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基于耦合发酵策略的乳酰-N-三糖Ⅱ模块化合成研究
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作者 黎玉 李忠霞 +4 位作者 邓明超 王志杰 周文 Wengang CHAI 张洪涛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期16-24,共9页
母乳寡糖在调节婴儿肠道菌群和保障婴儿健康方面都有积极的作用。乳酰-N-三糖Ⅱ(lacto-N-trioseⅡ,LNTⅡ)是母乳寡糖的核心结构单元。目前合成LNTⅡ的方法存在价格昂贵、操作繁琐等缺点。该研究以乳糖和N-乙酰氨基葡萄糖为底物用三菌株... 母乳寡糖在调节婴儿肠道菌群和保障婴儿健康方面都有积极的作用。乳酰-N-三糖Ⅱ(lacto-N-trioseⅡ,LNTⅡ)是母乳寡糖的核心结构单元。目前合成LNTⅡ的方法存在价格昂贵、操作繁琐等缺点。该研究以乳糖和N-乙酰氨基葡萄糖为底物用三菌株耦合发酵策略合成LNTⅡ。首先构建用于合成N-乙酰氨基葡萄糖-1-磷酸(N-acetylglucosamine-1-phosphate,GlcNAc-1-P)模块的Escherichia coli JM109(DE3)/pET28a-nahK工程菌,优化发酵条件后,GlcNAc-1-P最高产量为16.88 g/L,转化率为70.05%。然后构建分别包含agx1、agx2、pmglmU基因的3株工程菌,并筛选出E.coli JM109(DE3)/pET28a-agx1,其合成尿苷二磷酸乙酰氨基葡萄糖(uridine diphosphate acetylglucosamine,UDP-GlcNAc)的能力最优,在优化的生产体系中UDP-GlcNAc的最大产量为24.78 g/L。最后构建工程菌E.coli JM109(DE3)/pET28a-lgtA并与E.coli JM109(DE3)/pET28a-nahK、E.coli JM109(DE3)/pET28a-agx1耦合发酵合成LNTⅡ,通过优化三菌株耦合发酵体系,LNTⅡ产量达到3.03 g/L,比优化前提高近4倍。该文基于三菌株耦合发酵策略实现了LNTⅡ的合成,这种策略具有通用性强、简便快捷和成本低廉的优点,将为母乳寡糖的规模化生产提供一种新方法。 展开更多
关键词 LNTⅡ 耦合发酵 母乳寡糖 udp-glcnac glcnac-1-P
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Systematic analyses of glutamine and glutamate metabolisms across different cancer types 被引量:5
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作者 Yuan Tian Wei Du +4 位作者 Sha Cao Yue Wu Ning Dong Yan Wang Ying Xu 《Chinese Journal of Cancer》 SCIE CAS CSCD 2017年第12期712-725,共14页
Background: Glutamine and glutamate are known to play important roles in cancer biology. However, no detailed information is available in terms of their levels of involvement in various biological processes across dif... Background: Glutamine and glutamate are known to play important roles in cancer biology. However, no detailed information is available in terms of their levels of involvement in various biological processes across different cancer types, whereas such knowledge could be critical for understanding the distinct characteristics of different cancer types. Our computational study aimed to examine the functional roles of glutamine and glutamate across different cancer types.Methods: We conducted a comparative analysis of gene expression data of cancer tissues versus normal control tissues of 11 cancer types to understand glutamine and glutamate metabolisms in cancer. Specifically, we developed a linear regression model to assess differential contributions by glutamine and/or glutamate to each of seven biological processes in cancer versus control tissues.Results: While our computational predictions were consistent with some of the previous observations, multiple novel predictions were made:(1) glutamine is generally not involved in purine synthesis in cancer except for breast cancer, and is similarly not involved in pyridine synthesis except for kidney cancer;(2) glutamine is generally not involved in ATP production in cancer;(3) glutamine's contribution to nucleotide synthesis is minimal if any in cancer;(4) glutamine is not involved in asparagine synthesis in cancer except for bladder and lung cancers; and(5) glutamate does not contribute to serine synthesis except for bladder cancer.Conclusions: We comprehensively predicted the roles of glutamine and glutamate metabolisms in selected metabolic pathways in cancer tissues versus control tissues, which may lead to novel approaches to therapeutic development targeted at glutamine and/or glutamate metabolism. However, our predictions need further functional validation. 展开更多
关键词 GLUTAMINE METABOLISM Glutamate METABOLISM Nucleotide SYNTHESIS Lipid SYNTHESIS URIDINE diphosphate N-ACETYLGLUCOSAMINE (udp-glcnac) METABOLISM
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尿苷二磷酸糖固定化酶合成法研究 被引量:2
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作者 吕海超 贾哲康 +3 位作者 张文 蒋丽雯 晁玉文 窦文芳 《生物技术进展》 2022年第2期270-280,共11页
利用生物酶进行体外催化反应合成不同种类的尿苷二磷酸糖(uridinediphosphatesugar,UDP-糖),生物酶的重复利用率较低。为提高尿苷二磷酸糖的合成效率及增加产物种类,以镍螯合聚丙烯酸酯树脂为载体,对带有HIS标签的N-乙酰己糖胺激酶(N-ac... 利用生物酶进行体外催化反应合成不同种类的尿苷二磷酸糖(uridinediphosphatesugar,UDP-糖),生物酶的重复利用率较低。为提高尿苷二磷酸糖的合成效率及增加产物种类,以镍螯合聚丙烯酸酯树脂为载体,对带有HIS标签的N-乙酰己糖胺激酶(N-acetylhexosaminekinase,NahK)和尿苷转移酶(uridinetransferase,GlmU)进行固定化。以固定化NahK和固定化GlmU为催化酶,不同单糖作为底物,研究尿苷二磷酸糖的一锅法合成情况。利用Q柱对产物进行纯化,通过高效液相色谱法、质谱法、核磁共振氢谱法对反应产物进行检测。确定了镍螯合聚丙烯酸酯树脂对游离NahK和GlmU的实际载量分别为10和20 mg·g^(−1)。固定化酶量的最优配比为5.5 g固定化NahK和2.5 g固定化GlmU。固定化酶的最适pH和温度分别为8.0和35℃,且能在重复反应中稳定反应5个批次。葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖和甘露糖可以参与一锅法反应,生成UDP-糖的相对分子质量分别为566、607、566,而葡萄糖醛酸、半乳糖和果糖在该体系下不能合成相应的UDP-糖。基于固定化酶技术,一锅法可合成UDP-葡萄糖、UDP-N-乙酰氨基葡萄糖、UDP-甘露糖。 展开更多
关键词 udp-糖固定化酶 一锅法 udp-葡萄糖 udp-N-乙酰氨基葡萄糖 udp-甘露糖
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Glutamine metabolism in Th17/Treg cell fate:applications in Th17 cell-associated diseases 被引量:5
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作者 Guan Yang Yaoyao Xia Wenkai Ren 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2021年第2期221-233,共13页
Alteration in the Th17/Treg cell balance is implicated in various autoimmune diseases and these disease-associated pathologies.Increasing investigations have shown that glutamine metabolism regulates the differentiati... Alteration in the Th17/Treg cell balance is implicated in various autoimmune diseases and these disease-associated pathologies.Increasing investigations have shown that glutamine metabolism regulates the differentiation of Th17 and Treg cells.Here we summarize the mechanisms by which glutamine metabolism regulates Th17/Treg cell fate.Some examples of a glutamine metabolism-dependent modulation of the development and progression of several Th17/Treg cell-associated diseases are provided afterward.This review will provide a comprehensive understanding of the importance of glutamine metabolism in the fate of Th17/Treg cell differentiation. 展开更多
关键词 GLUTAMINE Th17 cells Treg cells MTOR udp-glcnac
原文传递
O-GlcNAc修饰研究进展
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作者 刘华东 陈永湘 +1 位作者 赵玉芬 李艳梅 《中国科技论文在线》 CAS 2007年第8期543-549,共7页
O-GlcNAc糖基化修饰作为一种特殊的蛋白质翻译后修饰形式,动态调节细胞信号传导途径中很多酶的功能,与磷酸修饰有"阴阳调节"关系,正在成为研究的热点。本文综述了近年来O-GlcNAc糖基化修饰酶及其供体底物的研究进展。
关键词 化学生物学 O-glcnac修饰 udp-glcnac OGT O-glcnacASE
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结核分枝杆菌UDP-N-乙酰葡糖胺生物合成及抗结核药物靶标 被引量:2
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作者 马郁芳 《大连医科大学学报》 CAS 2016年第4期313-319,共7页
结核分枝杆菌是结核病的致病菌。UDP-N-乙酰葡糖胺是结核分枝杆菌细胞壁的重要糖基供体及前体分子,其生物合成由三种酶催化的四步反应完成。磷酸葡糖胺变位酶GlmM催化第二步反应,GlmU双功能酶催化最后两步反应。glmM及glmU基因敲除分别... 结核分枝杆菌是结核病的致病菌。UDP-N-乙酰葡糖胺是结核分枝杆菌细胞壁的重要糖基供体及前体分子,其生物合成由三种酶催化的四步反应完成。磷酸葡糖胺变位酶GlmM催化第二步反应,GlmU双功能酶催化最后两步反应。glmM及glmU基因敲除分别导致细菌细胞壁受损、细菌裂解及死亡,因此,GlmM和GlmU可作为研发抗结核新药的作用靶标。建立GlmM及GlmU酶活性检测方法、揭示其酶学特性、解析GlmU的晶体结构,便于人们筛选及定向设计酶抑制剂,以期发现新一代抗结核药物。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 udp—N-乙酰葡糖胺 GLMM GlmU
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用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因
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作者 张文利 辛毅 马郁芳 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第10期1861-1864,共4页
目的:结核分枝杆菌glmU基因是分枝杆菌生长必需基因,其编码产物具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶转移酶活性,参与细胞壁前体物UDP-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)的生物合成,研究其空间结构可以定向设计酶抑制剂。方法:利用PCR方法定向突变结核分... 目的:结核分枝杆菌glmU基因是分枝杆菌生长必需基因,其编码产物具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶转移酶活性,参与细胞壁前体物UDP-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)的生物合成,研究其空间结构可以定向设计酶抑制剂。方法:利用PCR方法定向突变结核分枝杆菌glmU基因,并用大肠杆菌BL21(DE3)高表达m-GlmU蛋白。结果:获得了定向突变的结核分枝杆菌glmU基因,m-glmU。纯化的m-GlmU蛋白仍具有乙酰基转移酶活性和尿嘧啶核苷转移酶活性。结论:纯化的m-GlmU蛋白为进一步研究其稳定性、测定其空间结构提供了物质基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 细胞壁 udpglcnac GlmU
原文传递
大肠杆菌O138 O-抗原基因簇的破译及Gne的生物信息学鉴定
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作者 孔庆科 程剑松 +3 位作者 赵广 王磊 郭宏杰 郭玺 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期756-760,共5页
利用鸟枪法对大肠杆菌E .coliO138O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 14 139bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 11个基因 ,分别为鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、UDP GalNAcA合成酶基因 (gne ,gna)、糖基转移酶基... 利用鸟枪法对大肠杆菌E .coliO138O 抗原基因簇进行测序 ,序列全长 14 139bp ,用生物信息学的方法进行序列分析 ,共发现 11个基因 ,分别为鼠李糖合成酶基因 (rmlB ,rmlD ,rmlA ,rmlC)、UDP GalNAcA合成酶基因 (gne ,gna)、糖基转移酶基因 (3个 )、O 抗原转运酶基因 (wzx)和O 抗原聚合酶基因 (wzy)。发现一种稀有单糖UDP Gal NAcA的合成途径 ,对合成该糖的第一种酶Gne进行了生物信息学鉴定 。 展开更多
关键词 大肠杆菌O138 O-抗原 特异基因 udp-glcnac C4异构酶
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