胚胎干细胞滋养层细胞的培养及其预处理条件 被引量：16

1

作者 韩军涛 陈璧 《西北国防医学杂志》 CAS 2003年第2期96-98,共3页

目的 :探讨胎鼠成纤维细胞作为胚胎干细胞的滋养层细胞在培养、传代及预处理等方面的条件。方法 :用胰蛋白酶消化法培养胎鼠成纤维细胞 ,观察细胞在增殖、传代、冻存及复苏等方面的条件 ;用不同浓度的丝裂霉素对细胞进行预处理 ,利用MT... 目的 :探讨胎鼠成纤维细胞作为胚胎干细胞的滋养层细胞在培养、传代及预处理等方面的条件。方法 :用胰蛋白酶消化法培养胎鼠成纤维细胞 ,观察细胞在增殖、传代、冻存及复苏等方面的条件 ;用不同浓度的丝裂霉素对细胞进行预处理 ,利用MTT法测定细胞的生长曲线 ,筛选最佳浓度及作用时间。结果 :胎鼠成纤维细胞的增殖速度较快 ,在第 4代以后细胞开始变形并趋于衰老 ;以 2 0mg·L- 1 丝裂霉素处理细胞 2h ,可明显抑制细胞的增殖而不引起细胞的死亡。结论 :作为滋养层细胞 ,胎鼠成纤维细胞应选择第 4代以前的细胞 ,丝裂霉素处理条件为 2 0mg·L- 1 作用 2h。 展开更多

关键词 胚胎学 滋养层细胞 成纤维细胞 丝裂霉素 胚胎干细胞 培养 预处理

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分化抑制物对动物胚胎干细胞克隆率的影响 被引量：4

2

作者 安立龙 效梅 +1 位作者 窦忠英 邱怀 《动物医学进展》 CSCD 2001年第2期45-48,共4页

胚胎干细胞是从动物胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离的具有全能性的细胞 ,在遗传学、发育生物学和细胞工程领域具有广阔的应用前景。抑制胚胎干细胞分化和促进胚胎干细胞增殖是克隆胚胎干细胞的关键 ,本文介绍了饲养层、条件培养基、分... 胚胎干细胞是从动物胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离的具有全能性的细胞 ,在遗传学、发育生物学和细胞工程领域具有广阔的应用前景。抑制胚胎干细胞分化和促进胚胎干细胞增殖是克隆胚胎干细胞的关键 ,本文介绍了饲养层、条件培养基、分化抑制因子对哺乳动物胚胎干细胞分离与克隆的影响 ,并探讨了白血病抑制因子影响胚胎干细胞克隆的机理 。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 饲养层 条件培养基 细胞克隆 分化抑制物

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应用微室饲养培养系统诱导水稻和小麦合子及早期原胚的生长 被引量：4

3

作者 赵洁 姚成义 +1 位作者 周嫦 杨弘远 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期289-293,共5页

从两个水稻品种、 4种外植体来源的愈伤组织中 ,筛选出幼胚愈伤组织 ,通过反复继代和悬浮培养 ,建立了具旺盛分裂能力的胚性悬浮细胞系。胚性悬浮细胞为圆球形、单个或聚集成多细胞团 ;细胞以多方向分裂 ;并具有长期的分裂能力。以胚性... 从两个水稻品种、 4种外植体来源的愈伤组织中 ,筛选出幼胚愈伤组织 ,通过反复继代和悬浮培养 ,建立了具旺盛分裂能力的胚性悬浮细胞系。胚性悬浮细胞为圆球形、单个或聚集成多细胞团 ;细胞以多方向分裂 ;并具有长期的分裂能力。以胚性悬浮细胞系作为饲养细胞 ,采用微室饲养培养系统诱导了水稻和小麦合子及授粉后 1～ 2 d早期原胚的生长。结果表明 :水稻合子分裂成多细胞团 ;1d原胚发育成球形胚 ;2 d原胚通过器官发生途径再生植株。小麦合子和 2～ 8胞原胚能分裂多次 ,形成细胞团。无饲养细胞的微室培养不能诱导合子和早期原胚分裂 ; 展开更多

关键词 水稻 小麦 饲养细胞 微室培养 合子 早期原胚

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人胚胎干细胞建株与维持培养条件的优化 被引量：4

4

作者 蒋伟民 黄元华 马燕琳 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期349-352,366,共5页

人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚... 人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESCs)是早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有无限增殖、自我更新和全能分化的特性。无论在体内还是体外环境,人胚胎干细胞都能分化为机体几乎所有类型的细胞。基于其全能分化性,胚胎干细胞成为治疗各种退行性疾病的理想细胞来源。然而,在目前培养条件下所建立的胚胎干细胞株,仍然存在动物源性物质潜在污染的问题。因此,更优化的建株及培养条件十分重要。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞(hESC) 内细胞团 饲养层细胞 培养条件 mTESR1

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骨髓间充质干细胞对角膜缘干细胞微环境的影响 被引量：4

5

作者 刘爽 李海丽 晏晓明 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期141-146,共6页

背景角膜缘干细胞功能缺乏（LSCD）时不仅损伤了角膜缘干细胞（LSCs），其基质微环境也被破坏，治疗LSCD应包括补充LSCs和恢复微环境两个方面。目前改善LSCD者微环境的方法尚少，迫切需要建立更适合LSCs体外生长的微环境。目的探讨骨髓... 背景角膜缘干细胞功能缺乏（LSCD）时不仅损伤了角膜缘干细胞（LSCs），其基质微环境也被破坏，治疗LSCD应包括补充LSCs和恢复微环境两个方面。目前改善LSCD者微环境的方法尚少，迫切需要建立更适合LSCs体外生长的微环境。目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）能否成为修复角膜缘微环境的理想细胞，及其作为饲养细胞在人LSCs体外扩增过程中改善微环境的可能机制。方法体外培养人BMSCs并传3代，用流式细胞仪检测培养细胞的表面抗原CD45、CD71、CD90、CD105和HLA-DR的表达，并将其定向诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。将人BMSCs经丝裂霉素c（MMC）作用后成为饲养细胞。用供体人角膜缘组织分离培养LSCs，分别与BMSCs饲养细胞（BMSCs饲养组）、Swiss-3T3成纤维细胞饲养细胞（Swiss-3T3饲养组）共培养或单独培养（无饲养细胞组），比较3个组LSCs的集落生成率（CFE）。将BMSCs饲养组的LSCs继续进行培养，用流式细胞仪对培养的细胞进行鉴定。逆转录PCR（RT—PCR）法分析人BMSCs中相关细胞因子的表达，以评估其改善角膜缘基质微环境的可能机制。结果体外培养的BMSCs均质性好，间质细胞标志物CD71、CD90、CDl05在获得的BMSCs上均呈高表达，而造血细胞标志物CD45和HLA-DR抗原均呈低表达。共培养12d后，BMSCs饲养组、Swiss-3T3饲养组以及无饲养细胞组LSCs的CFE分别为3．67％±O．58％、4．30％±1．54％、0．20％±0．10％，3个组间总体差异有统计学意义（F=15．420，P=0．040）；BMSCs饲养组与Swiss=3T3饲养组的CFE差异无统计学意义（P=0．456）。BMSCs饲养组与无饲养细胞组间、Swiss-3T3饲养组与无饲养细胞组间CFE的差异均有统计学意义（P=0．005、0．002）。经流式细胞学检测，BMSCs饲养组LSCs的ABCG2抗原阳性。RT-PCR反应后琼脂糖凝胶电泳结果显示，碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、干细胞 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 角膜缘干细胞 饲养细胞 体外培养

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昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化 被引量：4

6

作者 任卫青 张志平 +5 位作者 许晓婷 邓立新 李小佳 吕婧玉 翟明胜 王新庄 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期316-321,共6页

为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF... 为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 饲养层 培养液 优化 小鼠

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不同杂交瘤饲养细胞上清和条件培养液中IL-2和IL-6水平的比较 被引量：2

7

作者 杨琨 金伯泉 +3 位作者 赵宁 朱勇 刘崟 刘雪松 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1992年第1期59-62,共4页

本文应用细胞因子依赖细胞株CTLL和7TD1及。³H-TDR掺入方法,分别对6种常用培养杂交瘤的饲养细胞培养上清和条件培养液中IL-2和IL-6的生物学活性水平进行了定量检测和比较。结果发现,除大鼠混合胸腺细胞培养上清... 本文应用细胞因子依赖细胞株CTLL和7TD1及。³H-TDR掺入方法,分别对6种常用培养杂交瘤的饲养细胞培养上清和条件培养液中IL-2和IL-6的生物学活性水平进行了定量检测和比较。结果发现,除大鼠混合胸腺细胞培养上清中含有约1u/ml IL-2外,其它均未测出IL-2的生物学活性。但6种上清中都含有IL-6,其中人成纤维细胞CRL₁₅₀₆和人内皮细胞中含有很高水平的IL-6,分别为10000u/ml和2512u/ml;大鼠混合胸腺细胞和小鼠腹腔巨噬细胞培养上清分别为158u/ml和126u/ml;小鼠脾脏细胞和胸腺细胞培养上清中IL-6相对较低,分别为79u/ml和16u/ml。此外,本文还对常用饲养细胞及条件培养液在杂交瘤细胞生长中可能起的主要作用进行了讨论。 展开更多

关键词 杂交瘤 饲养细胞 培养液 IL-2

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胚胎干细胞培养体系对早期胚胎发育的影响 被引量：2

8

作者 许丹 蒋晓明 +1 位作者 潘增祥 王锋 《生殖医学杂志》 CAS 2006年第3期192-195,共4页

目的利用胚胎干细胞(ES)培养体系(饲养细胞+添加条件培养基的胚胎干细胞培养液)培养早期胚胎,建立并优化移植前早期胚胎培养系统,为提高胚胎的着床率与临床妊娠率及植入前遗传学诊断奠定基础。方法将获取的521枚胚胎根据培养液及饲养细... 目的利用胚胎干细胞(ES)培养体系(饲养细胞+添加条件培养基的胚胎干细胞培养液)培养早期胚胎,建立并优化移植前早期胚胎培养系统,为提高胚胎的着床率与临床妊娠率及植入前遗传学诊断奠定基础。方法将获取的521枚胚胎根据培养液及饲养细胞的不同分为10组,分别比较各组胚胎的体外发育率。结果ES培养体系显著优于传统的胚胎培养体系(P<0.05)。ES培养体系中用SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苷亚系(STO)作饲养细胞培养效果优于小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养细胞,两种饲养细胞效果均显著优于用输卵管上皮细胞(OEC)作为饲养细胞(P<0.05)。结论ES培养体系可以显著提高早期胚胎的发育率,培养体系中STO饲养细胞较MEF饲养细胞有更好的效果。 展开更多

关键词 早期胚胎 饲养细胞 ES培养体系 发育率

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人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法 被引量：1

9

作者 谭小兵 George T-J Huang 《国际口腔医学杂志》 CAS 2014年第3期268-271,共4页

目的建立一种能维持人胚胎干细胞（ESC）和诱导性多功能干细胞（iPSC）生长的饲养层细胞的标准制备方法。方法选取受孕12．5-14．5d的CF-1雌鼠，原代培养的鼠胚胎成纤维细胞（MEF）经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞，观察其维持人ESC和i... 目的建立一种能维持人胚胎干细胞（ESC）和诱导性多功能干细胞（iPSC）生长的饲养层细胞的标准制备方法。方法选取受孕12．5-14．5d的CF-1雌鼠，原代培养的鼠胚胎成纤维细胞（MEF）经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞，观察其维持人ESC和iPSC的生长情况；同时研究不同培养器具所需细胞数量，制备高质量饲养层细胞。结果经丝裂霉素C处理后，MEF可很好维持人ESC和iPSC的生长，使其保持自我更新能力和未分化状态；控制铺板的细胞密度，可得到高质量饲养层细胞。结论本实验得到的饲养层细胞能很好支持人ESC和iPSC生长，可作为饲养层细胞制备的标准方法使用。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 人诱导性多功能干细胞 饲养层细胞 鼠胚胎成纤维细胞

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我国铝电解技术的进展 被引量：2

10

作者 李金声 《有色冶炼》 2001年第1期4-5,19,共3页

介绍了我国铝电解工业在电解质成分、下料装置、新型阴阳极、大容量预焙阳极电解槽。

关键词 电解 电解质 下料装置 电解槽 炼铝

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施道克EG-2490给煤机称重原理及常见测量故障处理 被引量：2

11

作者 李琦勤 《电力系统装备》 2019年第2期105-106,共2页

沈阳施道克电力设备有限公司的EG-2490称重式给煤机正常情况下采用称重模式运行,能够准确测量出进入磨煤机的煤量,对生产运行及相关指标做出准确指导参考。在实际使用中,经常发生由于给煤量反馈摆动甚至切换容积式模式运行,导致测量不准... 沈阳施道克电力设备有限公司的EG-2490称重式给煤机正常情况下采用称重模式运行,能够准确测量出进入磨煤机的煤量,对生产运行及相关指标做出准确指导参考。在实际使用中,经常发生由于给煤量反馈摆动甚至切换容积式模式运行,导致测量不准确,对机组的稳定运行和各参数计算造成了很大的影响。该文旨在通过剖析煤机称重测量原理,找到影响测量的根本原因,继而提出相对应的解决方案,提高设备工作的可靠性,同时对其它类型的给煤机测量原理提供参考。 展开更多

关键词 给煤机 称重传感器 测量原理

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条件重编程培养技术体外长时程分离培养原代细胞的应用进展 被引量：1

12

作者 叶方叠(综述) 杨宸(审校) 姜昊文 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期766-771,788,共7页

条件重编程(conditional reprogramming,CR)培养可以从人源组织中扩增原代细胞,并使得原代细胞能够于体外永久传代培养。CR培养体系的建立的特征主要在于新鲜消化分离的人类正常细胞或肿瘤细胞和经过辐照的小鼠成纤维细胞3T3滋养细胞在... 条件重编程(conditional reprogramming,CR)培养可以从人源组织中扩增原代细胞,并使得原代细胞能够于体外永久传代培养。CR培养体系的建立的特征主要在于新鲜消化分离的人类正常细胞或肿瘤细胞和经过辐照的小鼠成纤维细胞3T3滋养细胞在含有Rho酶抑制剂(Y-27632)的培养基中共培养。CR细胞培养体系可用于多种应用,可用于再生医学、肿瘤基因表达谱、蛋白表达谱和对药物敏感性的分析,从而提高对疾病的分子机制的认识,以及精准指导药物个性化治疗。 展开更多

关键词 条件重编程培养 原代细胞 滋养细胞 Rho相关激酶抑制剂

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潮霉素抗性3T3细胞的建立和鉴定 被引量：1

13

作者 张梅英 李华 +3 位作者 董婉维 杨葳 王禄增 王太一 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2004年第3期163-165,共3页

目的　建立具有潮霉素 (hygromycin)抗性的 3T3细胞系 ,用于转染目的基因 (pTRE Ins human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入 3T3细胞中 ,利用潮霉素的药物选择特... 目的　建立具有潮霉素 (hygromycin)抗性的 3T3细胞系 ,用于转染目的基因 (pTRE Ins human)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。方法　通过脂质体转染的方法 ,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因的质粒pHyg导入 3T3细胞中 ,利用潮霉素的药物选择特性 ,对转染细胞进行压力筛选 ,并对其进行PCR鉴定。结果　经 5 0 0 μg ml的潮霉素压力筛选后 ,获得了抗性细胞克隆。抗性 3T3细胞的形态和生长速度与正常 3T3细胞没有差异 ,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA ,可以扩增出对应的核苷酸片段。结论　成功地培育了潮霉素抗性的 3T3细胞 ,为进行目的基因 (pTRE Ins human)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 潮霉素 抗性 细胞 饲养层 基因

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3种培养体系下人胚胎干细胞神经诱导分化的比较 被引量：1

14

作者 袁丁 林戈 卢光琇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第4期31-36,共6页

【目的】比较人胚胎干细胞在人胚胎成纤维细胞、鼠胚胎成纤维细胞饲养层和无饲养层3个诱导体系下形成神经上皮祖细胞的能力。【方法】将人胚胎干细胞在人、鼠胚胎成纤维细胞饲养层或无饲养层体系中诱导10 d后,检测其胚胎干细胞和神经上... 【目的】比较人胚胎干细胞在人胚胎成纤维细胞、鼠胚胎成纤维细胞饲养层和无饲养层3个诱导体系下形成神经上皮祖细胞的能力。【方法】将人胚胎干细胞在人、鼠胚胎成纤维细胞饲养层或无饲养层体系中诱导10 d后,检测其胚胎干细胞和神经上皮祖细胞相关基因(Oct4、Nestin、Pax6、Sox1、Sox2、Sox3、β-actin)的表达,用免疫荧光染色法检测神经上皮祖细胞抗原标记Pax6、Musashi、Nestin和胚胎干细胞抗原标记SSEA4的表达。【结果】3种诱导体系下均有神经上皮祖细胞形成,均表达神经上皮祖细胞抗原标记Pax6、Musashi、Nestin及Pax6、Nes-tin、Sox家族基因。无饲养层体系诱导后的细胞,Oct4基因的表达高于有饲养层体系;其SSEA4染色阳性细胞比例为(26.3±3.5)%,高于有饲养层体系;其Pax6和Musashi染色阳性细胞比例分别为(81.0±3.0)%,(79.0±4.4)%,均低于有饲养层细胞体系。【结论】人胚胎干细胞在有饲养层和无饲养层体系中均可诱导分化形成神经上皮祖细胞,但无饲养层体系的效率相对较低,且有未分化胚胎干细胞残余。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 神经诱导 饲养层细胞

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CREG低表达饲养层STO细胞的建立 被引量：1

15

作者 田孝祥 张剑 +3 位作者 陶杰 孙鸣宇 闫承慧 韩雅玲 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第31期6034-6037,6010,共5页

目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)自我更新的影响及作用机制,本研究拟通过RNA干扰方法建立CREG低表达的饲养层STO细胞,为深入研究奠定基础。方法:... 目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)自我更新的影响及作用机制,本研究拟通过RNA干扰方法建立CREG低表达的饲养层STO细胞,为深入研究奠定基础。方法:用Western Blot方法检测饲养层细胞系STO及ESC细胞系R1中CREG基因的表达。利用Lipofectamine 2000向STO细胞中分别转染RNA干扰空对照载体,含有无意义随机序列的对照载体以及含有4种不同CREG干扰序列的载体。用1.0μg/ml嘌呤霉素筛选1 w,荧光显微镜下挑取绿色荧光蛋白表达较高的克隆进行扩增。Western Blot方法鉴定CREG基因干扰效率,获得CREG表达最低的饲养层细胞克隆。将ESC R1接种到该克隆上,不添加白血病抑制因子,连续培养3代,用碱性磷酸酶染色判断其是否分化。结果:R1几乎不表达CREG,而STO细胞高表达CREG。Western Blot结果证实筛选到的STO克隆3A干扰效果最好,达到85%。在不添加白血病抑制因子的情况下,碱性磷酸酶染色表明R1细胞在该株饲养层细胞上连续培养3代后未见明显分化。结论:成功获得CREG低表达饲养层STO细胞,为深入探讨CREG对ESC自我更新的作用及机制奠定了基础。 展开更多

关键词 CREG RNA干扰 饲养层细胞 胚胎干细胞 自我更新

原文传递

饲养层细胞作用机制研究进展 被引量：1

16

作者 周芳颖 刘玉琴 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第7期1066-1070,共5页

饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良... 饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良,从而达到最佳的培养效果。 展开更多

关键词 饲养层细胞 基因修饰 干细胞 诱导多能干细胞

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人孤雌胚胎干细胞在人包皮成纤维细胞饲养层上的生长状态 被引量：1

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作者 王志强 梁锐 +5 位作者 陈明清 董坚 邓俊 陈天星 李文亮 文政琦 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期314-318,共5页

人孤雌胚胎干细胞(human parthenogenetic embryonic stem cells,hPESCs)体外培养常需饲养层的支持以保持干细胞特性.通过原代培养获得人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,hFFs)并将其制备成饲养层,使hPESCs在hFFs上进行体外... 人孤雌胚胎干细胞(human parthenogenetic embryonic stem cells,hPESCs)体外培养常需饲养层的支持以保持干细胞特性.通过原代培养获得人包皮成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,hFFs)并将其制备成饲养层,使hPESCs在hFFs上进行体外培养及传代.倒置显微镜下观察hPESCs的生长状态,采用碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)检测、核型分析和体内分化实验研究hPESCs的生物学特性及分化潜能,以探索hFFs能否长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态.经原代培养成功获得了hFFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定符合成纤维细胞的生物学特性;在hFFs上生长的hPESCs克隆形态规则,不易分化;已成功在体外培养20余代,hPESCs仍能够保持基本生物学特性和正常核型,在裸鼠体内可形成含有3个胚层组织成分的畸胎瘤.作为人源性饲养层,hFFs可长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态. 展开更多

关键词 人孤雌胚胎干细胞 人包皮成纤维细胞 饲养层 人胚胎干细胞 细胞培养

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小鼠胚胎成纤维细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞干性的维持作用 被引量：1

18

作者 余静 曾灵 +3 位作者 李勇 邓婷婷 蒋建新 王继红 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1613-1616,共4页

目的：探讨小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast cell,MEF）作为滋养细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞（alveolar epithelial typeⅡcells,ATⅡ）干性的维持作用。方法：通过分散酶（Dispase）、分散酶/胶原酶（colleganse/d... 目的：探讨小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast cell,MEF）作为滋养细胞对体外培养肺泡上皮Ⅱ型细胞（alveolar epithelial typeⅡcells,ATⅡ）干性的维持作用。方法：通过分散酶（Dispase）、分散酶/胶原酶（colleganse/disapase）和脱氧核糖核酸酶（DNaseⅠ）联合消化小鼠肺组织,制备肺单细胞悬液,通过免疫黏附法纯化ATⅡ。高糖DMEM添加10%FBS、双抗（青霉素20 U/ml,链霉素20 U/ml）;将传代后的ATⅡ接种至丝裂霉素处理的MEF（inactivated MEF,i MEF）培养,并以肺泡表面活性蛋白C（surfactant protein C,SPC）和水通道蛋白5（aquaporins 5,AQP5）为标记蛋白进行鉴定。结果：平均每只成年小鼠可得到总有核细胞数为（1.7-2.0）×10^7。ATⅡ细胞传代接种于滋养细胞前3代都能维持在未分化状态,第4代分化成为肺泡上皮Ⅰ型细胞（alveolar epithelial typeⅠcells,ATⅠ）;而传代后没有接种在滋养细胞上的ATⅡ细胞在第1代就分化成ATⅠ细胞。结论：小鼠胚胎成纤维细胞在一定时段能够维持ATⅡ的干性。 展开更多

关键词 滋养细胞 肺泡上皮Ⅱ型细胞 细胞培养

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饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响

19

作者 赵瑞媛 刘春霞 +2 位作者 李慧鹏 王申元 周欢敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期18-24,共7页

家畜胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES细胞）的研究进展缓慢,绵羊ES细胞的研究虽早有报道,但仍未建立可稳定传代的细胞系。在已建立的绵羊体外受精发育体系的基础上,摸索了饲养层（Feeder）细胞对绵羊ES细胞生长的影响,包括在一定的... 家畜胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES细胞）的研究进展缓慢,绵羊ES细胞的研究虽早有报道,但仍未建立可稳定传代的细胞系。在已建立的绵羊体外受精发育体系的基础上,摸索了饲养层（Feeder）细胞对绵羊ES细胞生长的影响,包括在一定的丝裂霉素浓度下处理Feeder的时间、细胞种类、代数、接种密度及新鲜制备和冷冻复苏后的Feeder细胞,通过试验比较研究,目的在于筛选合适的饲养层细胞,为建立绵羊ES细胞体外培养体系奠定基础。结果表明,10μg/ml丝裂霉素C处理2~2.5h获得的1~5代的SEF和1~3代的MEF及两者的1∶1混合细胞都能较好地支持绵羊ES细胞的生长。 展开更多

关键词 绵羊 饲养层细胞 胚胎干细胞 体外培养

原文传递

人胚胎成纤维细胞饲养层支持人精原干细胞的生长

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作者 王毓斌 陈斌 +10 位作者 王颖超 张志玲 王鸿祥 卢永宁 向祖琼 胡凯 杨怡珂 韩银发 汪铮 王益鑫 黄翼然 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1063-1068,共6页

目的:探讨人精原干细胞分离、纯化及以人胚胎成纤维细胞为饲养层培养的方法和条件。方法:利用两步酶法和Percoll不连续密度离心法分离、纯化人精原干细胞,在人胚胎成纤维细胞饲养层上培养;用免疫组织化学方法检测精原干细胞表面标志SSE... 目的:探讨人精原干细胞分离、纯化及以人胚胎成纤维细胞为饲养层培养的方法和条件。方法:利用两步酶法和Percoll不连续密度离心法分离、纯化人精原干细胞,在人胚胎成纤维细胞饲养层上培养;用免疫组织化学方法检测精原干细胞表面标志SSEA-1和OCT4;检测精原干细胞克隆碱性磷酸酶活性;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测精原干细胞相关基因的表达。结果:精原干细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上可以存活并增殖形成集落。集落未分化标志检测显示SSEA-l、OCT4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,并表达精原干细胞相关基因。结论:人胚胎成纤维细胞饲养层可以支持人精原干细胞的生长。 展开更多

关键词 精原干细胞 人胚胎成纤维细胞 饲养层 分离 纯化 细胞培养 人

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