜 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期33-39,共7页
为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的O... 为了提高PRRSVORF5基因的免疫效力,对ORF5基因进行了改造,将CpG序列和通用型辅助性T淋巴细胞表位插入A表位与B表位之间,并对N33与N51位糖基化位点进行了点突变,获得改造的ORF5基因。在此基础上构建了由两个CMV启动子调控的共表达改造的ORF5(MORF5)与ORF6基因的真核表达质粒pcDNA-M5A-6A。经Western-blot与IFA验证真核质粒的体外表达后,免疫6周龄Balb/c小鼠,利用微量中和试验检测免疫后的中和抗体,利用MTT法检测免疫后淋巴细胞的增生情况,并与未改造ORF5基因真核表达质粒pcDNA-5A-6A、弱毒疫苗以及灭活疫苗的免疫效果进行比较。结果表明,pcDNA-M5A-6A不但能够刺激免疫小鼠在较短的时间内产生更高水平的中和抗体,而且可以诱导产生更强烈的T淋巴细胞增殖反应。所构建的共表达PRRSV改造的ORF5基因与ORF6基因的DNA疫苗pcDNA-M5A-6A,能够较好的诱发小鼠产生较高的特异性针对PRRSV的中和抗体和细胞免疫应答,为研究能够更好地防制PRRSV的新型疫苗提供了新的思路。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 基因改造 DNA疫苗
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HBV包膜-核心蛋白融合基因DNA疫苗诱导小鼠持久的细胞免疫应答 被引量:13
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作者 赵平 姜春鹏 +2 位作者 赵兰娟 温新宇 戚中田 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期576-582,共7页
构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因... 构建编码HBV包膜 核心蛋白融合基因的DNA疫苗pSC、pSS1S2C和编码HBV包膜蛋白或核心蛋白基因的DNA疫苗 pHBs、pHBc ,分别肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,检测小鼠的血清抗体、T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞反应 ,比较融合基因DNA疫苗与单基因DNA疫苗诱生免疫应答的强度 ,发现融合基因DNA疫苗诱生抗体的效率明显不及单基因DNA疫苗 ,但其能诱导更强、更持久的细胞免疫应答 ,表明HBV包膜 核心蛋白融合基因DNA疫苗对于治疗慢性乙型肝炎可能比单基因DNA疫苗更为有效 . 展开更多
关键词 HBV 包膜-核心蛋白融合基因 DNA疫苗 诱导 小鼠 细胞免疫应答
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东北地区新城疫流行株的分子生物学特性调查 被引量:7
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作者 崔尚金 刘文斌 +6 位作者 李建伟 王凯波 李秀云 刘果 潘家鸣 张寰波 董玉光 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第12期26-31,共6页
从东北地区发生新城疫 (ND)的病鸡、病鸽和产蛋下降鸡分离到 19株NDV ,对其融合蛋白 (F)基因 5 32bp或 2 80bp片段进行了克隆、测序 (在GenBank中的登录号为AY2 0 86 80~AY2 0 86 98) ,并对各株的F基因序列进行了比较。结果 ,各毒株之... 从东北地区发生新城疫 (ND)的病鸡、病鸽和产蛋下降鸡分离到 19株NDV ,对其融合蛋白 (F)基因 5 32bp或 2 80bp片段进行了克隆、测序 (在GenBank中的登录号为AY2 0 86 80~AY2 0 86 98) ,并对各株的F基因序列进行了比较。结果 ,各毒株之间的核苷酸同源性为 83.1%~10 0 % ,氨基酸同源性为 85 .5 %~ 10 0 % ;系统发育进化树分析表明 ,其中 2株与疫苗株V4同属基因Ⅰ型 ,为弱毒株 ;其余 17株为强毒株 ,其中 2株为基因Ⅵ型 ,其余为基因Ⅶ型。表明东北地区目前由 3种基因型的NDV毒株 (Ⅰ型、Ⅵ型、Ⅶ型 )所引发 ,并以基因Ⅶ型为主。另外 ,对其中的代表毒株APMV1/chicken/China/JL 11/ 0 2进行了免疫学试验 ,结果显示 ,LaSota疫苗的免疫保护效果不理想 ,可能是LaSota疫苗免疫鸡群发生ND的主要原因。 展开更多
关键词 东北地区 新城疫 流行株 分子生物学
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