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CEA启动子启动双自杀基因与单自杀基因对Lovo细胞杀伤作用的比较 被引量:5
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作者 王天宝 汪建平 +2 位作者 董文广 钟女奇 周军 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期308-311,共4页
【目的】探讨CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)与胸苷激酶(thymidinekinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因。【方法】以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的L... 【目的】探讨CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosinedeaminase,CD)与胸苷激酶(thymidinekinase,TK)组织特异性对Lovo结肠癌细胞杀伤作用是否优于单一自杀基因。【方法】以带有Cp、CD与TK的重组腺病毒转染的Lovo细胞作为实验组,未转染者为对照组,5鄄氟胞嘧啶(5鄄fluorocytosine,5鄄Fc)组系列质量浓度:10、8、6、4、2、0滋g/mL;更昔洛韦(ganciclovir,GCV)组系列质量浓度:5、4、3、2、1、0滋g/mL;两药联合应用的系列质量浓度:(10+5)、(8+4)、(6+3)、(4+2)、(2+1)、0滋g/mL。光镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定细胞生长抑制率(growthinhibitionrate,GIR)及半数抑制浓度(IC50)。病毒转染的Lovo细胞与未转染的Lovo细胞按不同比例混合培养,给予5鄄Fc5滋g/mL或/和GCV10滋g/mL,噻唑蓝法测定细胞GIR。【结果】对照组5鄄Fc与GCV对细胞的生长抑制作用极低,5鄄Fc组IC50为2400滋g/mL,GCV组为3500滋g/mL。实验组随5鄄Fc与GCV剂量增加,对细胞的杀伤作用明显增加,5鄄Fc组IC50为5.75滋g/mL,GCV组为3.50滋g/mL,两者同时应用相当于5鄄Fc1.90滋g/mL+GCV0.95滋g/mL,细胞对5鄄Fc的敏感性提高417.4倍,对GCV的敏感性提高1000倍。病毒杀伤Lovo细胞具有明显的“旁观者”效应,联合应药组的“旁观者”效应明显高于单独应用组。【结论】双自杀基因细胞毒效应以及“旁观者”效应均高于单一自杀基因。 展开更多
关键词 结肠癌 癌胚抗原基因启动子 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶
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CEA启动子驱动下表达Hsp70基因的重组腺病毒的构建及鉴定 被引量:3
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作者 孙运良 徐灿 +4 位作者 苏长青 高军 金晶 吴红玉 李兆申 《中华胰腺病杂志》 CAS 2011年第4期251-254,共4页
目的构建癌胚抗原(CEA)启动子驱动下靶向表达热休克蛋白70(HspTO)基因的重组腺病毒。方法通过RT-PCR和PCR的方法分别扩增人Hsp70基因和CEA启动子,构建穿梭质粒pDC316-pCEA—Hsp70。将所得的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞... 目的构建癌胚抗原(CEA)启动子驱动下靶向表达热休克蛋白70(HspTO)基因的重组腺病毒。方法通过RT-PCR和PCR的方法分别扩增人Hsp70基因和CEA启动子,构建穿梭质粒pDC316-pCEA—Hsp70。将所得的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞获得重组腺病毒Ad5-pCEA—Hsp70。通过梯度离心纯化病毒,采用半数细胞培养物感染量测定病毒滴度。分别以重组的腺病毒感染CEA阳性的人胰腺癌BxPC3细胞和CEA阴性的SWl990细胞,通过RT-PCR和ELISA法检测Hsp70 mRNA和蛋白的表达。结果酶切和测序证实Hsp70基因和CEA启动子成功插入PDC316质粒。与骨架质粒共转染293细胞获得的病毒经PCR扩增证实重组腺病毒构建成功。最终获得的病毒颗粒数达2.2×10^11vp/ml,滴度为1.5X10^10PFU/ml。重组腺病毒感染CEA阳性表达的BxPC3细胞后,可显著增加Hsp70 mRNA和蛋白的表达,而感染CEA阴性的SWl990细胞,Hsp70mRNA和蛋白的表达无变化。结论成功构建了能够在CEA阳性细胞中靶向表达Hsp70基因的重组腺病毒Ad5-pCEAHsp70,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组 遗传 热休克蛋白质70 cea启动子 腺病毒
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靶向重组腺病毒介导Hsp70基因表达对大鼠胰腺癌移植瘤的抑制作用 被引量:2
3
作者 孙运良 徐灿 +4 位作者 苏长青 马建霞 高军 满晓华 李兆申 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2012年第1期15-21,共7页
目的:观察重组腺病毒Ad5-pCEA-Hsp70介导的Hsp70基因表达对大鼠胰腺癌移植瘤生长的影响,并分析其相关机制.方法:建立大鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,随机分为3组,分别给予Ad5-pCEA-Hsp70、Ad5-control以及PBS进行治疗.对比不同时间点3组肿瘤... 目的:观察重组腺病毒Ad5-pCEA-Hsp70介导的Hsp70基因表达对大鼠胰腺癌移植瘤生长的影响,并分析其相关机制.方法:建立大鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,随机分为3组,分别给予Ad5-pCEA-Hsp70、Ad5-control以及PBS进行治疗.对比不同时间点3组肿瘤大小,评价抑瘤效果:通过ELISA的方法检测外周血Hsp70蛋白含量及细胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6的含量;取动物的移植瘤常规HE染色,观察淋巴细胞浸润情况;分离动物脾脏单核细胞,通过流式细胞仪检测CD83+细胞比例,并观察脾淋巴细胞对体外培养的大鼠胰腺癌细胞的杀伤能力.结果:治疗后第4、6、8周,Ad5-pCEA-Hsp70组肿瘤体积分别与Ad5-control组及PBS组相比(724.4mm3±81.6mm3vs901.3mm3±103.9mm3、987.5mm3±126.0mm3;681.3mm3±64.9mm3vs1270.6mm3±131.6mm3、1398.5mm3±193.0mm3;648.0mm3±65.9mm3vs1487.0mm3±243.0mm3、1660.0mm3±167.0mm3),差异均具有统计学意义(均P<0.01).Ad5-pCEA-Hsp70组动物外周血Hsp70蛋白及细胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6的含量均显著高于Ad5-control组和PBS组(均P<0.01).HE染色发现,与Ad5-control组和PBS组相比,Ad5-pCEA-Hsp70组有较多的淋巴细胞浸润.经流式细胞仪检测,Ad5-pCEA-Hsp70组脾单核细胞中CD83+细胞比例显著高于Ad5-control组及PBS组(10.8±1.3%vs5.1±0.6%、4.8±0.6%;均P<0.01).脾淋巴细胞介导的CTL实验中,当效靶细胞比为1:1时,3组动物之间并无统计学差异(P>0.05),但随着效靶细胞比的增加,Ad5-pCEA-Hsp70组对胰腺癌细胞的杀伤能力较Ad5-control组和PBS组明显增加(P<0.05,P<0.01).结论:重组腺病毒Ad5-pCEA-Hsp70介导的Hsp70基因表达对大鼠胰腺癌动物模型的肿瘤生长具有抑制作用,其机制与促进树突状细胞(dendritic cells,DC)的成熟、诱导细胞因子INF-γ、TNF-α、IL-6的分泌、促进淋巴细胞浸润有关. 展开更多
关键词 热休克蛋白70 cea启动子 重组腺病毒 胰腺癌
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腺病毒载体介导CEA基因元件调控自杀基因治疗 被引量:2
4
作者 许德华 戈凯 +2 位作者 蒋琼 郑仲承 刘新垣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期444-448,共5页
构建以CEA启动子控制HSVTK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×1012pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感,而感染了... 构建以CEA启动子控制HSVTK基因表达的复制缺陷型腺病毒载体(AdCEATK).纯化的重组腺病毒滴度达1×1012pfu/ml.CEA阴性的HeLa细胞感染AdCMVTK后对丙氧鸟苷(GCV)很敏感,而感染了AdCEATK后不被GCV杀伤.与此相反CEA阳性的LoVo细胞中AdCMVTK和AdCEATK都有很好的表达活性,说明CEA启动子有良好的细胞专一性.AdCEATK/GCV系统还有明显的旁杀伤效应.此载体将有助于实现对CEA阳性肿瘤的专一性自杀基因治疗. 展开更多
关键词 腺病毒载体 cea基因 (HSV-TK)基因 基因治疗
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新型结肠癌个性化治疗重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13的构建 被引量:1
5
作者 岳学田 张立堂 +4 位作者 王毅刚 武玉梅 李娜 仰毅 章康健 《浙江理工大学学报(自然科学版)》 2009年第4期567-570,共4页
一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建。该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性。实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55... 一种新型的重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13被成功构建。该病毒利用CEA(carcinoembryonic antigen)启动子和ST13基因特异性增强ZD55系统的肿瘤靶向性。实验表明,重组溶瘤腺病毒Ad-CEA-ZD55-ST13能在结肠癌细胞株SW620中增殖;Ad-CEA-ZD55-ST13增加ST13基因在HCT116细胞中的表达量;Ad-CEA-ZD55-ST13比对照病毒Ad-CEA-ZD55-EGFP对HCT116的杀伤作用强。 展开更多
关键词 结肠癌 cea启动子 ST13 靶向基因-病毒疗法
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CEA启动子特异性启动双自杀基因CD与TK在CEA^+恶性肿瘤中表达 被引量:2
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作者 王天宝 董文广 汪建平 《中华普通外科学文献(电子版)》 2008年第1期21-22,53,共3页
目的探讨CEA启动子(CEA promoter,Cp)在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase,TK)的作用。方法培养Lovo与Hela细胞,传代冻存。10μl带有Cp.CD.TK重组腺病毒(recombi-nant adeno... 目的探讨CEA启动子(CEA promoter,Cp)在肿瘤细胞特异性启动双自杀基因胞嘧啶脱氨酶(cytosine deaminase,CD)与胸苷激酶(thymidine kinase,TK)的作用。方法培养Lovo与Hela细胞,传代冻存。10μl带有Cp.CD.TK重组腺病毒(recombi-nant adenovirus with Cp.CD.TK,RA-Cp.CD.TK)病毒液转染Lovo与Hela,荧光显微镜观察,收集细胞提取总RNA,PCR扩增Cp、CD与TK,电泳鉴定。病毒转染Lovo与Hela传代接种96孔培养板,每株细胞分两组,每组24孔:第一组给予5-氟胞嘧啶(5-fluorocy-tosine,5-Fc)10mg/L培养液,第二组给予更昔洛韦(ganciclovir,GCV)5mg/L培养液,光镜观察细胞形态,台盼蓝染色检测细胞活力。结果转染病毒的Lovo细胞及Hela细胞均可见绿色荧光,PCR均可扩增出Cp、CD和TK。5-Fc和GCV对Lovo细胞具有很强的杀伤作用,对Hela细胞则微弱,5-Fc实验组Lovo细胞活力平均为8.54%±1.34%,Hela细胞平均为95.05%±2.18%(P<0.01)。GCV实验组Lovo细胞活力平均为8.38%±1.22%,Hela细胞平均为95.39%±1.64%(P<0.01)。结论RA-Cp.C.T靶向性杀伤CEA+的Lovo结肠癌细胞,而对CEA-的Hela子宫颈癌细胞生长无影响。 展开更多
关键词 人结肠癌 癌胚抗原基因启动子 胞嘧啶脱氨酶 胸苷激酶
原文传递
阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk对CEA阳性肺癌的杀伤作用
7
作者 李芳 伍新尧 罗超权 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期35-38,共4页
目的 增强E .colicd/HSV 1tk自杀基因的细胞毒性 ,实现阳离子脂质体介导pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系靶向杀伤CEA阳性肺癌。方法 PCR法分别扩增出CMV增强子 ,CEA启动子 ,cd tk ,构建真核表达载体 pE CEA cd tk ;MTT法检测pE CEA cd tk/... 目的 增强E .colicd/HSV 1tk自杀基因的细胞毒性 ,实现阳离子脂质体介导pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系靶向杀伤CEA阳性肺癌。方法 PCR法分别扩增出CMV增强子 ,CEA启动子 ,cd tk ,构建真核表达载体 pE CEA cd tk ;MTT法检测pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系的体外细胞毒性。体内实验采用肺腺癌细胞SPC A 1裸鼠皮下移植瘤模型。通过肿瘤局部或鼠尾静脉注射脂质体 /pE CEA cd tk复合物 ,腹腔注射GCV +5 FC前体药物进行治疗。结果 阳离子脂质体介导pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系体外可靶向杀伤CEA阳性肺癌细胞 ,这种杀伤作用存在显著的细胞差异 ;体内可抑制小鼠皮下肺肿瘤结节的生长 ,荷瘤鼠存活期延长。结论 阳离子脂质体介导 pE CEA cd tk/5 FC +GCV体系体内外对CEA阳性肺癌均具有较强的杀伤作用。 展开更多
关键词 阳性肺肿瘤 自杀基因 阳离子脂质体 cea启动子 CMV增强子
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带有CMV、CEA启动子的腺病毒载体介导TK基因在肿瘤细胞中的表达特性 被引量:3
8
作者 冯宇新 房欣 +3 位作者 史国利 董元舒 王文俊 陈德风 《基础医学与临床》 CSCD 1999年第5期32-36,共5页
TK基因一GCV系统是最有希望在临床上用于肿瘤基因治疗的方法之一。为了提高基因靶向表达的效率,使之可以应用于体内实验,我们构建重组腺病毒AdCMVTK和带有CMV、CEA两个启动子的AdCMVCEATK,在五种癌细胞中进行了体外实验。发现腺病毒... TK基因一GCV系统是最有希望在临床上用于肿瘤基因治疗的方法之一。为了提高基因靶向表达的效率,使之可以应用于体内实验,我们构建重组腺病毒AdCMVTK和带有CMV、CEA两个启动子的AdCMVCEATK,在五种癌细胞中进行了体外实验。发现腺病毒介导的TK基因赋予癌细胞GCV敏感性比对照组高2~3个数量级,并使感染病毒和未感染病毒细胞比例为110时仍产生较强的“旁观效应”。实验表明PG肺癌,CAn结肠癌,HeLa细胞是腺病毒介导的TK基因的理想靶细胞。 展开更多
关键词 肿瘤 基因治疗 P53基因 腺病毒载体 cea CMV
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CEA启动子控制HSV-TK基因表达对人结直肠癌细胞的杀伤作用 被引量:1
9
作者 戈凯 蒋琼 +2 位作者 许德华 郑仲承 刘新垣 《实验生物学报》 CSCD 1998年第3期259-264,共6页
构建了以CEA启动子控制的HSV-TK基因表达质粒pCEA-TK。转染pCEA-TK的人结肠癌细胞LoVo对GCV的敏感性提高了1300倍。同样条件下,人宫颈癌细胞HeLa对GCV的敏感性仅提高8倍,且对低于血药浓度(20μmol/L)的GCV不敏感。以上结果显示在GCV存在... 构建了以CEA启动子控制的HSV-TK基因表达质粒pCEA-TK。转染pCEA-TK的人结肠癌细胞LoVo对GCV的敏感性提高了1300倍。同样条件下,人宫颈癌细胞HeLa对GCV的敏感性仅提高8倍,且对低于血药浓度(20μmol/L)的GCV不敏感。以上结果显示在GCV存在时,CEA启动子控制下HSV-TK基因的表达使CEA阳性的人结直肠癌细胞获得专一性杀伤。此外,DNA片段分析和电镜观察表明GCV诱导转染pCEA-TK的LoVo细胞发生凋亡可能是这个系统杀死肿瘤细胞的机制之一。本工作还讨论了癌胚抗原(CEA)基因启动子用于人结直肠癌专一性自杀基因治疗的可能性。 展开更多
关键词 cea启动子 HSV-TK基因 结直肠癌 基因治疗
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靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK构建的初步研究 被引量:1
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作者 罗琪 熊宇 卢毅卓 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期983-987,共5页
目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,并观察其在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和对增殖的影响。方法采用PCR分别扩增出Cp、CD、TK三种目的基因并采用双酶切、连接依次将Cp... 目的构建由癌胚抗原启动子(CEA promoter,Cp)驱动的靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,并观察其在CEA阳性大肠癌细胞中专一性表达和对增殖的影响。方法采用PCR分别扩增出Cp、CD、TK三种目的基因并采用双酶切、连接依次将Cp、CD、TK基因插入pcDNA3.1(-)质粒;将靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK分别转染CEA阳性的人大肠癌SW480细胞和CEA阴性的Hela细胞,采用RT-PCR检测CD-TK基因的表达。用MTT法检测转染pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK后的SW480细胞对化疗前药5-氟胞嘧啶(5-Fc)和丙氧鸟苷(GCV)的敏感性。结果Cp基因片段、CD基因片段和TK基因均克隆正确。靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK经凝胶电泳和DNA测序证实构建正确。转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞经过RT-PCR鉴定证实有CD-TK基因的表达,CEA阴性Hela细胞则没有CD-TK基因的表达。细胞培养试验中,转染了靶向性载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK的SW480细胞对前药5-Fc和GCV敏感。结论正确构建了靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK,靶向性双自杀基因治疗载体pcDNA3.1(-)Cp-CD-TK能够使CD-TK基因在CEA阳性细胞中专一性表达,达到靶向杀伤大肠癌细胞目的。 展开更多
关键词 双自杀基因 癌胚抗原基因启动子 CD TK 大肠癌
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CMV早期转录增强子对人癌胚抗原启动子效率的作用研究 被引量:2
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作者 陈琼姜 贾振宇 +6 位作者 陈萍 魏群 张敏 陈钧强 张幸 叶景佳 曹江 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2010年第5期726-732,共7页
为了探讨人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子用于癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的靶向基因治疗的意义,我们参考有关文献利用PCR法分别克隆了369 bp的人CEA启动子和531 bp的CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pG... 为了探讨人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子用于癌胚抗原(CEA)阳性肿瘤的靶向基因治疗的意义,我们参考有关文献利用PCR法分别克隆了369 bp的人CEA启动子和531 bp的CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染CEA阳性的人肠癌细胞LoVo、HT-29、SW620、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF7和CEA阴性的肠癌细胞SW480、宫颈癌细胞HeLa、人肺成纤维细胞LL47,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中CEA重组启动子的效率。结果表明,CMV增强子能够明显增强CEA启动子在CEA阳性细胞中的效率(提高7.46至70.16倍),但是也能提高CEA启动子在CEA阴性细胞中的效率(提高24.01至76.40倍)。因此上述CMV增强子虽然可以大大提高CEA启动子的效率,但是对特异性有影响,在将其用于CEA阳性肿瘤基因治疗时还需采用其它保证特异性的手段。 展开更多
关键词 细胞特异性启动子 癌胚抗原(cea)启动子 巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子 肿瘤基因治疗
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