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Avermectin C5-O-甲基转移酶基因的克隆、序列分析及其基因置换 被引量：10
1
作者 朱浩君 郑应华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期1-5,59,共6页
C5 O 甲基转移酶基因 (aveD)位于阿维链霉菌 (Streptomycesavermitilis)染色体 3 4kbBamHI的片段上 ,通过构建avermectin基因组约 3 4kbBamHI片段的亚基因文库 ,用PCR的方法获得该基因的连锁基因C5 酮基还原酶基因 (aveF) ,并作为... C5 O 甲基转移酶基因 (aveD)位于阿维链霉菌 (Streptomycesavermitilis)染色体 3 4kbBamHI的片段上 ,通过构建avermectin基因组约 3 4kbBamHI片段的亚基因文库 ,用PCR的方法获得该基因的连锁基因C5 酮基还原酶基因 (aveF) ,并作为探针筛出aveD的克隆子。测序后和GenBank做同源比较 ,结果一致。构建基因置换穿梭载体 pHJ5 80 3 (pHZ13 5 8∷aveD&Amr) ,通过ET12 5 67::pUZ80 0 2属间接合转移导入S .avermitilis。放松培养后筛选出双交换重组菌株 ,并用PCR验证重组菌株的aveD已经破坏 ,将重组菌株摇瓶发酵液提取avermectin进行色谱质谱联机分析 ,发现重组菌株仅产生 4个组分 ,与出发菌株的 4个B组分完全一致。 展开更多
关键词 AVERMEcTIN c5-o-甲基转移酶 基因置换 接合转移
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Milbe mycin C5-O-甲基转移酶基因的克隆
2
作者 阎浩林 池田治生 +1 位作者 大村智 野野宫 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第2期1-4,共4页
目的是克隆milbemycinC5 -O -甲基转移酶基因。以阿维菌素 (avermectin)产生菌S .avermitilis中C5 -O -甲基转移酶基因aveD为探针 ,利用核酸杂交分析法将aveD的主要同源区定位在 (2 2 )g - 8-E - 10阳性克隆所整合的 0 3kbSstI-BgⅢ片... 目的是克隆milbemycinC5 -O -甲基转移酶基因。以阿维菌素 (avermectin)产生菌S .avermitilis中C5 -O -甲基转移酶基因aveD为探针 ,利用核酸杂交分析法将aveD的主要同源区定位在 (2 2 )g - 8-E - 10阳性克隆所整合的 0 3kbSstI-BgⅢ片段上。最后对aveD同源区及附近的核苷酸序列进行了测序分析和相应区域的基因缺失分析。结果表明 ,该区域存在一个与aveD同源性较强的基因milD。与aveD功能相似 ,milD参与milbemycin的生物合成 ,在milbemycin生物合成中可能催化C5位OH的甲基化反应。 展开更多
关键词 基因文库 核酸杂交 同源基因 c5-o-甲基转移基因 基因缺失 链霉菌 聚酮类化合物 阿维菌素 基因克隆
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