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含T细胞表位和B细胞表位的抗O型FMDV基因工程疫苗诱导豚鼠产生免疫反应 被引量:22
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作者 杨志军 林焱 +4 位作者 李光金 严维耀 徐泉兴 尤永进 郑兆鑫 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期564-568,共5页
用FMDV疫苗免疫接种是预防口蹄疫的主要手段之一 .研制既含B细胞表位又含T细胞表位的基因工程疫苗对口蹄疫的防治具有更强的保护能力 .用化学方法合成O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位肽段的T细胞表位基因 ,与 1 41~ 1 6... 用FMDV疫苗免疫接种是预防口蹄疫的主要手段之一 .研制既含B细胞表位又含T细胞表位的基因工程疫苗对口蹄疫的防治具有更强的保护能力 .用化学方法合成O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1~ 40位肽段的T细胞表位基因 ,与 1 41~ 1 60肽段的B细胞表位基因串联后 ,与 β 半乳糖苷酶基因相连 ,构建成一重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达出融合蛋白疫苗 .动物实验表明 ,该疫苗不仅能诱导豚鼠产生滴度很高的中和抗体 ,而且产生大量对病毒专一性T细胞 ,与不含 2 1~ 40肽段的疫苗相比 ,用该疫苗免疫的豚鼠血单个核细胞对FMDV的反应性提高 7倍以上 ,并能抵抗病毒攻击 .说明该疫苗可同时激活体液免疫及细胞免疫反应 ,有较强的保护作用 . 展开更多
关键词 口蹄疫 疫苗 免疫 基因工程 家畜传染病
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共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性 被引量:21
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作者 金宁一 张洪勇 +4 位作者 尹革芬 郑敏 刘彤 江文正 李子健 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期576-579,共4页
将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后... 将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1. 应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠, 经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测, 证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应. 以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗. 展开更多
关键词 fmdv 重组鸡痘病毒 免疫原性 共表达口蹄疫病毒 衣壳蛋白前体 蛋白酶 基因重组 鸡痘病毒 疫苗
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金丝桃素的体外抗口蹄疫病毒活性 被引量:11
3
作者 王曙阳 杨林西 +2 位作者 梁剑平 崔颖 尚若峰 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期310-314,共5页
将体外培养的BHK21细胞感染FMDV后加入金丝桃素,日光灯下光活化1 h,通过细胞病变观察、MTT法、透射电子显微镜观察、H3 UR掺入试验,探讨了光活化金丝桃素对FMDV体外生长增殖的影响。结果表明,金丝桃素有明显的抑制FMDV致BHK21 细胞病变... 将体外培养的BHK21细胞感染FMDV后加入金丝桃素,日光灯下光活化1 h,通过细胞病变观察、MTT法、透射电子显微镜观察、H3 UR掺入试验,探讨了光活化金丝桃素对FMDV体外生长增殖的影响。结果表明,金丝桃素有明显的抑制FMDV致BHK21 细胞病变效应,能抑制FMDV的增殖,抑制率可达61.82%。透射电镜观察,金丝桃素组与病毒对照组相比,BHK21细胞的FMDV颗粒明显减少。证实,金丝桃素在体外有明显的抑制FMDV增殖的作用。 展开更多
关键词 金丝桃素 口蹄疫病毒 BHK21细胞 增殖 活性
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A Simple and Rapid Colloidal Gold-based Immunochromatogarpic Strip Test for Detection of FMDV Serotype A 被引量:22
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作者 Tao Jiang Zhong Liang +5 位作者 Wei-wei Ren Juan Chen Xiao-ying Zhi Guang-yu Qi Xiang-tao Liu Xue-peng Cai 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第1期30-39,共10页
A sandwich format immunochromatographic assay for detecting foot-and-mouth disease virus (FMDV) serotypes was developed. In this rapid test,affinity purified polyclonal antibodies from Guinea pigs which were immunized... A sandwich format immunochromatographic assay for detecting foot-and-mouth disease virus (FMDV) serotypes was developed. In this rapid test,affinity purified polyclonal antibodies from Guinea pigs which were immunized with sucking-mouse adapted FMD virus (A/AV88(L) strain) were conjugated to colloidal gold beads and used as the capture antibody,and affinity purified polyclonal antibodies from rabbits which were immunized with cell-culture adapted FMD virus (A/CHA/09 strain) were used as detector antibody. On the nitrocellulose membrane of the immunochromatographic strip,the capture antibody was laid on a sample pad,the detector antibody was printed at the test line(T) and goat anti-guinea pigs IgG antibodies were immobilized to the control line(C). The lower detection limit of the test for a FMDV 146S antigen is 11.7ng/ml as determined in serial tests after the strip device was assembled and the assay condition optimization. No cross reactions were found with FMDV serotype C,Swine vesicular disease (SVD),Vesicular stomatiti svirus (VSV) and vesicular exanthema of swine virus (VES) viral antigens with this rapid test. Clinically,the diagnostic sensitivity of this test for FMDV serotypes A was 88.7% which is as same as an indirect-sandwich ELISA. The specificity of this strip test was 98.2% and is comparable to the 98.7% obtained with indirect-sandwich ELISA. This rapid strip test is simple,easy and fast for clinical testing on field sites; no special instruments and skills are required,and the result can be obtained within 15 min. To our knowledge,this is the first rapid immunochromatogarpic assay for serotype A of FMDV. 展开更多
关键词 Foot-and-mouth disease virus fmdv Lateral flow immunoassay Serotype A Identification Colloidal gold particle
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口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达 被引量:18
5
作者 曹轶梅 刘在新 +3 位作者 卢曾军 胡永浩 常惠芸 谢庆阁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期31-34,共4页
从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与... 从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9~ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3ABC基因 3AB基因 基因克隆 基因表达
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用大肠杆菌表达FMDV NSP3ABC鉴别感染与注苗动物ELISA方法的建立 被引量:14
6
作者 曹轶梅 卢曾军 +1 位作者 刘在新 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期381-386,共6页
用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样... 用大肠杆菌表达的FMDV NSP3ABC经纯化复性后作为抗原,建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品,确定了3ABC-I-ELISA判定标准。3ABC-I-ELISA以(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)来计算待测样品效价。当效价小于012为阴性,介于012~013之间为可疑,大于013为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性,敏感性达100%;97.06%疫苗注射动物血清为阴性;98.39%的非免疫健康牛(未感染也未注射疫苗牛)血清为阴性。研究证实感染牛在1年以后仍能检测到3ABC抗体。这说明3ABC-I-ELISA能够鉴别FMDV感染动物和注苗动物,可作为大面积疫情监测的方法应用。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达 鉴别 间接ELISA方法 fmdv 感染动物 判定标准 动物血清 血清样品 疫苗注射 注射疫苗 方法应用 疫情监测 阳性 敏感性 健康牛 检测 效价 抗原 后作 免疫 抗体
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O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗的构建、表达和纯化 被引量:15
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作者 冉波 邵明玉 +7 位作者 张培因 冯宇 卫红飞 王莉 王燕媚 胡大利 王丽颖 于永利 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期265-268,共4页
目的为了克服灭活口蹄疫病毒疫苗可能存在的传播病毒的潜在危险,构建一种能预防O型口蹄疫病毒感染的VP1表位重组蛋白疫苗。方法采用O型口蹄疫病毒(FMDV)表面VP1蛋白上的B细胞表位肽和T细胞表位肽,以PCR扩增和克隆连接等方法构建VP1表位... 目的为了克服灭活口蹄疫病毒疫苗可能存在的传播病毒的潜在危险,构建一种能预防O型口蹄疫病毒感染的VP1表位重组蛋白疫苗。方法采用O型口蹄疫病毒(FMDV)表面VP1蛋白上的B细胞表位肽和T细胞表位肽,以PCR扩增和克隆连接等方法构建VP1表位六聚体重组蛋白(VP1epi)基因,并在大肠杆菌中进行诱导表达,镍亲和层析纯化。用ELISA法检测VP1epi免疫豚鼠血清中抗FMDV抗体的水平。结果构建了一种由FMDV表面VP1中B细胞表位肽重复六次的蛋白质多肽,采用pET28原核表达系统,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达产量约占菌体蛋白的30%左右,经镍亲和层析后获得纯度高于90%的VP1表位重组蛋白。VP1epi免疫的豚鼠血清中含有一定量的抗FMDV抗体。结论VP1epi重组蛋白能诱导机体产生抗O型FMDV的抗体,说明这种重组蛋白可能成为预防O型FMDV感染的基因工程蛋白质疫苗。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 fmdv 亲和层析
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以免疫球蛋白为载体的抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗的构建 被引量:13
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作者 赵凯 陈光辉 +10 位作者 张震宇 严维耀 郑兆鑫 孙理云 盛祖恬 尤永进 徐泉兴 朱彩珠 冯霞 张强 卢永干 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期679-683,共5页
以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ ... 以自体免疫球蛋白作为外源抗原的载体来研制疫苗是一条研制安全、高效疫苗的新途径。将猪IgGH链基因中的CDR3区缺失 ,剩余的两个片段分别连接到pBluescriptⅡSK(+)和 pBluescriptⅡKS(+)上 ,其中一片段再与编码FMDVVP1两个拷贝的 141~ 16 0位氨基酸残基和一个拷贝的 2 0 0~ 2 13位氨基酸残基构成的串联片段2 0AA~ 14AA~ 2 0AA的核苷酸片段相连。然后将它们切下与质粒表达载体 pET2 8b相连 ,构建出融合表达质粒pET2 8b FH ,经限制酶酶解及DNA序列分析证明该融合基因各连接点及读框正确。转入大肠杆菌BL2 1(DE3) plysS表达出一分子量为 6 4kD的蛋白质。经ELISA检验证明 ,大肠杆菌细胞中表达的融合蛋白有O型FMDV抗原活性。将该融合蛋白肌肉注射免疫豚鼠和猪 ,攻毒实验表明 ,疫苗pET2 8b FH对豚鼠产生了保护作用 ,保护率为 6 6 % ,对猪也有保护作用。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 O型口蹄疫病毒 构建
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O型口蹄疫泛亚毒株单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析 被引量:12
9
作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 韩松 郑敏 王凯 贾雷立 尹革芬 金扩世 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期494-496,共3页
用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160~1... 用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160~1:640,腹水为1:5×104~1:4×105;经ELISA法测定,3株单克隆抗体均与泛亚株VP1蛋白反应,而不与A型口蹄疫病毒VP1蛋白反应;单抗的亚类鉴定结果表明,ⅢA11和ⅢF10分泌的抗体为IgG1亚类,ⅢC3分泌的抗体为IgG2b亚类.单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明,ⅢA11与另外2种单克隆抗体的识别位点不同,而ⅢC3和ⅢF10的识别位点相近. 展开更多
关键词 口蹄疫 O型 泛亚毒株 单克隆抗体 识别位点
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口蹄疫病毒VP1蛋白在酵母中的表达及免疫原性分析 被引量:10
10
作者 金华利 张富春 +3 位作者 单文娟 张爱莲 李轶杰 王宾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期513-516,共4页
目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的... 目的 :利用毕赤酵母表达系统表达牛O型口蹄疫外壳蛋白(FMDVVP1) ,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法 :将FMDVvp1基因克隆到毕赤酵母Pichiapastoris分泌性表达载体pSuperY中 ,构建重组表达载体pSuperY/vp1,经测序证明vp1基因序列的正确性。将纯化的重组质粒经线性化酶切后 ,用电转化法将pSuperY/vp1导入毕赤酵母菌种SMD116 8H中。对表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行分析 ,并用酵母表达的FMDVVP1蛋白免疫小鼠。结果 :以重组质粒pSuperY/vp1转化毕赤酵母菌后 ,能表达相对分子量 (Mr)为 6 6 0 0 0和4 30 0 0的FMDVVP1蛋白。动物免疫结果表明 ,FMDVVP1蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。结论 :在毕赤酵母中成功地表达FMDVVP1蛋白 。 展开更多
关键词 蛋白 酵母表达 VP1 免疫原性 毕赤酵母菌 重组质粒 细胞免疫应答 口蹄疫病毒 VP1基因 fmdv
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塞尼卡谷病毒病研究进展 被引量:16
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作者 樊晓旭 迟田英 +2 位作者 赵永刚 吴晓东 王志亮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期831-834,共4页
2015年9月以来,美国中西部多个地区的猪群发生水疱性疫情,几呈蔓延之势,感染猪的鼻吻、蹄冠状带部位出现水疱样病变,偶见腹泻症状,病情急促,新生仔猪病死率达30%-70%。经梅岛外来动物疾病实验室(FADDL)病原学鉴别诊断,排除口蹄疫、猪... 2015年9月以来,美国中西部多个地区的猪群发生水疱性疫情,几呈蔓延之势,感染猪的鼻吻、蹄冠状带部位出现水疱样病变,偶见腹泻症状,病情急促,新生仔猪病死率达30%-70%。经梅岛外来动物疾病实验室(FADDL)病原学鉴别诊断,排除口蹄疫、猪水疱病和水疱性口炎等重要外来动物疫病,最终被确诊为塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)感染。 展开更多
关键词 水疱病 仔猪病死率 腹泻症状 蹄冠 病毒分类 动物疾病 口蹄疫病毒 实验室诊断 fmdv 疫病控制
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口蹄疫疫苗最新研究进展 被引量:16
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作者 何随彬 金盈宇 +4 位作者 龚志亮 金耀忠 姜法铭 曹杰 叶承荣 《上海畜牧兽医通讯》 2019年第2期30-32,35,共4页
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病,可感染猪、牛、羊等多种主要家畜,造成巨大经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织将其列在A类动物疫病名单之首,我国政府将其排... 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性和可快速远距离传播的动物疫病,可感染猪、牛、羊等多种主要家畜,造成巨大经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织将其列在A类动物疫病名单之首,我国政府将其排在一类动物传染病首位,这充分显示了国内外对该病的重视程度。预防和控制牲畜口蹄疫是各级政府所面临的紧迫而严峻的课题,目前疫苗免疫仍是预防该病的主要措施之一。本文通过对国内外口蹄疫疫苗的研究情况进行归纳总结,为今后口蹄疫新型疫苗的设计开发提供新的思路和参考。 展开更多
关键词 口蹄疫 FMD fmdv 新型疫苗
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应用反转录-聚合酶链反应检测口蹄疫病毒 被引量:10
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作者 朱彩珠 卢永干 +6 位作者 邱孝高 赵启祖 谢庆阁 张维德 员美蓉 杨福荣 张强 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期272-278,共7页
建立了一种适用于检测动物(猪、牛、羊)组织(肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮)和牛食道-咽部分泌物(O-P液)中的口蹄疫(FMD)病毒核酸(RNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。引物对是人工合成的两条... 建立了一种适用于检测动物(猪、牛、羊)组织(肌肉、淋巴结、脊髓、扁桃体和蹄冠皮)和牛食道-咽部分泌物(O-P液)中的口蹄疫(FMD)病毒核酸(RNA)的反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术。引物对是人工合成的两条20mer寡核苷酸片段,它们的序列相应于FMD病毒结构蛋白VP1基因后2/3区段,在4个血清型之间基本一致(保守)。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测。试验结果表明,RT-PCR具有良好的特异性,属该4个血清型的各个毒株都获得了预计长度的DNA片段;而相关的小RNA病毒科的猪水泡病(SVD)和柯赛奇B5(Cox.B5)病毒(特异性对照),及未感染的细胞培养物和动物组织(空白对照)都是阴性。与常规检测方法相比,该RT-PCR的检测灵敏度提高6-12倍,最高可检测20TCID50(细胞毒)或0.16~0.32LD50(组织毒)的病毒量,二次扩增还可提高检测灵敏度100倍。因为直接利用组织样品,检测试验快速简便,可在24小时内获得结果。应用该方法已检测了232份组织样品和58份O-P液样品。 展开更多
关键词 RT-PCR fmdv RNA萃取 动物组织 O-P液
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抗原表位的研究方法及口蹄疫病毒抗原表位的研究进展 被引量:12
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作者 张中旺 张永光 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1302-1310,共9页
本文综述了近几年来用于B细胞表位及T细胞表位研究的常用方法及其在口蹄疫病毒抗原表位研究中的应用,并介绍了口蹄疫病毒抗原表位的研究进展。
关键词 B细胞表位 T细胞表位 fmdv
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构建多顺反子表达载体的有效工具——FMDV 2A 被引量:12
15
作者 刘必胜 刘新垣 钱程 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期765-769,共5页
近年来肿瘤多基因治疗倍受关注,然而目前缺少一种有效的构建多顺子的工具。传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显著等缺陷,严重限制了其应用。FMDV2A,因其具有结构小、剪切效率高等优点为多基因治疗... 近年来肿瘤多基因治疗倍受关注,然而目前缺少一种有效的构建多顺子的工具。传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显著等缺陷,严重限制了其应用。FMDV2A,因其具有结构小、剪切效率高等优点为多基因治疗带来了新的希望。主要介绍了FMDV2A的特性、"剪切"活力及其在构建多顺反子载体中的应用。 展开更多
关键词 fmdv 2A 多顺反子 基因治疗 肿瘤
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O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达 被引量:11
16
作者 郑敏 金宁一 +3 位作者 鲁会军 韩松 金扩世 李昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期561-563,共3页
首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,... 首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,转化大肠杆菌BL 21(DE 3)进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,VP 1O基因在大肠杆菌中获得表达。W estern b lotting检测证实表达的VP 1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化,获得了较高纯度的VP 1O蛋白。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 O型 VP1基因 克隆 表达
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抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析 被引量:9
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作者 何永强 盛祖恬 +1 位作者 杜青云 倪征 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期433-434,共2页
用 EL ISA叠加试验 ,对 5株具有 EL ISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒 (FMDV)单克隆抗体 (Mc Ab- A6、F9、G17、G5 2、S2 5 )的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明 ,5株单抗分别针对 4个不同抗原位点 ,Mc Ab- G17、G5 2、S2 5识别... 用 EL ISA叠加试验 ,对 5株具有 EL ISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒 (FMDV)单克隆抗体 (Mc Ab- A6、F9、G17、G5 2、S2 5 )的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明 ,5株单抗分别针对 4个不同抗原位点 ,Mc Ab- G17、G5 2、S2 5识别的位点各不相同 ,其中 Mc Ab- G7、G5 2识别的位点有部分重叠 ,Mc Ab- A6、F9识别同一位点 ,位于 G17、G5 2位点的重叠区内。 展开更多
关键词 猪口蹄疫病毒 单克隆抗体 抗原位点 ELISA叠加试验
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反应器细胞悬浮培养和微载体培养技术在动物疫苗生产中的应用 被引量:14
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作者 张韧 王建超 +4 位作者 陈文庆 刘华杰 高飞 徐舸辰 林龙飞 《中国兽药杂志》 2012年第11期39-43,共5页
介绍了反应器悬浮培养技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状。目前该技术已经在国内口蹄疫疫苗生产中获得成功应用,利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中。积极推广和应用这一技术将是我国兽用生物制品生... 介绍了反应器悬浮培养技术在国内外疫苗生产中的研发和应用现状。目前该技术已经在国内口蹄疫疫苗生产中获得成功应用,利用MDCK、Vero等细胞培养生产禽流感疫苗的技术也正在积极研发中。积极推广和应用这一技术将是我国兽用生物制品生产工艺升级换代的必然趋势。 展开更多
关键词 生物反应器 悬浮培养 微载体培养 口蹄疫 禽流感
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O型口蹄疫病毒VP1 T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB、STⅠ肠毒素基因融合表达产物的免疫应答 被引量:12
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作者 庄娟 尤永进 +2 位作者 陈波 饶忠 潘洁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期557-562,共6页
合成O型口蹄疫病毒VP1蛋白中与细胞免疫(21~40表位肽)及体液免疫(141~160表位肽)相关的基因序列2020VP1,运用基因工程技术构建了含有肠毒素大肠杆菌LTB、STⅠ基因及双拷贝2020VP1的融合表达载体r2020-B-2020-STⅠ,转化宿主菌BL2... 合成O型口蹄疫病毒VP1蛋白中与细胞免疫(21~40表位肽)及体液免疫(141~160表位肽)相关的基因序列2020VP1,运用基因工程技术构建了含有肠毒素大肠杆菌LTB、STⅠ基因及双拷贝2020VP1的融合表达载体r2020-B-2020-STⅠ,转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS—PAGE分析,结果显示重组融合蛋白的分子量约为45kDa,表达量较高。ELISA实验结果显示,融合蛋白能与霍乱毒素(cholera toxin)CTB抗体特异结合。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下能够产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白能诱导机体产生FMDV特异性细胞及体液免疫反应;同时,融合蛋白免疫雌鼠能够抵抗大肠杆菌强毒株攻击,免疫兔体能够产生STⅠ中和抗体,且融合蛋白不具STⅠ毒性,证明融合蛋白具有良好的LTB、STⅠ免疫原性。实验结果表明,此融合蛋白具有开发成为口蹄疫及肠毒素腹泻联合疫苗的应用价值。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1 T细胞表位 B细胞表位 肠毒素大肠杆菌 LTB ST 免疫应答
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大肠埃希氏菌表达FMDV3AB非结构蛋白的纯化复性与活性检测 被引量:11
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作者 曹轶梅 卢曾军 +1 位作者 刘在新 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第8期22-25,共4页
采用超声波裂解细菌 ,高浓度尿素裂解包涵体和金属螯合亲合层析的方法对大肠埃希氏菌中表达的FMDV 3AB非结构蛋白进行纯化 ,经SDS PAGE分析 ,3AB融合蛋白纯度达 90 %以上。采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对融合蛋白... 采用超声波裂解细菌 ,高浓度尿素裂解包涵体和金属螯合亲合层析的方法对大肠埃希氏菌中表达的FMDV 3AB非结构蛋白进行纯化 ,经SDS PAGE分析 ,3AB融合蛋白纯度达 90 %以上。采用稀释法和氧化型、还原型谷胱甘肽系统相结合方法对融合蛋白进行复性 ,通过Westernblotting分析 ,表明复性后的 3AB融合蛋白能与抗FMDV抗体发生特异性结合。ELISA检测表明 ,复性后的 3AB融合蛋白有很好的抗原活性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3AB非结构蛋白 纯化 复性 抗原活性 大肠埃希氏菌表达
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