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题名牛结核分支杆菌MB1916c基因的克隆和原核表达
被引量：1
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作者
郝俊峰
赵德明
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机构
中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室
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出处
《中国农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期1-6,共6页
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基金
博士后基金资助项目
国家重点基础研究发展计划项目(2005CB23000)
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文摘
构建牛结核分支杆菌MB1916 c的原核表达载体,获得了高纯度的融和表达蛋白。以牛结核分支杆菌DNA为模板,利用PCR方法扩增出牛结核分支杆菌MB1916 c基因片段,将回收纯化后的产物克隆到pGEM-T载体,测序分析鉴定为阳性的质粒,经SacⅠ/KpnⅠ双酶切后与同样条件下双酶切后的pET-30a(+)载体连接,再转化到E.coliBL21(DE3)表达菌株中,经菌落PCR快速筛选克隆,以SacⅠ/KpnⅠ双酶切和测序分析鉴定。确定正确的阳性菌株IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果显示:以牛结核分支杆菌DNA为模板,PCR后得到了MB1916 c目的基因片段,经克隆、亚克隆、序列分析和SacⅠ/KpnⅠ双酶切鉴定,获得了牛结核分支杆菌MB1916 c原核表达菌株,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约26 ku蛋白表达条带,West-ern-blotting分析证实所获得的蛋白具有牛结核分支杆菌的抗原性。本实验构建了pET-30a(+)-MB1916 c原核表达载体,得到融合6个组氨酸残基的MB1916c蛋白纯度大于95%,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。
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关键词
牛结核分支杆菌
促复苏因子c
MB1916c基因
原核表达
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Keywords
Mycobacterium bovis
resuscitation promoting factor C
MB1916c gene
prokaryotic expression
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分类号
S851.618
[农业科学—预防兽医学]
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