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提高农杆菌转化水稻频率的研究 被引量:132
1
作者 易自力 曹守云 +6 位作者 王力 储成才 李祥 何锶洁 唐祚舜 周朴华 田文忠 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期352-358,共7页
以16种重要的籼稻和粳稻栽培品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的有关因素。结果表明:CC培养基是绝大多数水稻愈伤组织的最适诱导与继代培养基;添加2.5~5mg / L ABA可以有效地改善水稻愈伤组织的质量;籼稻... 以16种重要的籼稻和粳稻栽培品种为材料,研究了影响农杆菌转化水稻频率的有关因素。结果表明:CC培养基是绝大多数水稻愈伤组织的最适诱导与继代培养基;添加2.5~5mg / L ABA可以有效地改善水稻愈伤组织的质量;籼稻愈伤组织所需的筛选剂浓度低于粳稻愈伤组织所需的浓度;根癌农杆菌EHA105菌株对水稻的转化效果优于LBA4404和AGL1菌株的效果;头孢霉素对农杆菌的抑制效果优于羧苄青霉素的效果;共培养后进行适当的干燥处理既可增强脱菌效果,又可提高转化频率。应用我们所优化的农杆菌转化技术体系,获得了10个品种的水稻转基因植株。 展开更多
关键词 水稻 农杆菌 转化 转化频率
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农杆菌介导的植物基因转化研究进展 被引量:64
2
作者 王景雪 孙毅 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第1期7-13,共7页
农杆菌介导的植物基因转化是当今植物基因转化的主要方法之一,因而深受关注。本文从农杆菌介导的基因转化机理,植物对农杆菌侵染的反应,转基因植物的遗传表达,以及农杆菌对单子叶植物的转化等方面论述了该领域的最新研究进展。
关键词 土壤农杆菌 基因转化 遗传表达 植物
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农杆菌转化系统研究进展 被引量:24
3
作者 徐春晖 夏光敏 贺晨霞 《生命科学》 CSCD 2002年第4期223-225,共3页
农杆菌转化系统是一种优良的转化系统。作者综述了农杆菌转化系统的原理、菌株及载体系统的发展,并概括了植物农杆菌转化的发展历程及与转化效率有关的因素,最后指出了农杆菌转化系统的优点。
关键词 农杆菌 转化 进展
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苹果基因转移技术研究初报 被引量:39
4
作者 程家胜 Dandekar +2 位作者 A.M. Uratsu S.L. 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期101-104,共4页
应用农杆菌EHA101,携带抗卡那霉素基因(氨基葡糖磷酸转移酶)和GUS基因(葡糖苷酸酶),对苹果品种‘Greensleeves’作基因导入获得成功,提出了应用农杆菌与苹果叶片外植体共培养并经卡那霉素筛选后,早期检测出已导入外源基因的愈伤组织。然... 应用农杆菌EHA101,携带抗卡那霉素基因(氨基葡糖磷酸转移酶)和GUS基因(葡糖苷酸酶),对苹果品种‘Greensleeves’作基因导入获得成功,提出了应用农杆菌与苹果叶片外植体共培养并经卡那霉素筛选后,早期检测出已导入外源基因的愈伤组织。然后,通过愈伤组织增殖和应用TD7诱导获得不定芽,从而获得转基因的苹果试管苗。这一技术将有利于提高获得转基因植株的成功率。 展开更多
关键词 苹果 农杆菌 基因转移 葡糖苷酸酶
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农杆菌介导BADH基因转化葡萄的研究 被引量:32
5
作者 孙仲序 陈受宜 +2 位作者 王建设 李桂芬 管雪强 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期89-92,共4页
以葡萄品种鲁贝的花丝为试材,在葡萄的细胞悬浮系得到胚性愈伤组织及悬浮细胞再生植株的基础上,通过农杆菌介导转化甜菜碱醛脱氢酶基因,利用共培养后GUS染色组织分析探讨了影响转化效率的各种因素,优化了转化体系。组培苗经PCR检测,证... 以葡萄品种鲁贝的花丝为试材,在葡萄的细胞悬浮系得到胚性愈伤组织及悬浮细胞再生植株的基础上,通过农杆菌介导转化甜菜碱醛脱氢酶基因,利用共培养后GUS染色组织分析探讨了影响转化效率的各种因素,优化了转化体系。组培苗经PCR检测,证明获得了转基因葡萄植株。 展开更多
关键词 葡萄 土壤杆菌 基因 PCR
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抗生素对大豆愈伤组织的诱导和生长的影响 被引量:31
6
作者 王萍 吴颖 +2 位作者 季静 王罡 杨庆凯 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期321-324,共4页
用红霉素、头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢霉素 (国产和进口 )等 5种抗生素对农杆菌LBA44 0 4进行抑菌试验 ,以头孢霉素的抑菌效果最好。头孢霉素作为抑菌剂用于大豆遗传转化试验时 ,在下胚轴浓度以 30 0mg/L ,在子叶节以 5 0 0mg/L为宜。... 用红霉素、头孢唑啉钠、头孢拉定、头孢霉素 (国产和进口 )等 5种抗生素对农杆菌LBA44 0 4进行抑菌试验 ,以头孢霉素的抑菌效果最好。头孢霉素作为抑菌剂用于大豆遗传转化试验时 ,在下胚轴浓度以 30 0mg/L ,在子叶节以 5 0 0mg/L为宜。大豆品种对卡那霉素的反应在出愈率上表现相似 ,在褐化率上表现有些不同。大豆不同外植体对卡那霉素的反应存在较大差异 ,以真叶反应最敏感 ,下胚轴反应最迟钝。在以卡那霉素作为抗性选择标记时 ,选择压力真叶和子叶节以 5 0~ 10 0mg/L为好 ,下胚轴以 10 0~ 2 0 0mg/L为宜。 展开更多
关键词 大豆 农杆菌 抗生素 愈伤组织 诱导 生长
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头孢霉素类抗生素在转基因烟草中作用的初步研究 被引量:35
7
作者 康杰芳 王喆之 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第1期60-63,共4页
研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定5种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明:5种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于烟草遗传转化试验时,头孢曲松钠... 研究了头孢曲松钠、头孢哌酮钠、头孢西林钠、头孢唑林钠、头孢拉定5种头孢霉素类抗生素对农杆菌EHA105的抑制作用和对烟草愈伤组织的诱导及丛生芽形成的影响,结果表明:5种头孢类抗生素在作为抑菌剂用于烟草遗传转化试验时,头孢曲松钠的抑菌效果最好,浓度以200mg/L为宜,同时该抗生素在低浓度下能提高愈伤组织诱导率和丛生芽诱导率,在高浓度下则抑制愈伤组织和芽的形成,有类似植物激素的活性。 展开更多
关键词 头孢霉素类抗生素 转基因烟草 作用 农杆菌 基因转化
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农杆菌介导的玉米自交系愈伤组织转化条件的优化 被引量:23
8
作者 权瑞党 尚梅 张举仁 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第3期245-250,共6页
采用农杆菌介导法 ,将外源基因导入玉米骨干自交系掖 5 15和掖 5 0 2胚性愈伤组织并再生玉米植株。在农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织过程中 ,采取真空渗入、部分酶解和超声波处理 ,可以显著提高转化率。农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织时 ,在 5... 采用农杆菌介导法 ,将外源基因导入玉米骨干自交系掖 5 15和掖 5 0 2胚性愈伤组织并再生玉米植株。在农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织过程中 ,采取真空渗入、部分酶解和超声波处理 ,可以显著提高转化率。农杆菌浸染玉米胚性愈伤组织时 ,在 5 0kPa下真空渗入 5min ,掖 5 15和掖 5 0 2胚性愈伤组织的转化率分别从 6 .3%和 4 .5 %提高到 8.7%和 7.8%。愈伤组织在农杆菌浸染前 ,以 0 .2 %离析酶酶解 10min ,掖 5 15和掖 5 0 2胚性愈伤组织的转化率分别提高到 8.3%和 8.9%。在农杆菌浸染时 ,以功率 10 0W超声波处理 90~ 12 0s,掖5 15和掖 5 0 2胚性愈伤组织的转化率最高可达 9.1%和9.4 %。 展开更多
关键词 农杆菌 玉米 愈伤组织 转化 真空渗入 酶解 超声波
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普通不结球白菜抗虫转基因植株的获得 被引量:27
9
作者 佘建明 蔡小宁 +3 位作者 朱祯 朱卫民 张初贤 袁希汉 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期79-82,共4页
以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料 ,在附加 2 mg/LCPPU、0 .1m g/L NAA和 7.5 m g/L Ag NO3的稍作修改的 MS培养基上诱导不定芽。子叶 (柄 )和子叶切段诱导不定芽频率分别为 32 .5 2 %、4.3... 以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料 ,在附加 2 mg/LCPPU、0 .1m g/L NAA和 7.5 m g/L Ag NO3的稍作修改的 MS培养基上诱导不定芽。子叶 (柄 )和子叶切段诱导不定芽频率分别为 32 .5 2 %、4.35 %和 4.79%、11.5 5 %。应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (Cp TI)和新霉素磷酸转移酶基因 (N PT )的重组质粒导入普通不结球白菜 ,获得具有卡那霉素抗性的再生植株。具有卡那霉素抗性的当代转基因植株 (T0 )及其自交后代 (T1 )植株经 PCR和 Southern blot分子检测 ,确认抗虫基因已整合到受体植株的基因组中 ,并通过有性生殖遗传给后代。体外生物学测定结果 ,显示抗虫性状在转基因植株自交后代植株中得到表达。 展开更多
关键词 普通不结球白菜 转基因植株 农杆菌 CPTI
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用in planta方法转化甘蓝型油菜 被引量:17
10
作者 徐光硕 饶勇强 +2 位作者 陈雁 张椿雨 孟金陵 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-5,共5页
用inplanta方法进行遗传转化极大地促进了模式植物拟南芥的功能基因组研究 ,但在农作物中仍少有inplanta的成功报道。我们采用inplanta方法 ,用含有质粒pSG5 2 9、pHTT6 1 3和ApSCO的农杆菌菌株转化中油 82 1、湘油 1 3、宁RS 1、S2 5 0... 用inplanta方法进行遗传转化极大地促进了模式植物拟南芥的功能基因组研究 ,但在农作物中仍少有inplanta的成功报道。我们采用inplanta方法 ,用含有质粒pSG5 2 9、pHTT6 1 3和ApSCO的农杆菌菌株转化中油 82 1、湘油 1 3、宁RS 1、S2 5 0 1 1、华双 3号等甘蓝型油菜品种。在适宜的条件下 ,将根癌农杆菌菌液浸染甘蓝型油菜花序 1 0d至 1 5d ,每天浸染 1至 2次 ,共收获约 1 0 0 0 0 0粒受处理的种子。将种子播撒在含有 2 70mg·L- 1 卡那霉素的选择培养基中选择转化植株。卡那霉素抗性植株经PCR分析检测 ,结果在 5个供试品种中均获得了转基因植株 ,平均转化效率 0 1 %左右 ,各甘蓝型油菜品种间的转化效率无明显差异。这种方法方便、快速且无须经过组织培养阶段即可获得上百株转基因植株。 展开更多
关键词 in planta法 甘蓝型油菜 转基因 农杆菌
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农杆菌敏感小麦基因型的筛选研究 被引量:24
11
作者 王艳丽 叶兴国 +2 位作者 刘艳鹏 杜丽璞 徐惠君 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期6-10,共5页
基因型是影响农杆菌转化植物的主要因素之一,筛选对农杆菌敏感的小麦基因型对于进一步提高小麦转化效率具有重要意义.利用c58C1农杆菌菌系(含GUS基因)感染不同小麦品种的幼穗和幼胚,共培养后进行X-Gluc组织化学染色检测,以筛选对农杆菌... 基因型是影响农杆菌转化植物的主要因素之一,筛选对农杆菌敏感的小麦基因型对于进一步提高小麦转化效率具有重要意义.利用c58C1农杆菌菌系(含GUS基因)感染不同小麦品种的幼穗和幼胚,共培养后进行X-Gluc组织化学染色检测,以筛选对农杆菌敏感的小麦基因型.结果表明,83个小麦基因型的幼穗经农杆菌感染后,GUS基因表达率66.7%~82.8%,CA9924、北农49、西农2611、京冬11等基因型对农杆菌感染比较敏感,多数基因型对农杆菌感染不敏感.80个小麦基因型的幼胚经农杆菌感染后,GUS基因表达率在10.0%以上的基因型仅占3.8%,没有GUS基因表达的基因型多达71.3%,绝大多数基因型对农杆菌感染不敏感;当幼胚与农杆菌的共培养在滤纸上进行时,97H2169、轮选208、兰考906、扬麦6号等基因型对农杆菌感染非常敏感,GUS基因表达率达到50.0%~93.3%,没有GUS基因表达的基因型下降到36.8%.表明不同小麦基因型以及相同基因型的不同外植体对农杆菌的敏感性存在着显著差异,兰考906、扬麦6号、西农2611、京冬11等基因型是农杆菌转化小麦较为理想的受体材料;滤纸上共培养方式更有利于农杆菌对小麦外植体的侵染,GUS基因表达率平均比固体培养基共培养方式高16.6个百分点. 展开更多
关键词 小麦 农杆菌 幼胚 幼穗 GUS基因瞬时表达
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提高农杆菌基因转化率方法的研究 被引量:15
12
作者 刘艳军 杨静慧 +2 位作者 杨恩芹 刘玉冬 柳树梧 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第2期144-146,171,共4页
通过番茄转化过程中农杆菌侵染浓度、预培养时间、乙酰丁香酮、植物激素和植物组织浸提液对农杆菌和外植体的处理,研究了提高番茄基因转化率的方法。试验结果为:用过夜培养的农杆菌和稀释10倍的农杆菌侵染外植体以及用1倍马铃薯伤流液和... 通过番茄转化过程中农杆菌侵染浓度、预培养时间、乙酰丁香酮、植物激素和植物组织浸提液对农杆菌和外植体的处理,研究了提高番茄基因转化率的方法。试验结果为:用过夜培养的农杆菌和稀释10倍的农杆菌侵染外植体以及用1倍马铃薯伤流液和1mg/L低浓度的植物生长素处理外植体和农杆菌可以明显地提高番茄的转化率;乙酰丁香酮和番茄组织浸提液对转化率无显著影响;番茄子叶不经过预培养比预培养的转化率高。 展开更多
关键词 番茄 农杆菌介导 转基因 基因转化率
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Agrobacterium _mediated Transformation of Rice with Help of Bombardment 被引量:10
13
作者 明小天 苑华毅 +1 位作者 王莉江 陈章良 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第1期72-76,共5页
Oryza sativa L. ssp. japonica cv. Zhonghua 8, which is recalcitrant to infection of Agrobacterium tumefaciens (Smith et Townsend) Conn strain EHA105 with ordinary binary vector pCambia 1301, was transformed through Ag... Oryza sativa L. ssp. japonica cv. Zhonghua 8, which is recalcitrant to infection of Agrobacterium tumefaciens (Smith et Townsend) Conn strain EHA105 with ordinary binary vector pCambia 1301, was transformed through Agrobacterium-mediated transformation with help of bombardment. The transformation efficiency can be raised greatly. Single copy of gene insertion in the genome of transgenic rice plants was proved by Southern analysis and the expression of GUS gene was observed. GUS gene and hygromycin-resistant gene show 3:1 segregation in progenies of the transgenic rice plants. 展开更多
关键词 agrobacterium BOMBARDMENT TRANSFORMATION RICE
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农杆菌介导的雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系 被引量:13
14
作者 权瑞党 尚梅 +1 位作者 王兆玉 张举仁 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第5期761-767,共7页
以农杆菌AGL0介导,将雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系齐319和掖515胚性愈伤组织细胞,从筛选后的抗性愈伤组织获得再生植株.农杆菌浓度和共培养时间均能显著影响侵染后玉米愈伤组织的抗性频率.在农杆菌浓度OD6000.2~0.3,共培养时间3... 以农杆菌AGL0介导,将雪花莲凝集素基因转入玉米骨干自交系齐319和掖515胚性愈伤组织细胞,从筛选后的抗性愈伤组织获得再生植株.农杆菌浓度和共培养时间均能显著影响侵染后玉米愈伤组织的抗性频率.在农杆菌浓度OD6000.2~0.3,共培养时间3d时,侵染后玉米愈伤组织的抗性频率最高,平均约4%.对再生植株及其子代基因组DNA的PCR及Southern杂交分析表明雪花莲凝集素基因已经整合到玉米基因组中,并遗传给后代.在蚜虫人工接种试验中,转基因植株上蚜虫的繁殖力为非转基因对照植株上的50%,这表明转基因植株抗蚜性显著增强. 展开更多
关键词 农杆菌 玉米 胚性愈伤组织 转化 雪花莲凝集素
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培育苹果转基因植株的研究 被引量:15
15
作者 刘庆忠 Hammerschlag F.A. 《落叶果树》 2000年第1期5-9,共5页
采用“皇家嘎拉”苹果( Malus domestica Borkh) 白化茎段外植体,通过根癌农杆菌( Agrobacteriu mtu mefaciens)EHA105(p35SGUSint) 介导,证明了培养基中存在生长... 采用“皇家嘎拉”苹果( Malus domestica Borkh) 白化茎段外植体,通过根癌农杆菌( Agrobacteriu mtu mefaciens)EHA105(p35SGUSint) 介导,证明了培养基中存在生长素可促进基因转化,转化效率比对照提高2倍以上。将外植体与EHA101(p35SGUS) 株系在含有生长素的培养基中共培养,获得了转基因植株。采用PCR 分析和Southern Blot 核酸杂交,确定GUS 基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了GUS 基因在植株体内的表达。 展开更多
关键词 苹果 GUS基因 农杆菌 转基因植株 抗病育种
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玉米遗传转化的研究进展 被引量:10
16
作者 谭振波 刘昕 曹鸣庆 《生物技术通报》 CAS CSCD 2000年第6期9-13,共5页
自从 198 8年首次获得玉米转基因完整植株以来 ,玉米遗传转化技术的研究取得了许多重要进展 ,抗虫、抗除草剂的转基因玉米业已率先应用于玉米的商品化生产。作者对近年来玉米遗传转化技术所取得的重要进展及其在玉米品种改良中的应用前... 自从 198 8年首次获得玉米转基因完整植株以来 ,玉米遗传转化技术的研究取得了许多重要进展 ,抗虫、抗除草剂的转基因玉米业已率先应用于玉米的商品化生产。作者对近年来玉米遗传转化技术所取得的重要进展及其在玉米品种改良中的应用前景进行了论述。 展开更多
关键词 遗传转化 基因枪 农杆菌 质体转化 玉米
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农杆菌介导高等植物基因转化的影响因素 被引量:12
17
作者 刘石泉 余沛涛 《自然杂志》 北大核心 2003年第1期16-21,共6页
简述了近年来农杆菌转化的基本原理和载体系统的进展 ,同时着重阐述了不同属性农杆菌、不同植物基因型和外植体、不同再生植株的细胞起源、不同培养方法、不同药物选择以及在叶绿体与细胞核中转化等因素影响农杆菌介导高等植物基因转化 ... 简述了近年来农杆菌转化的基本原理和载体系统的进展 ,同时着重阐述了不同属性农杆菌、不同植物基因型和外植体、不同再生植株的细胞起源、不同培养方法、不同药物选择以及在叶绿体与细胞核中转化等因素影响农杆菌介导高等植物基因转化 ,以及这个研究课题的进展现状 . 展开更多
关键词 农杆菌 高等植物 基因转化 影响因素 转基因技术 农产品
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陆地棉栽培品种新陆早1号转基因抗虫植株的获得 被引量:18
18
作者 王伟 朱祯 +5 位作者 邓朝阳 高越峰 徐鸿林 肖桂芳 郭仲琛 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第5期1-5,共5页
通过根农杆菌介导法成功地将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入新疆陆地棉栽培品种新陆早1号。棉花幼苗下胚轴经根农杆菌共培养、抗性愈伤组织筛选和胚性愈伤的诱导等阶段获得了胚状体;经ELISA检测选择Npt-Ⅱ阳... 通过根农杆菌介导法成功地将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入新疆陆地棉栽培品种新陆早1号。棉花幼苗下胚轴经根农杆菌共培养、抗性愈伤组织筛选和胚性愈伤的诱导等阶段获得了胚状体;经ELISA检测选择Npt-Ⅱ阳性的克隆进行分化培养和植株再生;经ELISA再度检测,选择Npt-Ⅱ阳性的再生植株进一步培养。当生长至5—6片真叶时,将再生植株直接移栽到温室或进行嫁接。通过PCR鉴定和PCRSouthern杂交检测证明,修饰的CpTI基因已存在于再生植株的基因组内。抗虫测试结果表明,转化棉株对棉铃虫具有较强的抗性。 展开更多
关键词 抗虫基因 基因修饰 陆地棉 根农杆菌 棉花
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农杆菌介导大豆子叶节转化系统的优化 被引量:23
19
作者 李文霞 宁海龙 +1 位作者 吕文河 李文滨 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期971-977,共7页
【目的】研究影响大豆(Glycine maxL.)子叶节外植体遗传转化的因素。【方法】以农杆菌转化系统为平台,用直接筛选法和延迟筛选法确定卡那霉素的筛选方法和浓度,以GUS基因的瞬时表达计算子叶节区GUS阳性率。【结果】延迟7d进行Km选择、... 【目的】研究影响大豆(Glycine maxL.)子叶节外植体遗传转化的因素。【方法】以农杆菌转化系统为平台,用直接筛选法和延迟筛选法确定卡那霉素的筛选方法和浓度,以GUS基因的瞬时表达计算子叶节区GUS阳性率。【结果】延迟7d进行Km选择、筛选压力为75mg·L-1时选择效果最好;菌株培养阶段和侵染浓度分别在OD600为0.6和0.5时子叶节区GUS阳性率最高;黑农35、绥农14和合丰35为易感的大豆基因型;农杆菌菌株EHA101对大豆的转化能力好于LBA4404和AGL1;共培养培养基中添加的硫醇类化合物对T-DNA的转移有极强的影响效应。【结论】本实验方法可以优化农杆菌介导的大豆子叶节转化系统。 展开更多
关键词 大豆 子叶节 农杆菌 转化系统 T-DNA
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草莓(Fragaria ananassa Duch)遗传转化研究进展 被引量:17
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作者 尹淑萍 金万梅 孟凡红 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2003年第1期172-176,共5页
从遗传转化的途径、导入的外源基因、影响转化效率的因素等方面综述了草莓遗传转化研究进展 ,并对存在的转化率低。
关键词 草莓 遗传转化 农杆菌 再生系统 外源基因 基因整合
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