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牛病毒性腹泻病毒可视化一步RT-LAMP检测方法的建立 被引量：11
1
作者 张宇名 李树凡 +5 位作者 陈志远 迟丽丽 刘健 于泽海 张玫瑜 徐守振 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期985-991,共7页
为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列,设计2组RT-LAMP引物,经过反应温度、反应时间、Mg^(2+)和甜菜碱的终浓度的优化,特异性及灵敏性试验,对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl_(2)... 为建立可视化一步RT-LAMP检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据GenBank中的BVDV的5′UTR序列,设计2组RT-LAMP引物,经过反应温度、反应时间、Mg^(2+)和甜菜碱的终浓度的优化,特异性及灵敏性试验,对3种常用显色指示剂钙黄绿素-MnCl_(2)、羟基萘酚蓝和中性红的显色效果进行评估,并使用商品化ELISA试剂盒与本方法进行对照试验。结果显示,经优化本方法在66℃30 min即可完成反应,采用中性红作为显色指示剂,检测BVDV可产生特异阳性反应;对BVDV RNA检测下限最低达0.021 pg/μL;对13份临床样品检测结果与商品化ELISA检测试剂盒相符率100%。结果表明,所建立的BVDV可视化一步RT-LAMP检测方法的特异性、灵敏性较好,可为BVDV临床快速检测提供帮助。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 RT-LAMP 可视化
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H7亚型流感病毒通用及区分强弱毒RT-PCR方法的建立 被引量：1
2
作者 蒋文明 彭程 +4 位作者 李金平 王素春 侯广宇 袁万哲 陈继明 《中国动物检疫》 CAS 2017年第6期90-93,共4页
为建立可以区分H7亚型流感病毒强弱毒的方法,根椐Genbank和GISAID中H7病毒的HA基因序列,设计2条特异性引物,建立了扩增H7病毒HA裂解位点区域的通用RT-PCR方法。在此基础上,在裂解位点处设计1条引物,建立了可以区分H7强弱毒的RT-PCR方法... 为建立可以区分H7亚型流感病毒强弱毒的方法,根椐Genbank和GISAID中H7病毒的HA基因序列,设计2条特异性引物,建立了扩增H7病毒HA裂解位点区域的通用RT-PCR方法。在此基础上,在裂解位点处设计1条引物,建立了可以区分H7强弱毒的RT-PCR方法。该方法对弱毒株可以扩增出约337 bp的片段,对强毒株可以扩增出约349 bp和227 bp的片段,对其他常见亚型流感病毒的RT-PCR扩增均为阴性。敏感性试验结果表明,该RT-PCR方法的检测下限为1 fg的H7N9病毒模板。该方法对10份实验室已鉴定好的H7N9病毒进行对比验证,两者的符合率为100%。试验结果表明,该方法具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7亚型流感病毒的快速检测,同时还可区分强弱毒,对H7N9病毒,尤其是高致病性病毒的早期诊断和有效防控可提供有效技术支撑。 展开更多
关键词 流感病毒 H7N9 RT-PCR 强毒株
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细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒感染人神经瘤细胞的影响 被引量：1
3
作者 侯金利 宋颖 +3 位作者 宋艳 段铭 关振宏 张茂林 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期176-182,共7页
为检测细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒(RABV)感染细胞的抑制作用,筛选了秋水仙素(Col)和细胞松弛素D(CytoD)2种骨架特异性抑制剂在人神经瘤细胞SH-SY5Y上的适宜浓度,探讨其对RABV感染及复制的影响。结果表明:随着细胞骨架抑制剂浓度的升高... 为检测细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒(RABV)感染细胞的抑制作用,筛选了秋水仙素(Col)和细胞松弛素D(CytoD)2种骨架特异性抑制剂在人神经瘤细胞SH-SY5Y上的适宜浓度,探讨其对RABV感染及复制的影响。结果表明:随着细胞骨架抑制剂浓度的升高,微管和微丝的破坏加剧;当Col浓度分别为0.065 mmol/L和0.130 mmol/L及CytoD浓度分别为0.25μg/mL和0.50μg/mL时,微管、微丝结构及细胞活力均与对照组无显著差异(P>0.05),2种骨架抑制剂对RABV的感染及复制均有抑制作用。通过对RABV培养物的OD值和G基因mRNA的定量检测,发现CytoD对RABV感染的抑制作用较Col更明显,Col对RABV复制的抑制作用较CytoD更明显。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 细胞骨架抑制剂 秋水仙素 细胞松弛素D
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犬细小病毒层析纯化方法的建立
4
作者 代昕宇 胡博 +6 位作者 邓效禹 张成琪 李昀真 李甜甜 孙亚杰 许丽文 白雪 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期49-53,共5页
病毒纯度是抗体制备和疫苗免疫效果提升的关键,本文利用Purose shell V15离子交换层析和Sepharose 4FF分子筛层析分别建立了犬细小病毒(CPV)的纯化方法。将CPV经过离心澄清和膜包浓缩后,用AKTA蛋白纯化仪结合Purose shell V15和Sepharos... 病毒纯度是抗体制备和疫苗免疫效果提升的关键,本文利用Purose shell V15离子交换层析和Sepharose 4FF分子筛层析分别建立了犬细小病毒(CPV)的纯化方法。将CPV经过离心澄清和膜包浓缩后,用AKTA蛋白纯化仪结合Purose shell V15和Sepharose 4FF分别进行纯化,最后使用超滤管浓缩,通过病毒含量测定、总蛋白回收率测定、SDS-PAGE、Western blot和电镜观察分析病毒的纯化效果。结果:2种方法纯化后病毒形态典型,病毒颗粒大小约20 nm,总蛋白去除率97%以上,回收率71%以上;Purose shell V15纯化后的病毒经SDS-PAGE和Western blot分析显示无细胞成分的杂带,而Sepharose 4FF纯化后的病毒有少量的牛血清白蛋白条带。本试验结果表明这2种方法均可用于CPV的纯化,Purose shell V15纯化后的病毒纯度更高。 展开更多
关键词 犬细小病毒 纯化 离子交换 分子筛
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口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其在树突状细胞的表达 被引量：2
5
作者 李杰 王若 +4 位作者 石玮 边海霞 张丽 张雷 王家鑫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期802-804,共3页
目的:构建口蹄疫病毒VP1基因的真核表达载体,转染并筛选稳定表达VP1的树突状细胞(dendritic cell,DC)。方法:将pMD-18-VP1克隆于pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒,酶切鉴定,DNA测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染DC,经含G418培养... 目的:构建口蹄疫病毒VP1基因的真核表达载体,转染并筛选稳定表达VP1的树突状细胞(dendritic cell,DC)。方法:将pMD-18-VP1克隆于pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒,酶切鉴定,DNA测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染DC,经含G418培养基筛选获得抗G418细胞克隆,用Western blot鉴定FMDV VP1基因在DC中的表达。结果:构建的pcDNA3.1-VP1真核表达载体经限制性内切酶酶切鉴定及序列分析证实了其序列的正确性,SDS-PAGE和Western blot结果显示G418筛选获得DC稳定表达VP1。结论:成功地构建了重组质粒pcDNA3.1-VP1真核表达载体,并在DC中得到稳定表达。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 真核表达 细胞转染 树突状细胞
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