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重型再生障碍性贫血患者外周血树突细胞亚群及共刺激分子表达的研究 被引量:14
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作者 涂梅峰 邵宗鸿 +11 位作者 刘鸿 何广胜 施均 白洁 曹燕然 王化泉 邢莉民 崔振珠 孙娟 陈辉树 薛艳萍 杨崇礼 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期611-615,共5页
目的了解重型再生障碍性贫血(SAA)患者在免疫抑制治疗(IST)前、后外周血树突细胞(DC)亚群数量、比值的变化,测定外周血 T 细胞激活协同分子(CD80、CD86、CD40)在树突细胞及 B细胞表面的表达。方法用单克隆抗体三标法和流式细胞术检测26... 目的了解重型再生障碍性贫血(SAA)患者在免疫抑制治疗(IST)前、后外周血树突细胞(DC)亚群数量、比值的变化,测定外周血 T 细胞激活协同分子(CD80、CD86、CD40)在树突细胞及 B细胞表面的表达。方法用单克隆抗体三标法和流式细胞术检测26例发病期和13例 IST 后恢复的SAA 患者外周血髓系 DC 前体(pDC1)与淋系 DC 前体(pDC2)的数量、比例,并与15名正常对照比较。其中10例患者检测了治疗前、后2个月的 pDC1与 pDC2的数量。检测16例 SAA 患者及12名正常对照外刷血 DC 及 B 淋巴细胞表面 CD80、CD86、CD40的表达。结果正常对照组外周血 pDC 总量、pDC1、pDC2及 pDC1/pDC2比值分别为(0.72±0.08)%,(0.41±0.05)%,(0.30±0.05)%,1.58±0.18:而初发 SAA 患者为(0.96±0.18)%,(0.67±0.13)%.(0.32±0.06)%,2.70±0.32,pDC1显著增多(P<0.05),pDC1/pDC2比例明显失衡(P<0.01);恢复期 SAA 患者上述指标下降为(0.77±0.13)%,(0.43±0.10)%,(0.34±0.09)%,1.78±0.36,与正常对照组无差异(P 值均>0.05)。10例 SAA 患者治疗前 pDC1、pDC2及 pDC1/pDC2比值分别为(0.87±0.31)%,(0.35±0.09)%,2.65±0.40,治疗2个月后分别为(0.24±0.09)%,(0.14±0.04)%,2.16±0.26,pDC1、pDC2显著下降(P值均<0.05)。正常对照组外周血 DC 表面 CD80、CD86、CD40的表达分别为(1.61±0.84)%,(11.97±4.31)%,(0.56±0.45)%,而 SAA 患者分别为(9.14±4.08)%,(29.84±3.02)%,(7.04±3.79)%,SAA 患者 DC 表面 CD86表达明显高于正常对照(P<0.05)。正常对照组外周血淋巴细胞CD19、CD80、CD86、CD40的表达分别为(9.38±0.92)%,(2.57±0.44)%,(1.86±0.32)%,(7.34±1.22)%;而 SAA 患者分别为(11.12±2.26)%,(5.17±0.68)%,(5.98±0.96)%,(8.85±2.49)%,CD80^+细胞、CD86^+细胞比例明显高于正常对照(P 值分别为<0.05和0.01)。正常对照外周血 B 淋巴细胞 CD80、CD86、CD40的表达分别为(28.22±3.56)%,(8.04±0.66)%,(81.6±6.48)%;而 SAA患者分别为(23.06±3.73)%,(20.46±2.78)%,(81.57±5.29)%,SAA 患者 B 淋巴细胞上 CD86表达明显高� 展开更多
关键词 贫血 再生障碍性 树突细胞 协同刺激分子
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Hsp70-H22肿瘤细胞肽复合物与树突状细胞成熟的关系 被引量:8
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作者 黄波 冯作化 +1 位作者 张桂梅 李东 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期113-116,共4页
探讨热休克蛋白 70 (Hsp70 ) - H2 2肽复合物与小鼠骨髓来源的树突状细胞 (dendritic cell,DC)成熟之间的关系。采用 GM- CSF、IL- 4刺激培养小鼠骨髓细胞 ,增殖产生大量 DCs;从 H2 2肝癌细胞中获取肿瘤细胞肽 ,体外与Hsp70进行结合 ,... 探讨热休克蛋白 70 (Hsp70 ) - H2 2肽复合物与小鼠骨髓来源的树突状细胞 (dendritic cell,DC)成熟之间的关系。采用 GM- CSF、IL- 4刺激培养小鼠骨髓细胞 ,增殖产生大量 DCs;从 H2 2肝癌细胞中获取肿瘤细胞肽 ,体外与Hsp70进行结合 ,结合产物修饰 DC,通过细胞因子检测试剂盒和流式细胞仪对修饰的 DCs上清液和 DCs膜表面分子进行检测。发现 Hsp70 - H2 2肽复合物修饰的 DCs大量分泌 IL- 12、TNF- α、IL- 1β等细胞因子 ,并且高表达主要组织相容性 类抗原 (MHC 类 )、 CD80、 CD40等分子 ,而单独的 Hsp70或 H2 2肽则不具有此作用。结果提示 :Hsp70 - H2 2肽复合物可诱导 DC成熟 ,这种成熟的 展开更多
关键词 热休克蛋白70-H22肿瘤细胞肽复合物 树突状细胞 细胞成熟 肿瘤免疫
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自身免疫性疾病免疫发病机制概况 被引量:8
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作者 李成荣 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第5期411-414,共4页
自身免疫性疾病(auloimmune disease,AD)是一组病因未明的慢性炎症性疾病:自身反应T、B细胞过度活化,自身抗体大量产生,多系统多器官广泛损害为其基本特征。AD发病机制尚未完全清楚,在遗传和环境因素影响下,固有(innate)免疫... 自身免疫性疾病(auloimmune disease,AD)是一组病因未明的慢性炎症性疾病:自身反应T、B细胞过度活化,自身抗体大量产生,多系统多器官广泛损害为其基本特征。AD发病机制尚未完全清楚,在遗传和环境因素影响下,固有(innate)免疫和适应性(adaptive)免疫功能紊乱参与其发病、 展开更多
关键词 自身免疫性疾病 树突状细胞
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树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展 被引量:9
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作者 魏静 王保龙 《国际免疫学杂志》 CAS 2012年第4期265-268,共4页
树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),能激活静息T细胞并使其增殖,产生抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),从而发挥抗肿瘤免疫效应。近年来,人们在肿瘤疫苗的研究中,采用多种策略制备DC肿瘤疫苗,... 树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),能激活静息T细胞并使其增殖,产生抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),从而发挥抗肿瘤免疫效应。近年来,人们在肿瘤疫苗的研究中,采用多种策略制备DC肿瘤疫苗,尝试通过改变机体免疫系统对肿瘤的免疫状态来加强机体的免疫功能,进而清除肿瘤细胞,而对正常组织几乎无伤害,因此有很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 树突状细胞 肿瘤疫苗 抗肿瘤
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转化生长因子β对肿瘤免疫抑制作用的研究进展 被引量:5
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作者 李佳 韦敏怡 《医学综述》 2008年第3期350-352,共3页
转化生长因子β(TGF-β)具有调节细胞生长、分化,调控细胞凋亡,促进细胞外基质合成和血管的新生,抑制机体免疫反应等多种生物学功能,与良恶性肿瘤的发生发展有密切的关系。近年来研究表明,TGF-β是一种很强的免疫抑制因子,可通过抑制机... 转化生长因子β(TGF-β)具有调节细胞生长、分化,调控细胞凋亡,促进细胞外基质合成和血管的新生,抑制机体免疫反应等多种生物学功能,与良恶性肿瘤的发生发展有密切的关系。近年来研究表明,TGF-β是一种很强的免疫抑制因子,可通过抑制机体免疫系统杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤的生长、侵袭及转移,本文就TGF-β对肿瘤免疫抑制作用的研究进展做一综述。 展开更多
关键词 转化生长因子Β 免疫抑制 T淋巴细胞 树突状细胞
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β-榄香烯联合DC/DRibble疫苗治疗小鼠肝癌免疫机制研究 被引量:7
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作者 倪菲菲 刘亚军 +4 位作者 周浩 林琳 刘增巍 沈洪 王立新 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期214-219,共6页
目的观察β-榄香烯联合DC/DRibble疫苗对小鼠肝癌的治疗作用,探讨β-榄香烯抗肿瘤的免疫机制。方法制备Balb/c小鼠脾脏来源的DC并鉴定其表型,以Balb/c小鼠来源的肝癌细胞株BNL1MEA.7R.1(简称BNL)为靶细胞,募集富含肿瘤"信息"... 目的观察β-榄香烯联合DC/DRibble疫苗对小鼠肝癌的治疗作用,探讨β-榄香烯抗肿瘤的免疫机制。方法制备Balb/c小鼠脾脏来源的DC并鉴定其表型,以Balb/c小鼠来源的肝癌细胞株BNL1MEA.7R.1(简称BNL)为靶细胞,募集富含肿瘤"信息"的抗原载体—自噬小体,制备DC/DRibble疫苗。预先免疫小鼠,分设对照组、β-榄香烯组、疫苗组、联合组,对照组皮下、腹腔注射PBS,β-榄香烯组和联合组连续7天腹腔注射β-榄香烯50mg/(kg·d),疫苗组和联合组分别在第1天淋巴结注射疫苗,第3、5天皮下注射疫苗,第10天处死小鼠,无菌获得小鼠脾脏,制备悬液,分设不加刺激和Dribble刺激组,孵育72h,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。另外给予联合组小鼠脾细胞不同刺激,分设对照组、DRibble组、DC组、疫苗组,孵育72h,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。建立小鼠肝癌荷瘤模型,分为对照组、β-榄香烯组、疫苗组、联合组,治疗方式同上免疫方式,观察各组小鼠的肿瘤大小及生存期,第23天处死小鼠,剥取肿瘤组织经HE染色,光学显微镜观察肿瘤组织病理形态学表现。结果体外检测发现不同方式免疫后小鼠中,联合组IFN-γ分泌量明显高于其他组(P<0.01),β-榄香烯组、疫苗组高于对照组(P<0.01);给予免疫后小鼠脾细胞不同刺激,发现疫苗组、Dribble组均能刺激脾细胞分泌大量IFN-γ(P<0.01),当β-榄香烯刺激浓度10μg/mL时,IFN-γ分泌明显增多(P<0.01);体内观察发现联合组小鼠肿瘤生长速度明显减慢,瘤表面积、生存期与其他组相比均有统计学差异(P<0.01),肿瘤组织HE染色可见周围结缔组织包裹紧密完整,大量炎性细胞浸润。结论β-榄香烯联合DC/DRibble疫苗能够诱导特异性免疫细胞分泌细胞因子功能增强,从而发挥抗肿瘤作用,其免疫效应基础可能与增强DC抗原递呈功能有关。 展开更多
关键词 Β-榄香烯 肝癌 树突状细胞 自噬小体
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大鼠树突状细胞的体外扩增与初步鉴定(英文) 被引量:4
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作者 王云甫 孙圣刚 +2 位作者 杨敬宁 曹学兵 吴雄文 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期8-11,共4页
目的建立体外诱导和扩增大鼠骨髓树突状细胞(DCs)的方法,并进行生物学鉴定。方法大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)培养2周。经过光镜,透射电镜观察培养DCs的形态学特征;通过同种T细胞混合培养,采用MTT比色分... 目的建立体外诱导和扩增大鼠骨髓树突状细胞(DCs)的方法,并进行生物学鉴定。方法大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)培养2周。经过光镜,透射电镜观察培养DCs的形态学特征;通过同种T细胞混合培养,采用MTT比色分析法测定不同浓度的DCs发同种T细胞增殖的能力。结果培养的DC胞浆突起大而长,呈树突状,具有DCs的典型形态,并且具有强烈的激发同种异体T细胞增殖的能力。结论采用大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮细胞,加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)序贯培养,能获得大量、较高纯度的DCs。 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞因子 生物学特征
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B7反义肽预处理的受体树突状细胞诱导供体特异性的免疫低反应 被引量:5
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作者 姚宇锋 项建斌 蔡端 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1130-1132,共3页
目的探讨负载供体抗原的受体耐受性树突状细胞(DC)在器官移植慢性排异中的作用,为抗移植慢性排异提供新的途径。方法利用B7反义肽与负载供体抗原的成熟DC体外孵育,封闭表面B7分子,模拟不成熟DC,建立体外供体间接识别途径反应体系,观察... 目的探讨负载供体抗原的受体耐受性树突状细胞(DC)在器官移植慢性排异中的作用,为抗移植慢性排异提供新的途径。方法利用B7反义肽与负载供体抗原的成熟DC体外孵育,封闭表面B7分子,模拟不成熟DC,建立体外供体间接识别途径反应体系,观察其体外抑制受体T细胞增殖作用,收集两者反应后的受体T细胞与负载供体抗原或无关供体抗原的DC作混合淋巴细胞反应;或者通过以B7反义肽封闭的负载供体抗原的受体DC对受体小鼠预处理,3 d后取脾脏分离T细胞,与负载供体抗原或无关供体抗原的DC作混合淋巴细胞反应。结果B7反义肽封闭的DC具有抑制T细胞增殖的作用(P<0.01),同时反应体系中抑制作用在B7反义肽终浓度处于10 mg/L与1 mg/L之间出现突变。与B7反义肽封闭的负载供体抗原的DC反应后的T细胞,产生对间接途径呈递的供体抗原的低反应性。结论B7反义肽封闭的DC可以抑制T细胞增殖,以此诱导针对间接途径呈递的供体抗原的特异性低反应性,从而抑制移植物慢性排异反应。 展开更多
关键词 树突状细胞 免疫反应 肽类
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应用骨髓法培养树突状细胞的研究 被引量:6
9
作者 吴舰宇 宋春芳 +3 位作者 许评 宋纯 石于波 刘锐 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期796-797,共2页
目的探讨培养树突状细胞(DC)的最佳方法和合理的培养时间。方法取大鼠的骨髓细胞分别加入4种细胞因子重组大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rrGMCSF)5μg/L,重组大鼠白细胞介素4(rrIL4)5μg/L,重组大鼠肿瘤坏死因子α(rrTNFα)10μg/L,... 目的探讨培养树突状细胞(DC)的最佳方法和合理的培养时间。方法取大鼠的骨髓细胞分别加入4种细胞因子重组大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rrGMCSF)5μg/L,重组大鼠白细胞介素4(rrIL4)5μg/L,重组大鼠肿瘤坏死因子α(rrTNFα)10μg/L,重组大鼠γ干扰素(rrγIFN)20μg/L培养2周,并用PE标记的抗大鼠CD86单克隆抗体检测它的成熟度。结果从第7天开始细胞周围开始逐渐伸出突起,第13天以后突起5~6支左右,且长度逐渐缩短,成熟的树突状细胞伸出长短不等的突起,类似神经细胞的树突。60只大鼠培养所得的树突状细胞平均为(1.18±0.21)×107第7、11、13、15天的CD86单抗的阳性率分别为30%、80%、92%、94%,随着时间的延长,它的阳性率不断增加,尤以第1周到第2周之间增长的特别明显,但2周以后,树突状细胞的成熟度无明显提高。结论应用骨髓法来培养树突状细胞加入细胞因子rrGMCSF、rrIL-4、rrTNF-α、rr-γ-IFN培养2周,可得到成熟的树突状细胞。 展开更多
关键词 树突状细胞 巨噬细胞集落刺激因子 大鼠肿瘤坏死因子-Α 单克隆抗体检测 rTNF-α CD86 白细胞介素 Γ-IFN 培养时间 鼠粒细胞 因子重组 骨髓细胞 γ干扰素 神经细胞 细胞因子 5μg 成熟度 阳性率 种细胞 突起
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姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤作用的影响 被引量:5
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作者 秦晓飞 赵明耀 董子明 《中医药导报》 2014年第2期74-76,共3页
目的:研究姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤功能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC,加入ABP溶液,流式细胞仪检测DC表面CD86和CD11a的表达,混合淋巴细胞反应检测ABP对DC抗原提呈能力的影响,MTT法检测... 目的:研究姬松茸多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤功能的影响,为临床应用提供理论依据。方法:体外培养小鼠骨髓来源DC,加入ABP溶液,流式细胞仪检测DC表面CD86和CD11a的表达,混合淋巴细胞反应检测ABP对DC抗原提呈能力的影响,MTT法检测ABP对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对H22肝癌细胞杀伤功能的影响。结果:中剂量ABP组(100μg/mL)DC表面CD86、CD11a表达上调;CTL对肿瘤细胞的杀伤率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:适当浓度的ABP能促进DC分化成熟,增强DC的抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 姬松茸多糖 树突状细胞 抗肿瘤
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Decrease of Peripheral Blood CD8+/CD28- Suppressor T Cell Followed by Dentritic Cells Immunomodulation among Metastatic Breast Cancer Patients 被引量:1
11
作者 Guo-hong Song Jun Ren Lijun Di Jing Yu Jie Zhang Bin Shao Jun Jia Wei Sun 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第4期310-315,共6页
Objective: To explore the effects of dentritic cells on the peripheral blood lymphocyte subpopulations of metastatic breast cancer patients treated with chemotherapy. Methods: The current study involved 44 metastati... Objective: To explore the effects of dentritic cells on the peripheral blood lymphocyte subpopulations of metastatic breast cancer patients treated with chemotherapy. Methods: The current study involved 44 metastatic breast cancer patients treated with docetaxel-based chemotherapy. Among them, 25 cases were treated with dendritic cells derived from CD34+ hematopoietic stem cells enriched autologous peripheral mononuclear cells after chemotherapy, and 19 cases received chemotherapy alone. Peripheral blood samples were collected from each patient before and after treatment, and lymphocyte subpopulations including CD3+, CD3+/CD4+, CD3+/CD8+, CD3-/CD16+56+, CD3+/CD16+56+, CD4+/CD25+, CD8+/CD28-, CD8+/CD28+, CD4/CD8, DC1, DC2 and DC1/DC2 were analysed by a 3-color flow cytometric analysis. Results: The two treatment groups were well matched with regard to demographic and baseline disease characteristics. Comparing the changes of lymphocyte subpopulations between the two groups, it showed that the difference of the change of CD8+/CD28-lymphocyte had statistic significance. The percentage of CD8+/CD28-lymphocyte was lower in the chemotherapy+DC group, but higher in the chemotherapy-alone group. Conclusion: As CD8+/CD28-lymphocyte represent a kind of suppressive T lymphocyte, we conclude that dentritic cell therapy can relieve immunosuppression to some extent. 展开更多
关键词 Metastatic breast cancer dentritic cell Lymphocyte subpopulations Regulatory T cell
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胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响 被引量:4
12
作者 孙华文 杨清 邹声泉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期626-628,共3页
目的 研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型 p5 3的树突状细胞 (wtp5 3DC)免疫功能的影响。方法 将全长野生型 p5 3导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC ,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp5 3DC ,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果 抗... 目的 研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型 p5 3的树突状细胞 (wtp5 3DC)免疫功能的影响。方法 将全长野生型 p5 3导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC ,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp5 3DC ,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果 抗原肽修饰的wtp5 3DC和单纯DC这 4种上清 3种细胞因子含量明显增加为 :( 5 45 .2± 12 .1)ng/L ,( 5 11.1± 13 .3 )ng/L ,( 5 3 7.1±11.1)ng/L ;wtp5 3DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;该细胞高表达B7 1、B7 2、MCH Ⅰ、MCH Ⅱ (P <0 .0 5 ) ;能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81.6%。结论全长野生型 p5 3基因转染与胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。 展开更多
关键词 胆管癌 抗原肽 野生型P53 树突状细胞 免疫功能 基因转染
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骨髓源性而非脾源性树突状细胞能够诱导产生调节性T细胞 被引量:4
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作者 周海涛 黄宪章 +2 位作者 吴新忠 陈炜烨 吴晓宾 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1015-1020,共6页
越来越多的证据表明,树突状细胞(DC)能够通过刺激CD4+T细胞产生调节性T细胞(Treg)而参与免疫耐受。本研究旨在探索骨髓源性DC(bone marrow-derived DC,BM-DC)或脾源性DC(spleen derived DC,spDC)诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg产生的可能性。... 越来越多的证据表明,树突状细胞(DC)能够通过刺激CD4+T细胞产生调节性T细胞(Treg)而参与免疫耐受。本研究旨在探索骨髓源性DC(bone marrow-derived DC,BM-DC)或脾源性DC(spleen derived DC,spDC)诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg产生的可能性。以GM-CSF和IL-4从C57BL/6小鼠骨髓前体细胞诱导产生骨髓未成熟DC(immature DC,imDC);6 d后,imDC经脂多糖(LPS)进一步刺激16 h得到成熟树突状细胞(mature DC,mDC);同时用免疫磁珠从小鼠脾脏分选得到spDC,以这3种DC分别与新鲜分离的BALB/c小鼠脾CD4+T细胞混合培养,诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg的产生;用流式细胞仪检测CD4+T细胞中FOXP3的表达,对比分析3种DC诱导产生CD4+CD25+FOXP3+Treg的能力。结果表明:经C57BL/6小鼠骨髓imDC、mDC的刺激,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的FOXP3表达率从(8.57±1.14)%分别提高到(15.80±1.35)%、(17.93±1.45)%(P<0.01);经spDC的刺激,BALB/c小鼠的CD4+T细胞中的FOXP3表达率则从(8.57±1.14)%下降到(3.95±0.79)%(P<0.05)。结论:体外诱导的BM-DC而非spDC能够诱导Treg的产生,具有介导免疫耐受的作用。 展开更多
关键词 调节性T细胞 树突状细胞 FOXP3
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重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌 被引量:4
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作者 张鑫 周振华 +3 位作者 李曼 高亚婷 孙学华 高月求 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页
目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF... 目的探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制。方法采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10μg/m L rhHBcAg刺激mDC 1~6 d;分别用25μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/L c-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1 h,再给予10μg/m L rhHBcAg刺激48 h。之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western blot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平。结果与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变。结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎病毒感染 树突状细胞 乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg) 白细胞介素15(IL-15) p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)
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MUC1蛋白在侵袭性垂体腺瘤表达及其诱导抗肿瘤免疫反应的研究 被引量:4
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作者 马立新 刘志慧 +5 位作者 隋德华 徐文虎 王波 邢海龙 李勐 李泽福 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1250-1255,共6页
目的探讨MUC1蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达及其诱导的抗肿瘤免疫反应。方法收集滨州医学院附属医院及山东大学齐鲁医院神经外科自2009年3月至2014年12月手术切除的人垂体腺瘤标本86例,其中侵袭性垂体腺瘤42例,非侵袭性垂... 目的探讨MUC1蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达及其诱导的抗肿瘤免疫反应。方法收集滨州医学院附属医院及山东大学齐鲁医院神经外科自2009年3月至2014年12月手术切除的人垂体腺瘤标本86例,其中侵袭性垂体腺瘤42例,非侵袭性垂体腺瘤44例,采用免疫组化染色、Westernblotting检测标本MUCl蛋白的表达;术前取患者外周全血400mL,分离外周血单个核细胞(PBMC)并诱导培养树突状细胞(DCs),将DCs分为MUCl组、5μg/mLpolyI:C组、25μg,mLpolyI:C组、50μg/mLpolyI:C组、脂多糖(LPS)组、对照组,分别加入100μL 50μg/mL MUCl、5μg/mL polyI:C、25μg/mLpoly I:C、50μg/mLpolyI:C、50μg/mLLPS和100μL溶剂,培养48h后ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)、白介素(IL)-1β、IL-6的浓度;将DCs分为PBS对照组、polyI:C组、MUC1+polyI:C组,分别加入100μL PBS、50μg,mLpolyI:C、50μG/mLMUCl+50μg/mL polyI:C,培养48h后流式细胞仪(FCM)检测细胞CD40、CD80、CD83、CD14、组织相容性基因位点抗原DR(HLA—DRl的表达;C57BL/6小鼠24只按随机数字表法分为MUCl组、MUCl+polyI:C、PBS对照组,每组8只,分别在第1、15天皮下注射1mL50汕卧nLMUCl抗原、50μg/mL CMUCl抗原+50μg/mLpolyI:C和PBS。注射后7d取各组小鼠脾细胞(CTL)加入到体外培养的小鼠垂体瘤细胞AtT20中,D-乳酸脱氢酶fD.LDH)释放试剂盒检测各组CTL的杀伤活性。结果侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中MUCl表达阳性率分别为90.4%(38/421、20.5%(9/44),MUCl蛋白在侵袭性垂体腺瘤中表达(2.0353±0.0359)高于非侵袭性垂体腺瘤(0.3488±0.0205),差异有统计学意义(B,0.05);ELISA检测显示MUCl组、5μg/mLpolyI:C组、25μg/mL polyI:C组、50μg/mLpolyI:C组DCs上清液中3种细胞因子的浓度均依次增加,差异有统计学意义� 展开更多
关键词 侵袭性垂体腺瘤 MUC1蛋白 polyI:C 树突状细胞
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联合输注Flt3-L和GM-CSF表达质粒体内诱导小鼠DC的研究 被引量:3
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作者 苏舒 薛萌 +1 位作者 曹萌 王立新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期515-517,521,共4页
目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表... 目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表面标志以鉴定DC的比例及亚型;将体内诱导DC与HBsAg共孵育,然后刺激HBsAg预免疫小鼠的脾细胞并检测其分泌IFN-的水平。结果:联合输注Flt3-L和GM-CSF质粒小鼠的脾细胞达到4×108个细胞/脾脏、其中CD11c+细胞占20%以上,CD11c+细胞中CD11b+、CD11b-、B220+、CD8+、NK1.1+细胞的比例分别达17%、10%、26%、16%、7%左右;体内诱导DC负载HB-sAg后刺激HBsAg特异性淋巴细胞分泌IFN-γ的水平明显高于HBsAg单独刺激组。结论:采用小鼠尾静脉注射技术输注Flt3-L及GM-CSF质粒能够诱导CD11c+ DC的产生并包含多种亚型,体内诱导DC具备有效的抗原提呈功能。 展开更多
关键词 Flt3-L GM-CSF 真核表达质粒 树突状细胞 体内诱导 小鼠
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恶性胶质瘤相关抗原表位肽激活的树突状细胞致敏的细胞毒性T淋巴细胞靶向治疗恶性胶质瘤的实验研究 被引量:3
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作者 张芸 纪惜銮 +5 位作者 罗朝霞 杨顺 谢亮 邹文文 刘兵峰 姜舒 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期448-451,455,共5页
目的研究多种恶性胶质瘤相关抗原表位肽激活的树突状细胞(GDC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(GDC-CTL)对人脑胶质瘤细胞系U87的体外细胞毒活性,以及其对BALB/c nude裸小鼠神经胶质瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法制备多种恶性胶质瘤相关抗原致... 目的研究多种恶性胶质瘤相关抗原表位肽激活的树突状细胞(GDC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(GDC-CTL)对人脑胶质瘤细胞系U87的体外细胞毒活性,以及其对BALB/c nude裸小鼠神经胶质瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法制备多种恶性胶质瘤相关抗原致敏的GDC和GDC-CTL细胞,用流式细胞仪对细胞表型进行分析。设立不同的效靶比(5∶1,10∶1,20∶1),用CCK8法测定GDC-CTL细胞体外对U87细胞的杀伤率,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测GDC-CTL与U87细胞共培养48 h后培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)水平,设立未经GDC激活的T淋巴细胞为对照组。用BALB/c Nude裸小鼠U87细胞皮下肿瘤模型观察GDC-CTL细胞体内抑瘤作用,实验分为空白对照组、模型组、静脉治疗组和局部治疗组,空白对照组于背部皮下注射0.9%Na Cl,其他3组于背部皮下注射1×107U 87细胞,在肿瘤长径达3 mm后模型组于肿瘤局部注射0.9%Na Cl,静脉治疗组和局部治疗组分别于尾静脉和肿瘤局部注射2×107GDC-CTL,每周注射3次,共2周,注射体积均为0.2 m L。观察4组小鼠的肿瘤体积生长情况,取肿瘤组织进行病理学检测。结果 GDC高表达CD83、CD1a和HLA-DR,表明成功诱导GDC成熟。CD3+T淋巴细胞比例为93.00%,CD3+CD8+T淋巴细胞为69.00%,表明GDC-CTL成功激活。效靶比为5∶1,10∶1,20∶1时:GDC-CTL组和对照组对U87细胞的杀伤率分别为(24.35±1.12)%vs(15.21±0.91)%,(38.57±2.10)%vs(23.35±1.30)%,(59.44±3.79)%vs(35.23±2.33)%;GDC-CTL组和对照组与U87细胞共培养48 h后培养上清液中IFN-γ水平分别为(405.36±27.65)vs(371.11±23.23)pg·m L^(-1),(1509.22±97.16)vs(913.54±48.35)pg·m L^(-1),(2429.57±183.18)vs(1814.97±123.24)pg·m L^(-1),在效靶比为10∶1和20∶1时,2组间差异有统计学意义(P<0.05)。静脉治疗组和局部治疗组对BALB/c nude裸小鼠皮下神经胶质瘤的生长抑制率分别为34.83%和45.37%,与模型组的100.00%比较,差异均有统计学意义(P<0.05),与� 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 恶性胶质瘤
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小鼠树突状细胞经脂多糖诱导成熟前后超微结构的适应性变化 被引量:2
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作者 骆德平 李勇 +4 位作者 李代庆 季平 王涛 邱丽华 刘平 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期317-320,325,共5页
目的研究树突状细胞成熟前后细胞超微结构的一系列适应性变化。方法经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导小鼠骨髓单个核细胞分化为未成熟树突状细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志... 目的研究树突状细胞成熟前后细胞超微结构的一系列适应性变化。方法经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)诱导小鼠骨髓单个核细胞分化为未成熟树突状细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志。再经脂多糖(LPS)诱导48h成熟,经透射电镜观察诱导成熟前后树突状细胞超微结构并加以比较分析。结果树突状细胞经LPS刺激成熟后,其细胞表面树枝状突起明显减少,细胞内器持续增多,同时细胞核直径增大。结论树突状细胞表面突起的分布状态,可能决定了抗原呈递能力的大小,同时也是细胞功能潜力及状态的一种潜在标尺。 展开更多
关键词 树突状细胞 脂多糖 超微结构
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慢性乙型肝炎患者自体树突状细胞疫苗回输后的免疫应答 被引量:3
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作者 赵岐刚 田小侠 张书广 《中国实验诊断学》 2004年第5期517-519,共3页
目的 探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞 (DC)对慢性乙型肝炎 (CHB)免疫治疗的作用。方法 取患者外周血 2 0ml分离单个核细胞 ,加入重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rGM CSF)和白细胞介素 4 (IL 4 )进行DC体外扩增 ,于培养第 5天... 目的 探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞 (DC)对慢性乙型肝炎 (CHB)免疫治疗的作用。方法 取患者外周血 2 0ml分离单个核细胞 ,加入重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (rGM CSF)和白细胞介素 4 (IL 4 )进行DC体外扩增 ,于培养第 5天加入 5 0 μg/ml乙型肝炎疫苗 ,7天收获细胞。 34例慢性乙肝患者根据年龄和发病时间分为治疗 1、2、3组 ,皮内回输DC。对照组患者注射等量生理盐水 ,均每周 1次 ,连续 8次。于回输DC后 2周检测患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)含量。结果 培养可得到形态及功能典型的DC ,治疗 1、2、3组患者回输DC后血清HBV DNA拷贝数均显著低于对照组 (P <0 0 1) ,总应答率 5 8 8% (2 0 / 34) ,对照组输注前后没有明显差异 (P >0 0 5 ) ;治疗 1组与 3组相比HBV DNA定量拷贝数降低幅度有显著性差异 (P <0 0 1) ,治疗 1组与 2组、2组与 3组相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 经乙型肝炎疫苗致敏的DC回输患者后 ,其血清HBV DNA含量明显降低 ,且降低幅度与感染病毒时间和 /或患者年龄有一定关系。 展开更多
关键词 树突状细胞 乙型肝炎 肝炎病毒 乙型
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DC-CIK细胞与顺铂对乳腺癌细胞杀伤作用的研究 被引量:1
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作者 底玮 沈方臻 《中外医疗》 2015年第8期124-126,共3页
目的研究DC-CIK细胞和不同浓度顺铂对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法将DC细胞和CIK细胞共同培养得到的DC-CIK细胞与顺铂分别作用于MCF-7细胞,共同培养12h、24 h和48 h,MTT法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,对比DC-CIK细胞和顺铂对MC... 目的研究DC-CIK细胞和不同浓度顺铂对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用。方法将DC细胞和CIK细胞共同培养得到的DC-CIK细胞与顺铂分别作用于MCF-7细胞,共同培养12h、24 h和48 h,MTT法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,对比DC-CIK细胞和顺铂对MCF-7细胞的增殖抑制效果。结果与DC-CIK细胞共培养12 h、24 h与48 h,MCF-7细胞均出现一定的凋亡,增殖受到明显的抑制;与5×10~6个DC-CIK细胞共培养12h与40 ng/mL顺铂对其作用12 h的抑制效果相同,共培养24 h与50 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同,共培养48 h与60 ng/mL顺铂对其作用24 h的效果相同。结论 该研究为DC-CIK法治疗乳腺癌作出了实验室基础性研究,为临床DC-CIK细胞抑制乳腺癌细胞提供了理论依据。 展开更多
关键词 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 DC-CIK细胞 乳腺癌 免疫治疗
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