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Rosai-Dorfman病的临床病理、免疫表型和病原学观察 被引量：34
1
作者 于建渤 刘卫平 +7 位作者 左卓 唐源 廖殿英 纪洪 白燕琼 李世辉 鲁常青 罗红波 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期33-38,共6页
目的观察 Rosai-Dorfman 病的临床病理特征,探讨多种抗原标记的免疫表型及HHV8-DNA、HPV-DNA 和 EBER 的表达及其与病因的关系,并比较国内外 Rosai-Dorfman 病的发病特征。方法对16例 Rosai-Dorfman 病进行临床病理回顾性研究;9例行免... 目的观察 Rosai-Dorfman 病的临床病理特征,探讨多种抗原标记的免疫表型及HHV8-DNA、HPV-DNA 和 EBER 的表达及其与病因的关系,并比较国内外 Rosai-Dorfman 病的发病特征。方法对16例 Rosai-Dorfman 病进行临床病理回顾性研究;9例行免疫表型检测,包括 CD163、CD68(PG-M1)、CD21、CD1a、CD20、CD45RO、CD8、CD4、S100、M-CSF 和 HHV8;用原位杂交技术进行EBV-mRNA 和 HPV-DNA 检测。结果 (1)男女之比为4.33:1。只有淋巴结病变的占62.5%(10/16),颈淋巴结多见,50%的病例有多部位淋巴结累及;结外病变占37.5%(6/16)。结外病变者的局部复发率较高。(2)淋巴结病变以明显扩张的淋巴窦内有不等量体积大、多角形、胞质内含有淋巴细胞和浆细胞的组织细胞为特征;结外病变均有不同程度纤维组织增生和以浆细胞为主的混合炎细胞浸润,胞质内含有淋巴细胞和浆细胞的大多角形组织细胞数量多寡不一,呈簇状或散在分布,且随病程进展,纤维组织的量渐多,特征性组织细胞数量渐少。(3)病变组织中大多角形组织细胞均表达 S-100蛋白,以及 CD68PG-M1、CD163和 M-CSF,均不表达 CD1a 和 CD21;组织细胞吞人的有 T 和 B细胞,以 T 细胞为多,且 CD4和 CD8表型细胞均有。9例均为 HHV8和 EBEV 阴性。(4)国内报道共62例,其中仅淋巴结病变34例,仅结外病变18例,淋巴结和结外同时存在病变10例。比较国内外文献,国外患者年龄较国内的年轻10岁以上,且女性比例较高。结论 Rosai-Dorfman 病在国内较少。结外 Rosai-Dorfman 病的诊断有一定难度。HHV8-DNA、HPV-DNA 和 EBER 的表达与病因关联不明确。国内外患者的发病年龄和性别构成不同。 展开更多
关键词 组织细胞增多症 窦 免疫表型分型 dna探针 HPV
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聚合酶链反应-反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种 被引量：28
2
作者 李国利 庄玉辉 +4 位作者 赵铭 王国治 陈保文 沈小兵 胡忠义 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期241-243,共3页
目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法　以 16SrDNA为靶序列 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 反向斑点杂交检测 2 5种分枝杆菌、11种非分枝杆菌标准株、10株分枝杆菌临床分离株和 2 6份临床痰标本。结果　分枝... 目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法　以 16SrDNA为靶序列 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 反向斑点杂交检测 2 5种分枝杆菌、11种非分枝杆菌标准株、10株分枝杆菌临床分离株和 2 6份临床痰标本。结果　分枝杆菌、非分枝杆菌标准株经DNA扩增 ,分枝杆菌均出现 5 78bpDNA片段 ,非分枝杆菌除假白喉棒状杆菌可见同样片段外 ,其余菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出 10 0fg结核分枝杆菌DNA。探针特异性试验表明 ,17种寡核苷酸探针除pTub1、pFor1、pSme探针可见交叉杂交外 ,其余探针均是特异的。 10株结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床分离株PCR 反向斑点杂交结果与常规鉴定结果相符。 2 6份涂片阳性痰标本经该法直接鉴定为结核菌复合体。结论　 16SrDNAPCR 反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种快速、有效 ,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 聚合酶链反应 反向斑点杂交法
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液基细胞学、HPV检测及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值 被引量：22
3
作者 刚小青 张菊新 《国际妇产科学杂志》 CAS 2011年第6期588-590,604,共4页
目的:研究液基细胞学、人乳头瘤病毒(HPV)检测及人类染色体端粒酶(hTERC)基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法:选取2010年12月—2011年3月满足条件的河南省人民医院妇产科就诊者1000例,对其分别进行液基细胞学(TCT)检测、HPV-DNA检... 目的:研究液基细胞学、人乳头瘤病毒(HPV)检测及人类染色体端粒酶(hTERC)基因检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法:选取2010年12月—2011年3月满足条件的河南省人民医院妇产科就诊者1000例,对其分别进行液基细胞学(TCT)检测、HPV-DNA检测(SPR法)、hTERC基因检测[荧光原位杂交(FISH)技术],对以上3种检测任一结果阳性者行阴道镜下宫颈活检,以病理学为金标准,评价3种方法对宫颈癌筛查的敏感度、特异度、约登指数及符合率。结果:1000例患者中,平均年龄为(41±9)岁,TCT结果异常者119例,占11.9%;HPV阳性者共136例,占13.6%;hTERC基因扩增阳性共58例,占5.8%。229例行阴道镜下宫颈活检,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)共36例,其中CINⅠ13例(5.68%),CINⅡ13例(5.68%),CINⅢ8例(3.49%),宫颈鳞状细胞癌(SCC)2例(0.87%)。单独应用一种筛查方案时,TCT的敏感度最高(83.3%)。应用任两种方案联合筛查时,TCT+HPV的敏感度最高(94.4%),但特异度最低(29.6%);TCT或HPV与hTERC基因检测联合都可使敏感度和特异度同时升高。随着病理级别的升高,各筛查方案检出率逐渐升高(P<0.05)。结论:联合筛查方案优于单一筛查方案;HPV检测+hTERC基因检测联合筛查效果最佳,但成本最高。TCT+HPV检测联合筛查不失为一种经济而相对高效的筛查方案,可作为基本筛查进行。应根据经济条件及筛查成本选择适合的筛查方案。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 早期诊断 组织细胞学制备技术 染色体 端粒 末端转移酶 dna探针 HPV 原位杂交 荧光 HTERC基因
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值 被引量：18
4
作者 李爱芳 崔晓利 +3 位作者 康磊 雷静 党丽云 杨翰 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第9期998-1002,共5页
搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)探针熔解曲线法(简称"熔解曲线法")检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。... 搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)探针熔解曲线法(简称"熔解曲线法")检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验")和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67%(39/45)、99.38%(483/486)、98.31%(522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23%(54/78)、98.68%(447/453)、94.35%(501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50%(42/48)、96.89%(468/483)、96.05%(510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00%(9/18)、98.83%(507/513)、97.18%(516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB507-512、ropB521-528、ropB529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基� 展开更多
关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 微生物敏感性试验 dna探针 微阵列分析 对比研究 数据说明 统计
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鳞状上皮细胞癌抗原联合人乳头瘤病毒DNA检测对非典型鳞状上皮细胞的诊断意义 被引量：17
5
作者 杨飞翔 江俊青 +1 位作者 罗克锴 赵铮 《安徽医药》 CAS 2019年第7期1346-1350,共5页
目的探讨检测人乳头瘤病毒(HPV)、血清肿瘤标志物鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)在非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)病人分流管理中的意义。方法对病人宫颈液基细胞学(TCT)检查诊断为ASCUS,并同时进行HPV DNA、血清SCC检测和阴道镜检下定位活检的17... 目的探讨检测人乳头瘤病毒(HPV)、血清肿瘤标志物鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)在非典型鳞状上皮细胞(ASCUS)病人分流管理中的意义。方法对病人宫颈液基细胞学(TCT)检查诊断为ASCUS,并同时进行HPV DNA、血清SCC检测和阴道镜检下定位活检的175例病人,以病理学结果为确诊标准,进行回顾性分析。同时,选取同期体检健康女性50例为对照组,HPV和SCC均阴性。结果175例ASCUS病人,病理活检炎症或正常133例,宫颈上皮细胞瘤变(CIN)Ⅰ28例,CINⅡ/Ⅲ12例,宫颈鳞状细胞癌2例。HPV DNA阳性对于CINⅡ及以上的检出率为16.00%(12/75),显著高于HPV DNA阴性病例检出率2.00%(2/100),差异有统计学意义(P<0.05),且随着宫颈上皮细胞瘤变(CIN)级别的增加,HPV阳性率越高。而血清SCC含量大于>1.5 ng/m L组与血清SCC≤1.5 ng/m L组对于CINⅡ及以上的检出率分别为37.50%(6/16)、5.03%(8/159),两者差异有统计学意义(P<0.05)。HPV DNA检测对于预测CINⅡ及以上病理结果的敏感度、特异度、阴性预测值及阳性预测值分别为85.71%、60.87%、98.00%、16.00%;血清SCC检测对于预测CINⅡ及以上病理结果的敏感度、特异度、阴性预测值及阳性预测值分别为42.86%、93.79%、94.97%、37.50%;二者联合检测应用预测宫颈癌高级别病变的敏感度、特异度、阴性预测值及阳性预测值分别为92.86%、57.76%、98.94%、16.05%。结论单独HPV DNA或血清SCC检测对于ASCUS病人分流具有一定意义,两者联合检测可有效提高宫颈癌高级别病变的敏感性,减少宫颈癌高级别病变的漏诊和不必要的活检,能在早期有效分流管理ASCUS人群。 展开更多
关键词 dna探针 HPV 鳞状上皮细胞癌抗原 宫颈非典型增生 宫颈上皮内瘤样变 乳头状瘤病毒感染
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应用种特异性DNA探针原位杂交技术检测系统性曲霉感染 被引量：11
6
作者 马蕾 李若瑜 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期128-130,共3页
目的探讨应用原位杂交技术(ISH)特异性检测系统性曲霉感染临床标本的可行性。方法以对烟曲霉高度特异的碱性蛋白酶基因片段作为种特异性探针,聚合酶链反应(PCR)扩增制备,并以地高辛标记,与16例福尔马林固定、石蜡包埋疑为系统性曲霉感... 目的探讨应用原位杂交技术(ISH)特异性检测系统性曲霉感染临床标本的可行性。方法以对烟曲霉高度特异的碱性蛋白酶基因片段作为种特异性探针,聚合酶链反应(PCR)扩增制备,并以地高辛标记,与16例福尔马林固定、石蜡包埋疑为系统性曲霉感染的临床组织标本中的靶DNA杂交。结果16例可疑曲霉感染标本13例阳性,其他真菌感染组织均为阴性。结论该技术可以敏感、特异地检测出组织中曲霉的感染。由于此探针是烟曲霉特异的,并与黄曲霉有一定的同源性,推论应用该DNA探针可以筛选出临床常见的这两种曲霉的感染,适用于临床曲霉感染的检测。 展开更多
关键词 特异性dna探针 原位杂交技术 系统性曲霉感染 分子生物学 诊断
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TaqMan探针法实时荧光定量PCR快速检测沙门菌的探讨 被引量：10
7
作者 郑友限 杨育红 +1 位作者 陈培蓉 陈秀恋 《中国食品卫生杂志》 2006年第4期311-313,共3页
为建立一种快速、灵敏、特异的实时荧光定量PCR法用于沙门菌的检验,根据GenBank上登录的编号为AE016841的沙门菌序列,应用生物学软件在fimY基因的保守区设计引物和TaqMan探针,同时应用BLAST程序进行网上序列比对,并进行筛选、优化。用... 为建立一种快速、灵敏、特异的实时荧光定量PCR法用于沙门菌的检验,根据GenBank上登录的编号为AE016841的沙门菌序列,应用生物学软件在fimY基因的保守区设计引物和TaqMan探针,同时应用BLAST程序进行网上序列比对,并进行筛选、优化。用鼠伤寒标准菌和60份食品样本进行本检测方法的特异性、敏感性和重复性试验,并与常规法和科玛嘉平板分离法做比较。本方法对沙门菌的检测具高度的特异性,检测的灵敏度达102CFUml,从增菌至完成检测仅需24h左右,是一种快速检测沙门菌的敏感、特异的新方法。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 荧光 dna探针 沙门氏菌属
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兔下颌骨髁状突软骨细胞的分离、培养和鉴定 被引量：13
8
作者 姚向前 马绪臣 张震康 《北京医科大学学报》 CSCD 1996年第6期436-438,共3页
目的：获得均一性的兔髁状突软骨细胞。方法：机械分离乳兔髁状突软骨，分切为约１ｍｍ３，分别用０．２５％胰蛋白酶消化３０ｍｉｎ，０．１％胶原酶ＩＡ消化５ｈ，以ＤＭＥＭ培养基体外培养，并以原位杂交方法进行鉴定。结果：应用α... 目的：获得均一性的兔髁状突软骨细胞。方法：机械分离乳兔髁状突软骨，分切为约１ｍｍ３，分别用０．２５％胰蛋白酶消化３０ｍｉｎ，０．１％胶原酶ＩＡ消化５ｈ，以ＤＭＥＭ培养基体外培养，并以原位杂交方法进行鉴定。结果：应用α１（Ⅱ）ｃＤＮＡ胶原探针原位杂交阳性，软骨细胞体外培养生长良好。结论：应用本实验方法可获得均一性的下颌骨髁状突软骨细胞。 展开更多
关键词 细胞培养 原位杂交 软骨 下颌骨 颞下关节病变
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Fe_3O_4(核)/Au(壳)纳米颗粒探针的制备及其在检测乙型肝炎病毒DNA中的应用 被引量：7
9
作者 习东 宁琴 +3 位作者 卢强华 姚凯伦 刘祖黎 罗小平 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期339-345,共7页
目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitisBvirusdeoxynucleicacid,HBVDNA)基因探针,研究其在检测HBVDNA中的应用。方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核... 目的制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(hepatitisBvirusdeoxynucleicacid,HBVDNA)基因探针,研究其在检测HBVDNA中的应用。方法分别用枸橼酸还原金氯酸法、化学共沉淀法制备Au、Fe3O4纳米颗粒,二法结合制备Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒。通过金-硫(Au-S)共价键,将烷氢硫醇修饰的寡核苷酸结合在Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒上,制备纳米颗粒HBVDNA基因探针。用荧光标记法检测纳米颗粒探针表面寡核苷酸的覆盖率和与其互补的寡核苷酸的杂交效率。在尼龙膜上,使用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针通过斑点杂交法、Ag染色法检测HBVDNA。在纳米颗粒基因探针液相检测体系中加入HBVDNA,透射电镜下观察。结果制备的Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒粒径均匀,为(15±5)nm,水相分散良好,具有磁性。Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒基因探针表面寡核苷酸的最大覆盖率为(120±8)条,最大杂交效率为(14±2)%。斑点杂交法可检出低至1010copies/ml的合成靶DNA,可目视化检出乙肝患者血清中HBVDNA的PCR产物。在液相检测体系中加入HBVDNA,透射电镜观察到纳米颗粒组装成大的网状结构的聚集体。结论成功制备了Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBVDNA基因探针,它可直接用于HBVDNA的检测。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 dna dna探针
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口咽部人乳头状瘤病毒阳性鳞状细胞癌临床病理学观察 被引量：11
10
作者 赵艺哗 白玉萍 +5 位作者 毛美玲 张红 赵晓丽 杨冬梅 万鸿飞 刘红刚 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期127-131,共5页
目的探讨口咽部人乳头状瘤病毒阳性鳞状细胞癌(OPSCC-HPV)的临床病理学特征和人乳头状瘤病毒(HPV)原位杂交不同检测方法在病理诊断中的作用。方法收集北京同仁医院2016年1月至2018年8月临床及病理资料较齐全,符合2017年WHO头颈部肿瘤分... 目的探讨口咽部人乳头状瘤病毒阳性鳞状细胞癌(OPSCC-HPV)的临床病理学特征和人乳头状瘤病毒(HPV)原位杂交不同检测方法在病理诊断中的作用。方法收集北京同仁医院2016年1月至2018年8月临床及病理资料较齐全,符合2017年WHO头颈部肿瘤分类诊断标准的OPSCC-HPV 15例,分析其临床病理特点;免疫组织化学染色采用EnVision法,对15例肿瘤组织进行了p16、p53及Ki-67的染色;原位杂交方法检测了10例肿瘤组织HPV 6/11型及16/18型的DNA;RNAscope法检测了11例肿瘤组织的HPV16型及18型E6及E7的mRNA。结果15例OPSCC-HPV病例发病年龄为30~69岁,中位年龄47岁。男性8例,女性7例。临床上颈部肿物6例,扁桃体肿大7例,舌根肿物1例,吞咽疼痛1例,颈部肿物影像学检查多表现为囊性。镜下肿瘤组织主要表现为非角化性鳞状细胞癌,颈部肿物表现为淋巴结内转移,伴结内囊性变,淋巴结被膜呈纤维性增厚;发生于扁桃体者癌细胞呈巢状及分叶状浸润至隐窝被覆上皮下,可为多中心性,癌巢内常伴中心性粉刺样坏死,高核质比及高核分裂活性;背景为淋巴组织。15例患者组织免疫组织化学p16染色全部为强阳性,Ki-67阳性指数较高(达60%~90%),p53弱阳性/阴性。HPV16/18 DNA检测结果1例弱阳性(1/10),9例阴性(9/10),HPV6/11 DNA均为阴性(10/10)。HPV16 mRNA检测11例全部为强阳性(11/11),其中1例HPV18 mRNA阳性(1/11),10例阴性(10/11)。结论OPSCC-HPV具有独特的临床病理学特点,证实OPSCC-HPV主要与HPV16相关,偶见混合HPV18感染;原位杂交RNAscope法检测高危型HPV16 mRNA在最后诊断及病原学鉴定上具有重要意义。 展开更多
关键词 癌 鳞状细胞 人乳头瘤病毒16 dna探针 HPV
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佩-梅病一家系临床及PLP1基因突变分析 被引量：10
11
作者 王慧芳 吴晔 +6 位作者 姜玉武 王静敏 唐鸣科 张月华 秦炯 林庆 吴希如 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期912-916,共5页
目的分析1个中国佩-梅病家系的临床特征及遗传学特点,以提高对该病的认识,并为国内佩-梅病患者的确诊、遗传咨询及产前诊断打下基础。方法收集临床诊断为佩-梅病的先证者及其家系成员的临床资料及14例 DNA 样本,对临床症状体征、影像学... 目的分析1个中国佩-梅病家系的临床特征及遗传学特点,以提高对该病的认识,并为国内佩-梅病患者的确诊、遗传咨询及产前诊断打下基础。方法收集临床诊断为佩-梅病的先证者及其家系成员的临床资料及14例 DNA 样本,对临床症状体征、影像学特点进行分析,并采用多重连接依赖的探针扩增方法进行致病基因 PLP1重复突变检测,确定基因突变类型,分析基因型与表型的关系。结果先证者存在 PLP1基因重复突变,结合先证者及家系中其他男性患者临床特点可确诊为经典型佩-梅病。另检出3例家系中表型正常女性携带 PLP1基因重复突变。结论该家系由PLP1基因重复突变导致经典型佩-梅病,符合国外报道的基因型-表型关系;上述结果是为该家系提供可靠遗传咨询及产前诊断的依据;多重连接依赖的探针扩增这一新方法可用于快速、准确地检测PLP1的全基因重复。 展开更多
关键词 Pelizaeus—Merzbacher病 髓磷脂蛋白脂质蛋白质 膜蛋白质类 突变 dna探针
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基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值 被引量：10
12
作者 杨映晖 伍定辉 +2 位作者 苏伟明 董春萍 姚向阳 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第11期1191-1195,共5页
目的探讨基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值。方法收集2017年6月至2018年6月厦门大学附属第一医院肺科门诊及住院的933例疑似肺结核患者初诊时采集的同一份晨痰标本,同时进行基因芯片法、GeneXpert MTB/RIF(简称“G... 目的探讨基因芯片法在结核分枝杆菌耐药基因快速诊断中的应用价值。方法收集2017年6月至2018年6月厦门大学附属第一医院肺科门诊及住院的933例疑似肺结核患者初诊时采集的同一份晨痰标本,同时进行基因芯片法、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)和BACTEC MGIT 960液体培养及其比例法药物敏感性试验(简称“MGIT 960及其比例法药敏试验”)3种方法进行结核分枝杆菌及其耐药性检测,对检测结果进行对比分析。结果933例患者的痰标本中,基因芯片法检测出阳性484例,GeneXpert检测出阳性462例,MGIT 960培养出阳性411例。三种检测方法均为阳性的标本有395例,采用Excel表通过完全随机的方式抽取232例进行耐药性检测,以比例法药敏试验结果为参考标准,基因芯片法检测出异烟肼耐药的敏感度为86.67%(26/30),特异度为96.53%(195/202),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.798(0.682~0.914);检测出利福平耐药的敏感度为93.75%(30/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为96.55%(224/232),Kappa值为0.862(0.768~0.956);GeneXpert检测出利福平耐药的敏感度为84.38%(27/32),特异度为97.00%(194/200),一致性为95.26%(221/232),Kappa值为0.803(0.691~0.915);基因芯片法与GeneXpert对利福平耐药检测的一致性为96.12%(223/232),Kappa值为0.847(0.749~0.945)。Kappa值均大于0.75,具有良好的一致性。结论以MGIT 960及其比例法药敏试验结果为标准,基因芯片法敏感度、特异度和一致性高,与GeneXpert也具有良好的一致性,有助于结核病的早期诊断及防控。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 芯片分析技术 dna探针 微生物敏感性试验 实验室技术和方法 对比研究
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用Taq Man探针实时定量PCR法快速检测鼠疫耶尔森菌 被引量：6
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作者 张玲 翟俊辉 +3 位作者 周冬生 郭兆彪 王津 杨瑞馥 《疾病控制杂志》 2005年第2期147-149,共3页
目的　建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法　针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针,进行实时定量聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)分析,优化反应体系,检测其灵敏度、特异性... 目的　建立一种快速、准确、特异的定量检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法　针对鼠疫耶尔森菌特异的染色体标识序列设计引物和TaqMan探针,进行实时定量聚合酶链反应(polymerasechainreaction ,PCR)分析,优化反应体系,检测其灵敏度、特异性和重复性。结果　以EV76灭活培养物为对象,检测灵敏度可达每反应体系0 .0 8CfU ;30株非鼠疫菌株的检测结果表明,对照菌株均为阴性,检测特异性良好;对同一样品进行17次重复检测,其循环阈值的标准偏差为0 .35。结论　TaqMan探针法能够灵敏、特异、稳定地对鼠疫耶尔森氏菌进行定量检测,为鼠疫监控。 展开更多
关键词 dna引物 聚合酶链反应 耶尔森氏菌 鼠疫 dna探针
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婴幼儿咽喉乳头瘤组织人乳头瘤病毒感染的探讨 被引量：7
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作者 陈波蓓 包其郁 张洪勤 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 2000年第4期286-288,共3页
目的　探讨温州地区人乳头瘤病毒感染和婴幼儿咽喉乳头状瘤的关系。方法　应用聚合酶链反应和核酸斑点杂交技术检测 35例婴幼儿咽喉乳头瘤组织和 10例对照组组织 (小儿声带小结 )HPV6、11、16、18、3 3 5个型别的DNA。结果　乳头瘤组织... 目的　探讨温州地区人乳头瘤病毒感染和婴幼儿咽喉乳头状瘤的关系。方法　应用聚合酶链反应和核酸斑点杂交技术检测 35例婴幼儿咽喉乳头瘤组织和 10例对照组组织 (小儿声带小结 )HPV6、11、16、18、3 3 5个型别的DNA。结果　乳头瘤组织HPV感染率为 91 4% (30 / 35 ) ,其中HPV6型检出率为 5 4 2 % (19/ 35 ) ,HPV11型感染率为 2 5 7% (9/ 35 ) ,多重型别HPV6+ 11感染率为 11 4% (4/ 35 ) ;HPV16、18、3 3 型 ,均为阴性。对照组各型检测结果均为阴性 ,两者对比差异有高度显著性 (P <0 0 0 1)。结论　温州地区婴幼儿咽喉乳头瘤的发生与HPV感染密切相关 ,尤以HPV6感染为主。PCR结合核酸斑点杂交技术检测HPV具有敏感性高、特异性强的优点 ,值得推广。 展开更多
关键词 dna探针 PCR 斑点杂交 婴幼儿 咽喉乳头状瘤
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副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：7
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作者 孙宏迪 杜昕颖 +6 位作者 汪舟佳 王玉飞 宋宏彬 孙岩松 黄留玉 杨振洲 陈泽良 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期969-972,共4页
目的建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒... 目的建立一种快速检测副溶血弧菌的实时荧光定量PCR方法。方法根据副溶血弧菌tdh基因设计合成引物及TaqMan探针,利用阳性质粒和模拟标本建立副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。结果以副溶血弧菌DNA为模板克隆了tdh基因,得到阳性质粒。利用阳性质粒建立了定量PCR方法 ,得到标准曲线y=-4.9197x+58.72,决定系数(R2)为0.9864。此方法具有很好的特异性,在对15种肠道致病菌的检测中,只有副溶血弧菌基因组DNA的扩增结果为阳性。对粪便和食物模拟标本进行检测,敏感性均为102cfu/μl。此方法重复性较好,对4种浓度(105、104、103、102cfu/μl)的菌液各进行3次检测,结果均为阳性,且Ct值的变异系数<2%。结论建立了一种检测副溶血弧菌的荧光定量PCR方法 ,该法的敏感性和特异均较好,适用于快速、准确地检测食品和粪便中的沙门菌。 展开更多
关键词 弧菌 副溶血性 基因 tdh 实时定量聚合酶链反应 dna探针
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分子病理学诊断颈部淋巴结结核及其耐药性的应用价值 被引量：7
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作者 穆晶 刘子臣 +3 位作者 宋婧 李琨 车南颖 刘红刚 《中国防痨杂志》 CAS 2018年第11期1170-1175,共6页
目的 评价分子病理学方法诊断颈部淋巴结结核及其耐药性的临床应用价值。方法 搜集2010年3月至2013年10月首都医科大学附属北京胸科医院病理科收治的符合纳入标准（临床症状和体征均符合颈部淋巴结结核、抗结核药物治疗均有效）的全部9... 目的 评价分子病理学方法诊断颈部淋巴结结核及其耐药性的临床应用价值。方法 搜集2010年3月至2013年10月首都医科大学附属北京胸科医院病理科收治的符合纳入标准（临床症状和体征均符合颈部淋巴结结核、抗结核药物治疗均有效）的全部97例颈部淋巴结结核患者（结核组）;以及符合纳入标准（通过病理学或临床检测结果明确诊断为其他淋巴结疾病）的全部20例其他淋巴结病变患者（非结核组）的石蜡包埋标本。所有标本以萋-尼（Z-N）抗酸染色法查找抗酸杆菌,荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测结核分枝杆菌特异基因序列IS6110;以临床最后诊断为标准,比较两种方法的检测效能;并对FQ-PCR检查结果为阳性且结核分枝杆菌DNA含量满足耐药突变检测下限的标本,以探针熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药相关基因突变情况。结果 以临床最后诊断为标准,抗酸染色和FQ-PCR检测结核组的敏感度分别为22.7%（22/97）和67.0%（65/97）;FQ-PCR技术检测敏感度明显高于抗酸染色法,差异有统计学意义（χ2=38.53,P〈0.001）。抗酸染色和FQ-PCR检测非结核组标本均为阴性,特异度均为100.0%（20/20）。抗酸染色和FQ-PCR的阳性预测值分别为100.0%（22/22）和100.0%（65/65）,阴性预测值分别为21.1%（20/95）和38.5%（20/52）,符合率分别为35.9%（42/117）和72.6%（85/117）。对41例FQ-PCR检查结果为阳性且结核分枝杆菌DNA含量满足耐药突变检测下限的患者标本进行结核分枝杆菌耐药基因突变检测,利福平和异烟肼可评估标本分别为10份（例）和27份（例）,其中利福平耐药1份（例）,异烟肼耐药13份（例）。 结论 分子病理学诊断技术在颈部淋巴结结核石蜡包埋标本中检测结核分枝杆菌DNA的敏感度和特异度较高,并且能筛查可能的耐药患者,可为颈部淋巴结结核的正确诊断与合理化治疗提供依据。 展开更多
关键词 结核 淋巴结 颈 核酸扩增技术 dna探针 诊断 结核 抗多种药物性
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宫颈癌和食管癌组织中人乳头状瘤病毒基因型的检测 被引量：7
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作者 崔金环 杨光 +4 位作者 苏锡康 宋长山 曾劲伟 李晓杰 徐志祥 《肿瘤学杂志》 CAS 2009年第3期182-184,共3页
[目的]探讨宫颈癌及食管癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)感染及其基因型分布的相关性。[方法]采用基因芯片方法分别检测200例宫颈癌和140例食管癌的HPV基因型,计算HPV感染率,分析HPV基因型与癌肿类型的关系。[结果]200例宫颈癌的HPV阳性率... [目的]探讨宫颈癌及食管癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)感染及其基因型分布的相关性。[方法]采用基因芯片方法分别检测200例宫颈癌和140例食管癌的HPV基因型,计算HPV感染率,分析HPV基因型与癌肿类型的关系。[结果]200例宫颈癌的HPV阳性率为94.00%(188/200),共检测到9种HPV基因型,其中主要基因型为HPV16(74.00%)和HPV18(16.00%),HPV双重感染的阳性率达12.00%(24/200)。169例宫颈鳞癌的HPV阳性率为95.86%,显著高于腺癌的80.00%(χ2=9.73,P<0.01),但HPV16、18和HPV双重感染在鳞、腺癌中的阳性率无显著性差异。在140例食管癌组织中,未检测到任何基因型别的HPV。[结论]宫颈癌组织的HPV感染型别多样,HPV16、18为最常见类型,HPV感染更常见于宫颈鳞癌。但HPV各型别的分布与癌肿类型无关,HPV似乎与食管癌的发生无关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 食管肿瘤 乳头状瘤病毒 人 dna针 HPV
原文传递
荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药情况的研究 被引量：7
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作者 苏碧仪 周德旺 +2 位作者 马品云 关平 谭耀驹 《结核与肺部疾病杂志》 2020年第4期245-248,共4页
目的评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)探针熔解曲线法(简称"熔解曲线法")检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药的情况。方法对832例涂阳肺结核患者的痰标本进行BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960&quo... 目的评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)探针熔解曲线法(简称"熔解曲线法")检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药的情况。方法对832例涂阳肺结核患者的痰标本进行BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")液体培养,结果显示污染35例,培养阴性52例,培养阳性745例,对培养阳性的745份培养物进行菌种鉴定(基因芯片法),其中混合感染7例,非结核分枝杆菌60例,结核分枝杆菌复合群678例;对鉴定为结核分枝杆菌复合群的678例患者标本采用MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称"MGIT 960药敏试验")和熔解曲线法进行利福平和异烟肼耐药基因检测。熔解曲线法检测对利福平是否耐药的结果无效(无法判断是否耐药)31例,检测对异烟肼是否耐药的结果无效34例,剩余639例利福平和异烟肼同时检测结果有效。以MGIT 960液体药敏试验为参考标准,分析熔解曲线法检测耐药基因的效果。结果以MGIT 960液体药敏试验结果为参考标准,639例患者的样本进行利福平和异烟肼熔解曲线法耐药性检测,对利福平耐药性检测的符合率为96.2%(615/639),敏感度和特异度分别为93.3%(126/135)和97.0%(489/504),阳性预测值和阴性预测值分别为89.4%(126/141)和98.2%(489/498),Kappa值为0.89;对异烟肼耐药性检测的符合率为93.6%(598/639),敏感度和特异度分别为83.1%(157/189)和98.0%(441/450),阳性预测值和阴性预测值分别为94.6%(157/166)和93.2%(441/473),Kappa值为0.84。结论熔解曲线法对利福平和异烟肼耐药性检测的敏感度高、特异度好,对于早期诊断耐药肺结核有较好的临床意义。 展开更多
关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 微生物敏感性试验 dna探针 微阵列分析 对比研究 数据说明 统计
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金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用 被引量：6
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作者 高正琴 李厚达 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2004年第5期301-303,共3页
目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡... 目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论　建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 nuc基因 特异性核酸探针 制备 检测
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不明原因智力障碍/脑发育迟缓患儿染色体亚端粒重组突变的检测 被引量：6
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作者 吴晔 姜玉武 +6 位作者 王小竹 王慧芳 王静敏 杨艳玲 秦炯 钟南 吴希如 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期906-911,共6页
目的联合应用多重连接依赖的探针扩增法和荧光原位杂交法检测染色体亚端粒重组,进行不明原因智力障碍/脑发育迟缓(mental retardation/developmental delay,MR/DD)的病因学研究。方法入选病例必须满足:①中～重度 MR/DD;②无明确围产期... 目的联合应用多重连接依赖的探针扩增法和荧光原位杂交法检测染色体亚端粒重组,进行不明原因智力障碍/脑发育迟缓(mental retardation/developmental delay,MR/DD)的病因学研究。方法入选病例必须满足:①中～重度 MR/DD;②无明确围产期异常病史;③无明确生后中毒、缺氧、中枢神经系统感染及头颅外伤等病史;④常规核型分析显示正常;⑤头颅影像及尿有机酸、氨基酸分析未提示典型遗传代谢性疾病或神经变性病;⑥男性患儿 FMR1基因检测未提示脆性 X 综合征。并至少符合以下条件之一:①MR 家族史阳性;②反复流产或围产期死亡家族史阳性;③体格发育异常;④面部畸形;⑤非面部畸形或发育异常。联合应用多重连接依赖的探针扩增法过筛和荧光原位杂交技术验证对患儿及父母标本进行染色体亚端粒重组检测。结果入组39例中发现4例阳性病例,重组分别为:①新发 der(2)t(2;4)(pter;pter),文献未见报道;②新发8pter 缺失,国外曾有报道,但临床表型不同;③新发15q11.2缺失,属中间重组,结合患儿临床表型,Angelman 综合征可能性大;④新发11qter 缺失,文献未见报道。结论首次报道2种新重组,其新发出现提示致病性可能性大;染色体亚端粒重组是遗传性 MR/DD 的重要病因,临床表型差异大,对原因不明的常规染色体检查无异常的 MR/DD 患者均应进行检测,联合应用多重连接依赖的探针扩增法和荧光原位杂交法是相对经济的确诊手段。 展开更多
关键词 精神发育迟滞 染色体结构 端粒 重组 遗传 dna探针 原位杂交 荧光
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