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猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建
被引量：
2
1
作者
常宏宇
宫锋
+5 位作者
季守平
鲍国强
李素波
章扬培
李芳
聂亚玲
《生物技术通讯》
CAS
2010年第2期217-221,共5页
目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在XbaⅠ和ClaⅠ位点插入pLoxP质...
目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在XbaⅠ和ClaⅠ位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3'端;以长约5.4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂,于NotⅠ位点插入该质粒中neo基因的5'端;2.7kb的负筛选标记tk基因位于载体中同源短臂的3'端外侧。结果与结论:酶切、PCR及测序结果表明,同源臂被正确连接至质粒pLoxP,成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL/GT。
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关键词
α
-Gal表位
猪
α
-
1
3
-半乳糖转移酶
基因打靶
异种移植
下载PDF
职称材料
题名
猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建
被引量：
2
1
作者
常宏宇
宫锋
季守平
鲍国强
李素波
章扬培
李芳
聂亚玲
机构
第二炮兵总医院儿科
军事医学科学院野战输血研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2010年第2期217-221,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划(2002CB713804)
文摘
目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在XbaⅠ和ClaⅠ位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3'端;以长约5.4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂,于NotⅠ位点插入该质粒中neo基因的5'端;2.7kb的负筛选标记tk基因位于载体中同源短臂的3'端外侧。结果与结论:酶切、PCR及测序结果表明,同源臂被正确连接至质粒pLoxP,成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL/GT。
关键词
α
-Gal表位
猪
α
-
1
3
-半乳糖转移酶
基因打靶
异种移植
Keywords
α
-Gal
epitope
porcine
α
-
1
3-
galactosyltransferase
gene
targeting
xenotransplantation
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建
常宏宇
宫锋
季守平
鲍国强
李素波
章扬培
李芳
聂亚玲
《生物技术通讯》
CAS
2010
2
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