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低、高频电针诱导原癌基因c－fos／c－jun和阿片肽基因表达及其关系的比较研究 被引量：14
1
作者 郭惠夫 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期135-138,共4页
本工作对低频（２Ｈｚ）和高频（１００Ｈｚ）电针引起大鼠中枢Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究，并用针对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ的反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对电针引起的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达进行选择性阻... 本工作对低频（２Ｈｚ）和高频（１００Ｈｚ）电针引起大鼠中枢Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究，并用针对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ的反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对电针引起的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达进行选择性阻断，然后观察阿片肽基因表达是否受到影响，以确定Ｆｏｓ／Ｊｕｎ复合物在电针引起阿片肽基因表达中的作用。主要结果如下：（１）２Ｈｚ和１００Ｈｚ电针引起脑内不同部位的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达；（２）２Ｈｚ电针使前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ表达大幅度增高，１００Ｈｚ电针也能增加ＰＰＥｍＲＮＡ的转录，但不如２Ｈｚ电针的作用显著；但１００Ｈｚ电针能使某些脑区的前强啡肽原（ＰＰＤ）基因转录加速，而２Ｈｚ电针没有这一作用；（３）用ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ反义ＯＤＮｓ特异地阻断Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达后，电针引起的ＰＰＤ转录加速被明显阻断，而ＰＰＥ表达不受影响。提示Ｆｏｓ／Ｊｕｎ是电针引起ＰＰＤ（而非ＰＰＥ）基因表达的转录因子。 展开更多
关键词 针刺镇痛 电针镇痛 原癌基因 阿片肽 基因表达
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粘着斑激酶和丝裂原活化蛋白激酶对纤粘连蛋白诱导平滑肌细胞迁移和增殖的影响 被引量：12
2
作者 尹航 汪丽蕙 +3 位作者 霍勇 彭旭 夏春芳 唐朝枢 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期622-625,共4页
目的　研究粘着斑激酶和丝裂原活化蛋白激酶在细胞外基质成分诱导血管平滑肌细胞迁移和增殖中的作用。方法　通过纤粘连蛋白 (FN)诱导培养的平滑肌细胞迁移和增殖 ,以免疫沉淀和Western印迹法检测粘着斑激酶 (FAK)和丝裂原活化蛋白激酶 ... 目的　研究粘着斑激酶和丝裂原活化蛋白激酶在细胞外基质成分诱导血管平滑肌细胞迁移和增殖中的作用。方法　通过纤粘连蛋白 (FN)诱导培养的平滑肌细胞迁移和增殖 ,以免疫沉淀和Western印迹法检测粘着斑激酶 (FAK)和丝裂原活化蛋白激酶 (p4 2 / 4 4MAPK)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸 (ODN)经脂质体转染细胞 ,观察其对FAK和p4 2 / 4 4MAPK磷酸化、细胞迁移以及增殖的影响。结果　不同浓度FN(5、10、2 0、4 0、6 0 μg/ml)在有效诱导平滑肌细胞迁移和增殖时FAK和p4 2 / 4 4MAPK也呈明显表达 ,2 0 μg/mlFN可使其磷酸化处于较高的表达量。脂质体可有效地介导ODN转染 ,转染效率为 86 7%± 4 5 %。转染后FAK以及p4 2 / 4 4MAPK磷酸化表达量明显减少 ,10、2 0、4 0和 6 0 μg/mlFN组迁移细胞数也分别显著减少 (2 3 2 6 %、2 1 6 3%、19 31%、17 88% ,P <0 0 5 ) ,5～ 6 0 μg/ml不同浓度的FN组 ,细胞增殖减少 2 7 6 7%～ 4 6 6 7% (P <0 0 5 )。 结论　活化的FAK和p4 2 / 4 4MAPK是细胞外基质诱导平滑肌细胞迁移和增殖的重要信号分子 ,二者之间存在着密切的联系 ,由其介导的信号转导促进了这一过程 。 展开更多
关键词 粘着斑激酶 丝裂原活化蛋白激酶 纤粘连蛋白 诱导 平滑肌细胞 迁移 增殖 反义寡核苷酸类
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端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对HL-60细胞生长的作用 被引量：16
3
作者 侯丽宏 孙秉中 《第四军医大学学报》 1999年第8期653-655,共3页
目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的作用、方法：采用台盼蓝排斥法进行药物敏感试验，流式细胞仪测定凋亡细胞含量结果：端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对HL-60细胞有生长抑制作用，作用具有序列特异性及剂... 目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的作用、方法：采用台盼蓝排斥法进行药物敏感试验，流式细胞仪测定凋亡细胞含量结果：端粒酶反义寡聚脱氧核着酸对HL-60细胞有生长抑制作用，作用具有序列特异性及剂量依赖性．流式细胞仪检测到凋亡峰，含量为28．8％．无关寡聚核着酸片段无此作用．结论：端粒酶对维持白血病细胞的生长可能起十分重要的作用，它有可能成为白血病治疗的新靶点． 展开更多
关键词 端粒酶 反应 寡聚脱氧核苷酸 白血病 HL-60细胞
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反义寡核苷酸抑制胆管癌细胞血管内皮生长因子基因表达的效应 被引量：9
4
作者 陈汝福 孙宏武 +1 位作者 童宜欣 邹声泉 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期14-15,共2页
目的　探讨不同修饰的反义寡核苷酸 (ODN)抑制胆管癌细胞血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因表达的效应。 方法　将 4种不同修饰的反义VEGFODN分别加入胆管癌细胞中 ,用RT PCR及免疫组织化学技术检测胆管癌... 目的　探讨不同修饰的反义寡核苷酸 (ODN)抑制胆管癌细胞血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因表达的效应。 方法　将 4种不同修饰的反义VEGFODN分别加入胆管癌细胞中 ,用RT PCR及免疫组织化学技术检测胆管癌细胞中VEGFmRNA及蛋白表达 ,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况。结果　反义VEGFODN明显抑制胆管癌细胞VEGF基因及蛋白的表达 ,其中以硫代修饰的ODN3抑制作用最强 ,在 10、2 0 μmol/LODN作用下 ,其抑制增殖效应为(0 .690± 0 .0 16) ,(0 .688±0 .0 10 )。结论　反义VEGFODN有望成为胆管癌基因治疗的较理想药物之一。 展开更多
关键词 胆管癌 反义寡核苷酸 VEGF 基因表达
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反义局部粘着斑激酶抑制肝癌侵袭生长的研究 被引量：15
5
作者 顾岩 郝清杰 +2 位作者 陈积圣 周晓东 高劲松 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期616-618,共3页
目的　观察反义局部粘着斑激酶 (FAK)脱氧寡核苷酸 (ODN)转染对Bel740 2肝癌移植瘤侵袭性生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法　以LipofectAMINE介导的反义FAKODN转染Bel 740 2肝癌细胞株后 ,于 6只裸鼠双侧颈背部、髋部共 4处皮下接种 ... 目的　观察反义局部粘着斑激酶 (FAK)脱氧寡核苷酸 (ODN)转染对Bel740 2肝癌移植瘤侵袭性生长的影响 ,并探讨其作用机制。方法　以LipofectAMINE介导的反义FAKODN转染Bel 740 2肝癌细胞株后 ,于 6只裸鼠双侧颈背部、髋部共 4处皮下接种 ,观察移植瘤生长情况 ,并行肿瘤微血管密度 (MVD)的免疫组织化学检测及MMP2与TIMP2表达的逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测。结果　反义FAKODN转染使裸鼠皮下移植瘤的生长受到显著抑制 ,抑瘤率为3 5 .7% ;MVD在反义转染组 ( 9.5 99± 1.2 84)显著低于对照组 [( 13 .915± 2 .618) ,P <0 .0 5 ] ;MMP2表达在反义转染组 ( 0 .199± 0 .0 61)显著低于对照组 ( 0 .42 1± 0 .118) ,TIMP2表达在反义转染组( 0 .461± 0 .15 3 )则显著高于对照组 [( 0 .2 98± 0 .10 4) ,P <0 .0 5 ]。结论　信号转导分子FAK表达阻断可显著抑制Bel 740 2肝癌细胞株在裸鼠体内的侵袭性生长 ,病理性肿瘤血管生成减少及MMP2、TIMP2表达改变与其抗肿瘤作用密切相关。 展开更多
关键词 反义局部粘着斑激酶 肝癌 肿瘤侵袭 肿瘤生长 脱氧寡核苷酸 裸鼠
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反基因及反义寡核苷酸抑制乙型肝炎病毒复制与表达的研究 被引量：10
6
作者 杨林 姚集鲁 +1 位作者 邓练贤 刘淑芳 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期13-16,共4页
目的　探讨反基因及反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒(HBV) 作用。方法　设计合成针对HBV 核心启动子Sp1 位点(1734 nt～1754 nt)及前CRNA、前基因组RNA5′端起始区(1814 nt～1834 nt) 的21 聚硫代修饰反基因寡核苷酸(ODNan21)及反义寡核苷酸... 目的　探讨反基因及反义寡核苷酸抗乙型肝炎病毒(HBV) 作用。方法　设计合成针对HBV 核心启动子Sp1 位点(1734 nt～1754 nt)及前CRNA、前基因组RNA5′端起始区(1814 nt～1834 nt) 的21 聚硫代修饰反基因寡核苷酸(ODNan21)及反义寡核苷酸(ODNas21) 。将各寡核苷酸与22 .1 .5 细胞温育。采用酶联免疫吸附法(ELISA) 及斑点杂交法分别检测经处理的22.1 .5 细胞培养上清HBsAg、HBeAg 及HBV DNA 水平。结果　ODNan21 、ODNas21 处理的22 .1 .5 细胞HBsAg、HBeAg 水平明显低于对照组( P< 0 .001)。浓度为10 μmol/L 时,ODNan21,ODNas21 对HBsAg、HBeAg 的抑制分别达57.% 、77 % ;61% 、79 .6 % ;两者联合给药的抑制达71 .5% 、85 % 。该抑制呈剂量依赖性并于给药后48 小时达高峰。ODNan21 、ODNas21 处理的22 .1.5 细胞HBVDNA 水平低于对照组。无关序列对照寡核苷酸对HBVDNA 及抗原合成无明显影响。在实验范围内,寡核苷酸对22 .1 .5 细胞无毒性作用。结论　ODNan21、ODNas21 在体外能有效抑制HBV 复制及抗原合成。 展开更多
关键词 病毒复制 乙型肝炎 ODNan ODNas
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Bcl-xl反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究 被引量：9
7
作者 闵玲 周克元 +1 位作者 梁统 张月飞 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-17,共4页
目的　探讨bcl xl反义寡核苷酸 (ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤生长和基因表达的抑制作用。方法　建立裸鼠人鼻咽癌模型 ,接种肿瘤细胞后 2 4h之内将bcl xlASODN、序列对照寡核苷酸 (ODN)皮下注射进行治疗 ,观察肿瘤大小变化和组织形态学... 目的　探讨bcl xl反义寡核苷酸 (ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤生长和基因表达的抑制作用。方法　建立裸鼠人鼻咽癌模型 ,接种肿瘤细胞后 2 4h之内将bcl xlASODN、序列对照寡核苷酸 (ODN)皮下注射进行治疗 ,观察肿瘤大小变化和组织形态学改变 ,并检测药物治疗后肿瘤细胞中bcl xlmRNA和蛋白表达情况。结果　Bcl xlASODN治疗组裸鼠鼻咽癌的生长受到明显抑制 ,抑瘤率为 41.7% ,其对应的bcl xlmRNA和蛋白水平明显降低 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而序列对照ODN治疗组抑瘤率仅为 19.0 % ,差异无显著性 ,对基因的表达亦无明显影响。结论　Bcl xlASODN对裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长具有一定的抑制作用 ,为鼻咽癌的治疗提供新的方法。 展开更多
关键词 Bcl—xl 反义寡核苷酸 鼻咽癌 移植瘤 抑制作用 基因治疗
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bcr/abl反义寡核苷酸净化后自体骨髓移植治疗慢性粒细胞白血病 被引量：12
8
作者 孙竞 伍柏松 +4 位作者 刘启发 冯茹 刘晓力 孟凡义 周淑芸 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第8期400-402,共3页
目的　观察bcr/abl反义寡核苷酸 (AS ODN)净化后自体骨髓移植 (ABMT)治疗慢性粒细胞白血病 (CML)的疗效。方法　 5例CML中慢性期 2例 ,加速期 1例 ,急变期 2例 ,均具b3a2型bcr/ablmRNA。骨髓采集前患者均经 2个疗程大剂量联合化疗的体... 目的　观察bcr/abl反义寡核苷酸 (AS ODN)净化后自体骨髓移植 (ABMT)治疗慢性粒细胞白血病 (CML)的疗效。方法　 5例CML中慢性期 2例 ,加速期 1例 ,急变期 2例 ,均具b3a2型bcr/ablmRNA。骨髓采集前患者均经 2个疗程大剂量联合化疗的体内净化 ,自体骨髓经CS30 0 0plus浓集后加入 18bp的硫代bcr/ablAS ODN(40～ 6 0 μg/ml,48～ 6 0h)体外净化Ph+ 细胞。预处理方案为全身照射 +环磷酰胺 (TBI+CTX)或马法兰、阿糖胞苷、CTX和环己亚硝脲 (MAC +CCNU)。结果　体内净化后骨髓Ph+ 细胞减至 34 % (2 4%～ 46 % ) ,bcr/ablmRNA(+)的CFU GM减至 45 .6 % (33%～ 5 8% )。经bcr/ablAS ODN净化后 ,2例骨髓bcr/ablmRNA(- ) ,3例bcr/ablmRNA(+) ,但bcr/ablmRNA(+)的CFU GM明显减少。 5例ABMT后造血重建有延迟现象。经 2年以上随访观察 ,3例移植后持续 9～ 12个月主要遗传学缓解 (MCR) ,且移植后慢性期明显延长 ,其中 1例急变期患者至今无须治疗 ,现已无病生存 37个月 ,bcr/ablmRNA(- )。 1例急变期患者仅获短暂MCR ,移植后 7个月急变期复发 ,1例移植后第 74天因造血重建延迟而感染、出血死亡。结论　bcr/ablAS ODN净化后ABMT可使部分患者取得相当一段时期的MCR及延长慢性期。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 乍体骨髓移植 AS-ODN
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HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用 被引量：9
9
作者 刘春玲 李晓明 +1 位作者 路秀英 张立坤 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期605-608,共4页
目的:通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法:体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6 h后4 Gyγ射线照射。低氧培养24 h后RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达,流式细胞仪检... 目的:通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法:体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6 h后4 Gyγ射线照射。低氧培养24 h后RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达,流式细胞仪检测HIF-1α蛋白水平及细胞凋亡率,MTT检测细胞存活情况。结果:低氧使人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射的敏感性下降;低氧并未影响HIF-1α mRNA的表达,HIF-1α蛋白在低氧6 h时表达已开始升高,低氧36 h时达高峰,之后表达逐渐下降;放射刺激对HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);各浓度的反义寡核苷酸转染组降低HIF-1α的转录及蛋白水平;MTT结果显示随反义核苷酸浓度增高,其增殖抑制效应越强(P<0.05),正义对照核苷酸及脂质体对照没有显著的抑制效应(P>0.05),但转染浓度在400 nmol/L以上时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用(P<0.05);放疗后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显,较对照组及单纯放射组细胞凋亡率增加(P<0.01)。结论:低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射有抵抗作用,这种抵抗作用与低氧时HIF-1α蛋白表达上调有关,而放射本身并未上调HIF-1α蛋白的表达;HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低HIF-1α蛋白表达,提高低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放疗的敏感性。 展开更多
关键词 HIF-1Α 喉肿瘤 反义寡核苷酸 放射疗法 细胞凋亡
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Bcl-2反义寡核苷酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量：7
10
作者 何冬梅 张洹 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期40-44,共5页
背景与目的:研究表明,靶向bcl-2mRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞... 背景与目的:研究表明,靶向bcl-2mRNA的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞对化疗药物、放射线的敏感性。本研究进一步探讨bcl-2ASODN对裸鼠非小细胞肺癌NCI-H460细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法:将经硫代修饰的bcl-2ASODN直接加入到培养的NCI-H460细胞内,MTT法检测细胞生长抑制率,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时取未经处理的NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分为bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15mg/kgASODN两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小和组织形态学改变。结果:bcl-2ASODN显著抑制NCI-H460细胞的生长,并呈时间依赖性,与无义寡核苷酸组相比,有显著性差异(P<0.05)。bcl-2ASODN作用后的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低。平均成瘤时间延长为12.6天(P<0.01),最大抑瘤率达87.5%(P<0.01)。在处理NCI-H460细胞裸鼠移植瘤过程中,生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大,而bcl-2ASODN组的瘤块生长缓慢,ASODN处理组与两个对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。处理后第30天剥离瘤块,ASODN处理组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异(P<0.01)。bcl-2ASODN处理组裸鼠NCI-H460细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71.0%。病理学检查可见,bcl-2ASODN处理组瘤块内有大片的变性坏死灶,结缔组织增生,炎性细胞浸润;而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论:bcl-2ASODN能降低NCI-H460细胞的成瘤能力,抑制移植瘤生长。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 bcl-2 肺肿瘤 裸鼠 皮下移植瘤 抑瘤作用
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反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的制备及载药研究 被引量：9
11
作者 刘伟 张红岭 +4 位作者 周天洋 厉留柱 严瑛 毛陆原 张振中 《中国药学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第17期1312-1315,共4页
目的制备载反义寡核苷酸(ASODNs)聚氰基丙烯酸丁酯阳离子纳米粒。方法以二乙氨乙基-葡聚糖(DEAE-Dextran)为修饰剂,采用乳化聚合法制备阳离子聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒,采用吸附法制备载ASODNs纳米粒。用原子力显微镜观察其形态,用激光粒... 目的制备载反义寡核苷酸(ASODNs)聚氰基丙烯酸丁酯阳离子纳米粒。方法以二乙氨乙基-葡聚糖(DEAE-Dextran)为修饰剂,采用乳化聚合法制备阳离子聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒,采用吸附法制备载ASODNs纳米粒。用原子力显微镜观察其形态,用激光粒度仪测定Zeta电位及粒径,高效液相法测定药物的载药量和包封率,琼脂糖电泳分析抗核酸酶的能力。结果制得的纳米粒(NP),形态规整、大小均匀,平均粒径为90.2nm,Zeta电位值为+40.1mV,载药量达到84.3μm·mg-1时,几乎所有的药物被负载,DEAE-Dextran-(NP)所吸附的ODNs有较好的对抗核酶降解的能力。结论DEAE-Dextran-NP是一种稳定、高效的反义寡核苷酸传递系统。 展开更多
关键词 聚氰基丙烯酸丁酯 纳米粒 反义寡核苷酸 传递系统
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反义FAK寡核苷酸抑制FAK-ERK1/2介导的平滑肌细胞迁移和粘附 被引量：8
12
作者 尹航 汪丽蕙 +3 位作者 霍勇 彭旭 夏春芳 唐朝枢 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期334-338,共5页
目的　研究FAK ERK1 2信号通路在平滑肌细胞迁移和粘附中的作用及FAK反义寡核苷酸对其的调控作用。方法　通过纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导平滑肌细胞迁移和粘附 ,以免疫沉淀和Westernblot方法检测粘着斑激酶 (focaladhesionkinase... 目的　研究FAK ERK1 2信号通路在平滑肌细胞迁移和粘附中的作用及FAK反义寡核苷酸对其的调控作用。方法　通过纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导平滑肌细胞迁移和粘附 ,以免疫沉淀和Westernblot方法检测粘着斑激酶 (focaladhesionkinase,FAK)和细胞外调控激酶 1 2 (extracellularregulationkinase ,ERK1 2 )及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞 ,观察转染后反义ODN对FAK和ERK磷酸化、细胞粘附和迁移的影响。结果　FN在有效诱导平滑肌细胞迁移和粘附时FAK和ERK1 2也呈明显表达 ,FN2 0 μg·mL- 1 可使磷酸化处于较高表达量。脂质体可有效地介导ODNs转染。转染后FAK及ERK1 2磷酸化表达量明显减少。结论　由活化的FAK和ERK1 2介导的信号转导促进了细胞外基质诱导的SMCs迁移和增殖 ,反义FAKODNs可有效地对此进行抑制。 展开更多
关键词 粘着斑激酶 细胞外调控激酶1/2 反义寡核苷酸 平滑肌细胞
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A型精原细胞体外分离纯化及其端粒酶活性抑制后的形态学变化 被引量：10
13
作者 叶哲伟 陈晓春 +2 位作者 鲁功成 平浩 曾汉青 《临床泌尿外科杂志》 2003年第10期617-619,共3页
目的 :探讨分离纯化、体外培养的A型精原细胞在端粒酶活性受到抑制后细胞形态学的改变。方法 :以脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0介导将硫代磷酸修饰的端粒酶mTR反义寡核苷酸 (ASODN)转染体外分离纯化的 (SD)大鼠精原细胞 ,采用生物发光技... 目的 :探讨分离纯化、体外培养的A型精原细胞在端粒酶活性受到抑制后细胞形态学的改变。方法 :以脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0介导将硫代磷酸修饰的端粒酶mTR反义寡核苷酸 (ASODN)转染体外分离纯化的 (SD)大鼠精原细胞 ,采用生物发光技术检测精原细胞中端粒酶活性的改变 ,光镜及电镜观测端粒酶活性抑制后A型精原细胞的形态学变化。结果 :mTR ASODN可明显抑制精原细胞端粒酶活性 (P <0 .0 5 )。ASODN转染 4 8～ 72h后 ,光镜下可见细胞生长缓慢 ,染色质浓缩 ,胞质出现颗粒样物质 ,72h后死细胞数较空白对照组明显增多。电镜下可见部分细胞核异染色质浓聚集、浓缩和边集 ,胞质胞核内均可见空泡 ;部分细胞核完全固缩。单纯脂质体组及正义寡核苷酸对照组形态学均无显著变化。结论 :mTR ASODN可明显抑制体外培养的A型精原细胞端粒酶活性 ,并在转染 4 8～ 展开更多
关键词 端粒酶 精原细胞 反义寡核苷酸 形态学
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bcr3/abl2和c-myb基因反义寡核苷酸联用对慢性髓细胞白血病的作用 被引量：10
14
作者 尚振川 孙秉中 +4 位作者 冯琦 王春红 谢小平 宋霆婷 朱华锋 《第四军医大学学报》 2000年第3期275-277,共3页
目的　探讨多癌基因反义寡核苷酸对慢性髓细胞白血病 (CML )的作用及其相互作用的影响 .方法　用台盼蓝拒染、集落形成、逆转录 -多聚酶链反应及流式细胞仪技术研究反义寡核苷酸对 K5 6 2细胞株和 CML 骨髓细胞的作用 .结果　 c- myb反... 目的　探讨多癌基因反义寡核苷酸对慢性髓细胞白血病 (CML )的作用及其相互作用的影响 .方法　用台盼蓝拒染、集落形成、逆转录 -多聚酶链反应及流式细胞仪技术研究反义寡核苷酸对 K5 6 2细胞株和 CML 骨髓细胞的作用 .结果　 c- myb反义寡核苷酸通过促进 CML 细胞凋亡 ,发挥对 bcr/abl反义寡核苷酸的协同作用 .结论　多癌基因反义核酸的联合应用可为 展开更多
关键词 髓细胞白血病 癌基因 反义寡核苷酸 基因治疗
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HSP70反义寡脱氧核苷酸增强宫颈癌和卵巢癌细胞的热敏感性 被引量：8
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作者 赵霞 魏于全 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期99-101,共3页
目的　观察HSP70反义寡脱氧核苷酸对宫颈癌细胞和卵巢癌细胞热敏感性的影响。方法计数集落形成率 ,了解宫颈癌细胞和卵巢癌细胞的热敏感性。用光镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术观察凋亡细胞。结果　经HSP70反义寡脱氧核苷酸预先处理的... 目的　观察HSP70反义寡脱氧核苷酸对宫颈癌细胞和卵巢癌细胞热敏感性的影响。方法计数集落形成率 ,了解宫颈癌细胞和卵巢癌细胞的热敏感性。用光镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术观察凋亡细胞。结果　经HSP70反义寡脱氧核苷酸预先处理的细胞增强了对热处理的敏感性 ,热敏感性的增加与HSP70反义寡脱氧核苷酸的处理剂量相关。用形态学、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术均证实经HSP70反义寡脱氧核苷酸及热处理的细胞发生了凋亡。凋亡的发生率与HSP70反义寡脱氧核苷酸的处理剂量相关。结论　HSP70反义寡脱氧核苷酸能增强宫颈癌细胞和卵巢癌细胞的热敏感性 ,增强这种热敏感性的可能机理是协同诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈癌 卵巢癌 HSP70 反义DNA 温热疗法
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阳离子膜融合脂质体介导反义寡核苷酸在Hela细胞中的转染实验研究 被引量：8
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作者 胡英 金一 +1 位作者 王华 李敏伟 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期892-896,共5页
目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ... 目的　研究阳离子膜融合脂质体 (CFL)介导反义寡核苷酸 (ASON)的细胞转染效率及影响因素。方法逆相蒸发法制备 3种不同阳离子含量的脂质体 (CL) ,在CL上引入仙台病毒形成CFL ,将制得的阳离子膜融合脂质体与反义寡核苷酸混合得到复合物 ,考察形态学及载药量 ,用MTT法考察该载体的细胞毒性 ,流式细胞仪测定阳性细胞百分率和平均荧光强度。结果　制得的CFL形态均匀 ,粒径为 (16 8± 6 5 )nm。载药量随着磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加。CFL细胞毒性明显低于相同电荷比的CL ,细胞转染效率是随阳离子含量、磷脂 ASON(+ - )电荷比增加而增加 ,血清和低温均对CFL的细胞转染有影响。结论　阳离子膜融合脂质体作为载体在低电荷比条件下可降低细胞毒性并可提高细胞转染效率 ,可作为该ASON的给药系统而进一步研究。 展开更多
关键词 阳离子膜融合脂质体 反义寡核苷酸 仙台病毒 转染效率 实验研究 基因治疗
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聚乙烯亚胺介导生存素反义核酸体外投递肝癌SMMC-7721细胞的条件优化 被引量：9
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作者 王芳 蒋建伟 +1 位作者 陈涛 曹明溶 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期551-556,共6页
目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethylene im ine,PEI)作为生存素(survivin)反义核酸(anti-sense oligodeoxynuc leotides,ASODN)的载体投递肝癌SMMC-7721细胞的条件。方法:凝胶阻滞实验筛选PEI与survivin ASODN形成静电复合物的最佳质量比;W ... 目的:探讨聚乙烯亚胺(polyethylene im ine,PEI)作为生存素(survivin)反义核酸(anti-sense oligodeoxynuc leotides,ASODN)的载体投递肝癌SMMC-7721细胞的条件。方法:凝胶阻滞实验筛选PEI与survivin ASODN形成静电复合物的最佳质量比;W ST-8法检测PEI对肝癌细胞的毒性;流式细胞仪及W ST-8法筛选荧光标记的PEI与ASODN在不同质量比时的瞬时转染效率及48 h转染效率;流式细胞仪及荧光显微镜分别检测荧光标记的ASODN以及PEI-ASODN复合物进入细胞的情况;W ST-8法检测血清对PEI转染效率的影响。结果:m(PEI)∶m(ASODN)为0.625∶1~2.5∶1时可以形成电中性状态的静电复合物;PEI终质量浓度≤4μg/mL对肝癌细胞的毒性较小;m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时转染效率最高;血清存在对PEI转染效率无明显影响。结论:PEI是一种低毒的ASODN投递载体,其终质量浓度≤4μg/mL可作为肝癌细胞的转染载体,血清条件下m(PEI)∶m(ASODN)为0.75∶1时,PEI携带sur... 展开更多
关键词 聚乙烯亚胺 生存素 反义核酸 肝癌
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采用反义寡核苷酸探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞损伤的影响(英文) 被引量：8
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作者 王慷慨 邓恭华 +5 位作者 涂自智 易宇欣 王浩 刘可 刘梅冬 肖献忠 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期12-16,20,共6页
目的　探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞急性损伤的保护作用。方法　用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP70的表达 ,采用HSP70反义寡核苷酸阻断HSP70的表达 ,乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力来反映H2 O2 0 .5mM所致心肌细胞... 目的　探讨HSP70对活性氧所致心肌细胞急性损伤的保护作用。方法　用热休克预处理诱导新生大鼠心肌细胞中HSP70的表达 ,采用HSP70反义寡核苷酸阻断HSP70的表达 ,乳酸脱氢酶释放率和细胞总蛋白质合成能力来反映H2 O2 0 .5mM所致心肌细胞损伤程度。结果　H2 O2 引起心肌细胞乳酸脱氢酶释放率明显升高 ,而细胞总蛋白质的合成降低。热休克预处理导致心肌细胞中HSP70表达明显增加 ,并使H2 O2 所致心肌细胞LDH释放率显著降低 ,细胞总蛋白质的合成基本恢复正常水平。HSP70反义寡核苷酸很大程度上阻断了HSP70的表达及热休克预处理的心肌细胞保护作用。结论　在热休克预处理减轻过氧化氢所致乳鼠心肌细胞急性损伤的作用中 ,HSP70发挥了最主要的作用。 展开更多
关键词 热休克蛋白70 反义寡核苷酸 心肌细胞 活性氧
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c-fos基因的反义寡聚脱氧核苷酸鞘内注入减弱福尔马林引起的大鼠伤害性行为反应及脊髓背角Fos蛋白和强啡肽 A表达的研究(英文) 被引量：8
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作者 张宇 聂红 +3 位作者 王航 张瑞新 祁金顺 乔健天 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期243-250,共8页
本研究通过鞘内注射 c-fos反义寡聚脱氧核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中 F os蛋白的表达 ,观察了 Fos蛋白合成和慢痛反应的关系 ,并分析 Fos蛋白合成和强啡肽 A(Dyn A)表达之间的关系。实验组动物 (n=5 )鞘... 本研究通过鞘内注射 c-fos反义寡聚脱氧核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中 F os蛋白的表达 ,观察了 Fos蛋白合成和慢痛反应的关系 ,并分析 Fos蛋白合成和强啡肽 A(Dyn A)表达之间的关系。实验组动物 (n=5 )鞘内预先注射 c-fos的 AS-ODN(5 0μg,5μl) ,另两个对照组 (每组 n=5 )分别注射等量生理盐水和 AS-ODN的反序核苷酸 (reverseoligodeoxynucleotides,RS-ODN,5 0μg,5μl) ;4h后 ,各组动物均在一侧后肢脚掌皮下注射 formalin(5 % ,5 0μl) ,并立即用计算动物舔拭注射侧后脚掌累计时间的方法 ,检测大鼠的伤害性行为反应 ,行为检测后 1h处死动物 ,用免疫组化方法检查脊髓背角中 Fos蛋白阳性神经元的数量和强啡肽 A(1～ 8)的表达量。结果发现 ,和两个对照组相比 ,实验组动物 Formalin诱发的伤害性行为反应的第二相明显减弱 ,同时 Form alin注射侧背角 F os蛋白样免疫阳性细胞的数量和 Dyn A含量的灰度值明显减少。本研究结果提示 ,外周伤害性刺激引起的长期持续的痛反应是以 c-fos基因表达增加及受其调控的 Dyn A表达上调为基础的 ,由此推测在脊髓背角神经元中 Fos蛋白和 Dyn 展开更多
关键词 反义寡聚脱氧核苷酸 强啡肽A 伤害性行为反应 福尔马林试验 脊髓背角 大鼠 慢性痛行为反应
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聚甲基丙烯酸酯纳米粒作为反义寡核苷酸传递系统的研究 被引量：7
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作者 王文喜 陈海靓 梁文权 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期298-301,共4页
目的　研究聚甲基丙烯酸酯阳离子纳米粒作为反义寡核苷酸传递系统的可行性。方法　以EudragitRL10 0和RS10 0为材料 ,采用溶剂 非溶剂法制备纳米粒 ,再与寡核苷酸混合即得载药纳米粒。用透射电镜观察其形态、粒径测定仪测定粒径、超滤... 目的　研究聚甲基丙烯酸酯阳离子纳米粒作为反义寡核苷酸传递系统的可行性。方法　以EudragitRL10 0和RS10 0为材料 ,采用溶剂 非溶剂法制备纳米粒 ,再与寡核苷酸混合即得载药纳米粒。用透射电镜观察其形态、粒径测定仪测定粒径、超滤法测定药物的包封率 ,通过台盼蓝拒染试验和红细胞溶血试验测定纳米粒的细胞毒性 ,用流式细胞仪测定荧光标记的寡核苷酸的入胞量。结果　纳米粒的形态规整、大小均匀 ,平均粒径为 12 7nm左右 ,几乎所有的药物被负载。使用聚甲基丙烯酸酯纳米粒作为反义寡核苷酸载体后 ,进入细胞内的药物量急剧增加 ,并有显著的剂量依赖性 ,但对细胞有轻微的毒性作用。结论　聚甲基丙烯酸酯阳离子纳米粒是一种稳定。 展开更多
关键词 聚甲基丙烯酸酯 纳米粒 反义寡核苷酸 传递系统
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