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同一滴度不同方法转染AAV9-SERCA2a基因对大鼠的有效性和毒副作用评价
被引量:
2
1
作者
徐晓霞
周祁娜
+6 位作者
姜涛
王红丽
王欢
季萌
王凌鹏
张广伟
侯月梅
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2013年第3期1-6,I0001,I0002,共8页
目的研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulumCa2+ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的...
目的研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulumCa2+ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的影响。方法体外成功构建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒载体系统,90只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射(tail vein injection,TVI)组、心肌注射(intramyocardial injection,IMI)组、心包腔注射(intrapericardial injection,IPI)组,采用相应方法在体分别转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200μL。转染后30 d,荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况,Western blot检测SER-CA2a基因在大鼠各组织的相对表达量,体表12导联心电图检测心律失常发生率,HE染色观察病理学变化,心脏彩色多普勒超声评价心功能,血液生化学指标检测肝肾功能。结果三组左心室可见大量绿色荧光表达,IMI组荧光局限在注射点,三组肝肾组织均可见微弱荧光;三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾(P<0.01),TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组(P<0.01);TVI组和IPI组心电图正常,IMI组2只大鼠发生室性早搏;三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比,心功能、组织病理学、血液生化学指标差异均无显著性(P>0.05)。结论三种方法转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a基因,TVI法和IMI法在心肌的有效性优于IPI法,TVI法和IPI法对机体的毒副作用小于IMI法,综合三种方法的有效性和毒副作用评价,TVI法优于IMI法和IPI法。
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关键词
转基因
肌浆网钙ATP酶
2
a
9型腺相关病毒
有效性
毒副作用
大鼠
心肌
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职称材料
题名
同一滴度不同方法转染AAV9-SERCA2a基因对大鼠的有效性和毒副作用评价
被引量:
2
1
作者
徐晓霞
周祁娜
姜涛
王红丽
王欢
季萌
王凌鹏
张广伟
侯月梅
机构
新疆医科大学第一附属医院心律失常科
新疆医科大学第一附属医院医学研究中心
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2013年第3期1-6,I0001,I0002,共8页
基金
国家自然科学基金(编号:30960132)
文摘
目的研究同一滴度不同心脏基因转染方法转染携带肌浆网钙ATP酶2a(sarcoplasmic reticulumCa2+ATPase 2a,SERCA2a)基因的9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype 9,AAV9)即AAV9-SERCA2a对SD大鼠心肌的有效性及对机体毒副作用的影响。方法体外成功构建AAV9-SERCA2a-EGFP病毒载体系统,90只雄性SD大鼠随机分为尾静脉注射(tail vein injection,TVI)组、心肌注射(intramyocardial injection,IMI)组、心包腔注射(intrapericardial injection,IPI)组,采用相应方法在体分别转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a-EGFP、AAV9-EGFP、NS各200μL。转染后30 d,荧光显微镜下观察心肝肾组织绿色荧光表达情况,Western blot检测SER-CA2a基因在大鼠各组织的相对表达量,体表12导联心电图检测心律失常发生率,HE染色观察病理学变化,心脏彩色多普勒超声评价心功能,血液生化学指标检测肝肾功能。结果三组左心室可见大量绿色荧光表达,IMI组荧光局限在注射点,三组肝肾组织均可见微弱荧光;三组心肌SERCA2a蛋白相对表达量显著高于肝肾(P<0.01),TVI组和IMI组心肌SERCA2a蛋白相对表达量明显高于IPI组(P<0.01);TVI组和IPI组心电图正常,IMI组2只大鼠发生室性早搏;三组转染AAV9-EGFP、AAV9-SERCA2a-EGFP与转染NS相比,心功能、组织病理学、血液生化学指标差异均无显著性(P>0.05)。结论三种方法转染滴度1×1011vg/mL AAV9-SERCA2a基因,TVI法和IMI法在心肌的有效性优于IPI法,TVI法和IPI法对机体的毒副作用小于IMI法,综合三种方法的有效性和毒副作用评价,TVI法优于IMI法和IPI法。
关键词
转基因
肌浆网钙ATP酶
2
a
9型腺相关病毒
有效性
毒副作用
大鼠
心肌
Keywords
gene
delivery
^
$
arcoplasmic
reticulum
ca
^2+
atpase
(
serca
)
gene
Adeno-associated
virus
serotype
9
(AAV9)
Efficiency
Toxicity
Rat
Myo
ca
rdium
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
同一滴度不同方法转染AAV9-SERCA2a基因对大鼠的有效性和毒副作用评价
徐晓霞
周祁娜
姜涛
王红丽
王欢
季萌
王凌鹏
张广伟
侯月梅
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2013
2
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