H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力 被引量：9

1

作者 贾立军 张艳梅 +6 位作者 李军伟 韦栋平 刘红旗 陈素娟 彭大新 张如宽 刘秀梵 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 2003年第2期11-13,共3页

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡,通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d,重组鸡痘病毒免疫组仅有13%～20%鸡的HI抗... 利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡,通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d,重组鸡痘病毒免疫组仅有13%～20%鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后,重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100%的保护率,而未免疫组全部死亡。结果表明:重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答,但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击,保护效果达到或优于目前应用的灭活苗,显示出良好的应用前景。 展开更多

关键词 重组鸡痘病毒 禽流感 血凝素基因 免疫效力

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BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：5

2

作者 麻宝艺 盛陈艳 +6 位作者 刘宏莹 马青霞 汪婷婷 李健明 时坤 杜锐 冷雪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第6期2326-2335,共10页

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件... 【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件,构建标准曲线,进行双重实时荧光定量PCR方法的特异性、敏感性和重复性检测,并利用建立的实时荧光定量PCR检测方法对采自吉林省的临床样品进行检测。【结果】建立的双重实时荧光定量PCR方法最适退火温度为57.0℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.3μmol/L,BVDV1和BVDV2型的标准曲线分别为:Y=-3.54X+37.36(R^(2)=0.990)和Y=-3.18X+35.95(R^(2)=0.997)。对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)均无特异性扩增,批内和批间变异系数均<3%,检测下限为10拷贝/μL。临床样品检测结果显示,总体阳性率为23.1%(36/156),其中BVDV1阳性率为17.9%(28/156),BVDV2阳性率为5.1%(8/156)。【结论】本研究建立了可同时快速、准确鉴别BVDV1和BVDV2的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法,为BVDV的防控与净化提供技术支撑。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) TaqMan实时荧光定量PCR方法 探针

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猪瘟病毒E2蛋白重复多表位基因的融合表达及其兔体免疫保护研究 被引量：1

3

作者 刘思国 涂长春 +3 位作者 余兴龙 张茂林 刘伯华 李作生 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期127-133,共7页

目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Wes... 目的 :研究猪瘟病毒 (CSFV)E2蛋白重复多抗原表位基因的融合表达及其免疫攻毒保护作用。方法 :应用PCR方法扩增猪瘟病毒E2蛋白重复多抗原表位基因 ,构建重复多表位基因的原核重组表达质粒PGEX-3E ,进行融合蛋白的表达和纯化。ELISA和Westernblot方法测定单表位融合蛋白GST-E和多表位融合蛋白GST-3E与猪抗CSFV的阳性血清和兔抗E2阳性血清的反应性 ,并进行融合蛋白的兔体免疫及免疫攻毒保护的比较研究。结果 :分子克隆和构建了原核重组表达质粒pGEX-3E ,表达和纯化了融合蛋白GST-3E ;单表位融合蛋白与重复多表位融合蛋白均能够与猪抗CSFV的阳性血清反应和兔抗E2的阳性血清产生免疫反应。在刺激兔体产生抗体方面 ,单表位融合蛋白刺激兔体产生抗体的能力较弱 ,而多表位融合蛋白则能够使兔体产生高效价的抗体。接种 10 0MID50 剂量猪瘟兔化弱毒 (HCLV)进行的兔体免疫攻毒保护试验表明 ,空白对照组和载体蛋白GST免疫组无保护作用 ,单表位融合蛋白免疫组具有一定的免疫保护作用 ,而重复多表位融合蛋白免疫组则完全能够抵抗猪瘟病毒的攻击。结论 :猪瘟病毒E2蛋白重复多表位的融合表达具有免疫保护作用 。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 蛋白质的融合表达

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20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究 被引量：14

4

作者 彭练慈 殷中琼 +5 位作者 贾仁勇 李莉 代如意 曲径 刘明辉 陈萍 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期22-25,共4页

【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌... 【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（ Minimal inhibitory concentration ，MIC）和最低杀菌浓度（ Minimal bactericidal concentration ， MBC），并评价抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果．【结果和结论】乌梅Prunus mume、黄连、黄芩Scutel-laria baicalensis、虎杖Polygonum cuspidatum和地榆Sanguisorba officinalis 5味中药提取物对无乳链球菌的MIC范围为7.80～31.25 mg/mL．蒲公英Taraxacum mongolicum、茵陈Artemisia scoparia、秦皮Fraxinus rhynchophylla、艾叶Arte-misia argyi、黄柏 Phellodendron chinense、鱼腥草 Houttuynia cordata、紫花地丁 Violae yedoensis 和白头翁 Pulsatilla chinensis 8味中药提取物的MIC范围为62.50～125.00 mg/mL．何首乌Po．multiflorum、苦参Sophora flavescens、穿心莲Andrographis paniculata、杜仲Eucommia ulmoides、连翘Forsythia suspensa、金银花Lonicera japonica和夏枯草Prunel-la vulgaris 7味中药提取物的MIC范围为250.00～500.00 mg/mL．联合抑菌试验结果表明，黄芩、虎杖、地榆和黄连的联合抑菌指数（FICI）≤1，虎杖、黄芩和地榆的FICI＞2．黄连、黄芩、虎杖和地榆对无乳链球菌均具有很强的体外抗菌活性，地榆、黄连为相加作用，黄连、黄芩和虎杖为协同作用，地榆与黄芩、虎杖为拮抗作用． 展开更多

关键词 无乳链球菌 中药提取物 抗菌活性

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一例疑似猪瘟的诊断与处置情况 被引量：3

5

作者 樊二虎 白森 +1 位作者 高美妮 张哲 《畜牧兽医杂志》 2021年第5期115-117,共3页

主要从事发背景、流行病学调查、临床症状、病理变化和实验室血清学鉴别诊断等方面,初步诊断了一起疑似猪瘟病例。叙述了诊治过程,总结了防治经验,为今后做好猪传染病的预防和控制奠定了基础。

关键词 猪瘟 疫情 诊断 处置

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祁连县5年牛羊布鲁氏菌病流行病学调查 被引量：1

6

作者 汪燕昌 《青海畜牧兽医杂志》 2020年第1期39-42,共4页

从2011年开始在全县7个乡镇开展牛羊布鲁氏菌病综合防治工作,技术措施包括流行病学调查、基础免疫、疫情监测、实验室检测、棚圈消毒、无害化处理、流通环节检疫监督七个方面,经过五年综合防治,全县牧业乡镇牛羊平均流产率由2010年的6.... 从2011年开始在全县7个乡镇开展牛羊布鲁氏菌病综合防治工作,技术措施包括流行病学调查、基础免疫、疫情监测、实验室检测、棚圈消毒、无害化处理、流通环节检疫监督七个方面,经过五年综合防治,全县牧业乡镇牛羊平均流产率由2010年的6.23%下降到2015年的1.88%,平均降幅4.35个百分点,重点区域降幅超过6个百分点,综合防治取得明显成效。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 防治 免疫效果 流行病学

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秋季不同牛舍环境参数及其对荷斯坦牛泌乳性能、生理和血液生化指标的影响 被引量：2

7

作者 夏海斌 王健 +3 位作者 翟云飞 徐洁 曾涵芳 韩兆玉 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1134-1141,共8页

[目的]本试验旨在测定秋季不同牛舍(开放牛舍和恒温牛舍)环境参数,探究牛舍类型对荷斯坦牛各项指标(生理指标、泌乳性能和血液生化指标等)的影响。[方法]每天距离地面1.5 m处测定奶牛所在牛舍区域的温度、相对湿度(RH)、风速和CO_(2)、N... [目的]本试验旨在测定秋季不同牛舍(开放牛舍和恒温牛舍)环境参数,探究牛舍类型对荷斯坦牛各项指标(生理指标、泌乳性能和血液生化指标等)的影响。[方法]每天距离地面1.5 m处测定奶牛所在牛舍区域的温度、相对湿度(RH)、风速和CO_(2)、NH_(3)、PM_(10)和PM_(2.5)浓度,同时测定舍外温度和RH,并计算温湿指数(THI),连续测定7 d。试验期间,记录奶牛生理指标、反刍行为、泌乳性能和奶牛舒适度数据,并在第7天下午挤奶后于尾静脉采集血液,制作血清用试剂盒测定血清生化指标。[结果]开放牛舍和恒温牛舍之间的温度、RH、THI和CO_(2)浓度无显著差异(P>0.05),恒温牛舍风速极显著高于开放牛舍(P<0.01),恒温牛舍有害气体和悬浮颗粒物含量在13:00最低。与开放牛舍奶牛相比,恒温牛舍奶牛直肠温度和呼吸频率极显著降低(P<0.01),产奶量增长速度更慢,乳中体细胞数则极显著增加(P<0.01)。此外,恒温牛舍的奶牛舒适度更高。在血清免疫指标上,恒温牛舍奶牛肿瘤坏死因子α和免疫球蛋白G含量极显著高于(P<0.01)开放牛舍,白介素6含量显著高于开放牛舍(P<0.05)。[结论]基于测定的环境参数、奶牛生理指标和舒适度,恒温牛舍能够在秋季为奶牛提供较适宜环境,但试验牛产奶量增长速度较开放牛舍慢,乳中体细胞数高,机体炎症反应较强,需要注重奶牛产后护理和疾病诊治,并加强牛舍消毒。 展开更多

关键词 牛舍类型 环境参数 生理指标 泌乳性能

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猪源肠毒素性大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立 被引量：11

8

作者 华荣虹 张书霞 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期162-164,共3页

为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K 88、K 99、F 41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K 88、K... 为了对猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的4种主要菌毛(K 88、K 99、F 41和987p)进行快速检测和分型,建立了检测4种菌毛的多重PCR方法。首先设计合成4对4种菌毛特异性的引物,然后用4种菌毛参考ETEC菌株优化了多重PCR方法。该方法对K 88、K 99、F 41和987p 4种菌毛的扩增产物分别为201,314,380和459 bp。对4种扩增产物分别进行酶切鉴定,结果均得到与预期一致的2个片段。对各个参考菌株不同组合的检测结果为100%符合。结果表明,该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性,可用于ETEC性腹泻的辅助诊断及ETEC菌毛抗原分型检测。 展开更多

关键词 肠毒素性大肠杆菌(ETEC) 菌毛基因 多重PCR

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佩兰挥发油治疗轮状病毒性仔猪腹泻的疗效观察研究 被引量：1

9

作者 张福寿 王鹤鸣 王利 《商丘职业技术学院学报》 2022年第3期92-96,共5页

为研究佩兰对轮状病毒引起的仔猪腹泻的治疗效果,将40头仔猪平均随机分为4个处理组,分别为轮状病毒对照组、佩兰挥发油低剂量组、中剂量组和高剂量组.于32日龄时,对佩兰挥发油低、中、高剂量组仔猪分别饲喂25 mg/kg/d、50 mg/kg/d、100 ... 为研究佩兰对轮状病毒引起的仔猪腹泻的治疗效果,将40头仔猪平均随机分为4个处理组,分别为轮状病毒对照组、佩兰挥发油低剂量组、中剂量组和高剂量组.于32日龄时,对佩兰挥发油低、中、高剂量组仔猪分别饲喂25 mg/kg/d、50 mg/kg/d、100 mg/kg/d剂量的佩兰挥发油饲料.试验结果表明:使用低、中、高剂量的佩兰挥发油对轮状病毒引起的仔猪腹泻具有明显的保护作用.低、中、高剂量组与病毒感染对照组相比,人工感染轮状病毒后,仔猪腹泻指数均表现差异显著,这说明佩兰挥发油对仔猪感染轮状病毒引起的腹泻有较好的疗效. 展开更多

关键词 佩兰 挥发油 猪轮状病毒 仔猪腹泻

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一株新城疫重组强毒的分离鉴定与分子特性分析 被引量：4

10

作者 谭雷涛 秦卓明 +2 位作者 马保臣 徐怀英 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1217-1223,共7页

从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表... 从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒（NDV）SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表明SRZ/03属基因Ⅱ型,F蛋白氨基酸裂解位点的序列为^112R-R-Q-K-R-F^117,与强毒基序完全相同。结合GenBank中发表的其他NDV参考株序列,对F和HN基因推导氨基酸序列进行比较。SRZ/03株与基因Ⅱ型LaSota/46、B1/47、Bingham/87和Texas/48的同源性分别为93.1%、93.0%、94.4%和94.4%;与基因Ⅶ型Taiwan/95、SGM/01和SKY/03的同源性分别为92.2%、92.8%和92.8%;与基因Ⅲ型F48E9/48的同源性为91.2%。然而,SRZ/03株F蛋白前210个氨基酸与基因Ⅱ型LaSota/46和Texas/48的同源性较高,达96.7%和98.1%,后343个氨基酸则与Taiwan/95、SGM/01等毒株的同源性较高,达95.7%-97.4%,推测该株为重组株。此外,SRZ/03株与Taiwan/95、SGM/01等毒株的HN氨基酸同源性高达95.8%-97.6%,显著高于与LaSota/46、B1/47、Bingham/87、Texas/48和F48E9/48的87.2%-89.2%。 展开更多

关键词 新城疫病毒 毒力 F基因 HN基因 重组株

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羊痘病毒研究综述 被引量：6

11

作者 高珊 孟克巴依尔 +1 位作者 乌力吉 张智文 《甘肃农业科技》 2015年第1期45-49,共5页

山羊痘、绵羊痘和牛结节性疹块都是由羊痘病毒引起的急性传染病。通过对羊痘病毒病原学、流行病学、临床症状、基因组学、诊断技术、免疫与疫苗等方面进行综述,以期为我国羊痘病毒的防治提供参考。

关键词 山羊痘 绵羊痘 牛结节性疹块 临床症状 流行病学 研究

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宿主细胞干扰素刺激基因15蛋白的真核表达及初步应用

12

作者 王改丽 王建科 +4 位作者 孙娜 王超 易立 张淑琴 程世鹏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期30-33,149,共5页

为了探究由干扰素刺激基因15(ISG15)编码产生的ISG15蛋白的表达特性,及其对犬瘟热病毒(CDV)感染过程的影响,以及在CDV致宿主免疫抑制过程中的作用,试验设计并合成了针对ISG15基因的特异性引物,提取宿主细胞总RNA,反转录成cDNA后利用RT-... 为了探究由干扰素刺激基因15(ISG15)编码产生的ISG15蛋白的表达特性,及其对犬瘟热病毒(CDV)感染过程的影响,以及在CDV致宿主免疫抑制过程中的作用,试验设计并合成了针对ISG15基因的特异性引物,提取宿主细胞总RNA,反转录成cDNA后利用RT-PCR方法扩增ISG15全基因序列,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测、回收纯化目的片段后将其插入到pEGFP-N1真核表达载体中,构建pEGFP-ISG15重组质粒。PCR和双酶切鉴定重组质粒后测序,将阳性重组质粒转染至HEK293T细胞中进行荧光显微镜观察和Western-blot分析。结果表明:经PCR扩增和双酶切鉴定得到与目的片段大小相符的片段,且测序结果证实重组质粒pEGFP-ISG15构建成功,转染HEK293T细胞24 h后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光信号,Western-blot可检测到与目的蛋白大小一致的融合蛋白。说明试验构建的重组质粒pEGFP-ISG15可在体外成功表达ISG15蛋白。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 ISG15 真核表达 转染 蛋白表达

原文传递

泰州地区仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性 被引量：1

13

作者 王帅兵 王婧 +3 位作者 陈海峰 张龙 陈晓兰 王妲妲 《贵州农业科学》 CAS 2017年第10期95-98,共4页

为有效防治大肠杆菌病及控制其耐药性,从江苏泰州地区不同猪场腹泻猪粪便中分离细菌,经镜检、培养特性、生化试验和血清型鉴定,采用攻菌试验确定其致病性,获得6株致病性大肠杆菌,并进行药敏试验。结果表明:6株致病性大肠杆菌对氨苄西林... 为有效防治大肠杆菌病及控制其耐药性,从江苏泰州地区不同猪场腹泻猪粪便中分离细菌,经镜检、培养特性、生化试验和血清型鉴定,采用攻菌试验确定其致病性,获得6株致病性大肠杆菌,并进行药敏试验。结果表明:6株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、氟苯尼考和四环素全部耐药;对头孢呋辛、头孢曲松、红霉素、复方新诺明、链霉素、阿奇霉素普遍不敏感;对头孢他啶、头孢噻肟、多西环素、庆大霉素敏感性差异明显,部分耐药,部分敏感;对头孢吡肟、丁胺卡那霉素、环丙沙星和氧氟沙星均表现敏感;对氨苄西林、阿莫西林和阿奇霉素等20种常用抗菌药均表现6~15耐的多重耐药。 展开更多

关键词 猪大肠杆菌 分离鉴定 药物敏感性 泰州

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重组猪干扰素α的原核表达及抗病毒活性

14

作者 李秀丽 韩颖 +5 位作者 赵款 张武超 梁飞 杨欢 雷白时 袁万哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期245-252,共8页

为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪... 为了探究重组猪干扰素(PoIFN-α)在体内外的抗病毒活性,利用pET-32a载体系统,构建了PoIFN-α的原核表达体系。在体外,MTT法在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)上测定了其细胞毒性,并利用细胞病变抑制法测定其抗水泡性口炎病毒(VSV)、猪脑心肌炎病毒(EMCV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的活性,同时测定了重组蛋白作用PK-15细胞后干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;之后通过小鼠攻毒保护试验,测定了rPoIFN-α治疗后各组织器官的病毒载量,ELISA测定了小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6的动态变化,并对整个试验期间小鼠出现的临床症状进行打分。结果显示,成功获得了原核表达的特异性重组蛋白rPoIFN-α,在细胞上抗病毒比活性达到1.67×10^(6)IU,对细胞没有损害作用,且显著上调了Mx1、OAS等因子的转录水平;在小鼠体内能明显拮抗EMCV和PRV的增殖,减少促炎因子的产生,延缓临床症状的出现。结果表明,原核表达重组蛋白rPoIFN-α在体内外均具有抗病毒活性,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 重组猪干扰素α 大肠杆菌表达 干扰素刺激基因 细胞毒性 抗病毒活性

原文传递

稳定表达绵羊肺腺瘤病毒表面蛋白A549细胞系的建立 被引量：1

15

作者 刘霄卉 罗军荣 +2 位作者 斯日古楞 周建华 马学恩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期395-398,共4页

为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,... 为研究绵羊肺腺瘤病病毒(JSRV)表面蛋白(SU)的致瘤机制,本研究构建稳定表达SU的羊肺细胞A549细胞系。采用PCR方法从含su基因的pGEX-4T-1-SU重组质粒中扩增SU编码序列,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染A549细胞。通过G418筛选,对转染阳性细胞进行纯化,获得稳定表达JSRVSU蛋白的A549细胞系。以间接免疫荧光及westernblot鉴定SU的表达状况,并运用共聚焦显微镜确认SU蛋白的亚细胞定位。结果表明,重组蛋白SU在A549细胞中有效表达,而且主要分布于细胞质中。该细胞系的建立为SU生物学功能的体外研究提供了平台。 展开更多

关键词 绵羊肺腺瘤病毒 表面蛋白 真核表达 细胞内定位

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羊干扰素α和γ融合表达及抗病毒活性分析 被引量：1

16

作者 韩颖 李秀丽 +4 位作者 豆子航 郭笑然 雷白时 袁万哲 赵款 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期660-667,共8页

为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果,根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列,使用Linker连接合成目的序列,成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制... 为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果,根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列,使用Linker连接合成目的序列,成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制法和RT-qPCR测定重组蛋白rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ的抗病毒活性。结果表明,rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ在牛肾细胞(MDBK)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞中有抗病毒活性,且rOviIFN-α/γ的抗病毒效果最优;rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ能够显著上调MDBK以及Vero细胞中4种干扰素刺激基因(IFN stimulated genes,ISGs)的mRNA转录水平,且rOviIFN-α/γ对干扰素刺激基因的上调水平最显著。综上所述,本试验表达的重组蛋白都具有抗病毒作用,其中串联表达的重组蛋白抗病毒活性以及干扰素刺激基因转录水平较高。 展开更多

关键词 羊干扰素α和γ 细胞病变抑制 融合表达 抗病毒活性 干扰素刺激基因

原文传递

硫酸铜溶液诱导对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗菌药物抗性效应的初步研究

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作者 罗梦幽 汤承 +2 位作者 赵燕英 陈娟 唐俊妮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期841-850,共10页

旨在探究硫酸铜溶液连续诱导对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)抗菌药物抗性及相关基因表达的影响。采用微量肉汤稀释法测定经硫酸铜诱导前后MRSA菌株(MR-YB1224、MR-YS3和MR-P318)对硫酸... 旨在探究硫酸铜溶液连续诱导对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)抗菌药物抗性及相关基因表达的影响。采用微量肉汤稀释法测定经硫酸铜诱导前后MRSA菌株(MR-YB1224、MR-YS3和MR-P318)对硫酸铜溶液及β-内酰胺类(氨苄西林、苯唑西林和头孢西丁)、氟喹诺酮类(氧氟沙星)、大环内酯类(罗红霉素)和氨基糖苷类(链霉素)等抗菌药物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用荧光定量PCR方法测定硫酸铜诱导对菌株抗重金属基因(cop A和ars B)和耐药基因(mec A,nor A,erm B和aac 6′/aph 2″)表达的影响。连续诱导7 d后,MRSA菌株对硫酸铜溶液的MIC值均增加;特别是对β-内酰胺类抗菌药物的MIC值增加显著(P<0.05);MRSA菌株对6种抗菌药物MIC值变化大小依次为苯唑西林>氨苄西林>头孢西丁>氧氟沙星>链霉素>罗红霉素。另外,连续诱导后,MRSA菌株的抗重金属基因和相关耐药基因的表达均显著上调(P<0.05)。本试验结果表明,硫酸铜溶液诱导对MRSA菌株抗菌药物抗性效应具有较强的协同效应。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 硫酸铜溶液 诱导 抗菌药物抗性 抗重金属基因 荧光定量PCR

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禽腺病毒血清4型河南株的分离鉴定及对鸡胚致病性的研究 被引量：5

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作者 李京帅 李银聚 +6 位作者 张春杰 程相朝 吴庭才 余祖华 贾艳艳 李静 廖成水 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期479-483,共5页

为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征，本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定，并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝，处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚．尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和he... 为探明河南省某鸡场疑似禽腺病毒血清4型发病鸡群的感染情况和病毒特征，本试验对发病鸡群进行了病毒分离鉴定，并研究所分离到的病毒对鸡胚的致病性。采集发病鸡群鸡肝，处理后经尿囊腔接种SPF鸡胚．尿囊液禽腺病毒血清4型PCR鉴定和hexon基因序列分析，尿囊液经过浓缩定量和梯度稀释，接种SPF鸡胚，观察鸡胚病变，计算ELD50，同时荧光定量PCR测定病毒在鸡胚肝和尿囊液中的载量。结果显示，在鸡胚尿囊液中扩增出大小934bp的基因片段，序列分析表明，该序列与禽腺病毒血清4型同源性为98．2％～99．8％。感染病毒的鸡胚的胚体矮小、发育不良，肝肿大、质脆，呈黄色或棕黄色，胸肌、腿肌明显出血，病毒裁量和鸡胚病变与接种剂量有关。该毒株的ELD50为1．36×10^7 copies／μL，相同时间内病毒在肝中的载量高于尿囊液。本试验为进一步开展禽腺病毒血清4型的研究和防控提供了必要的参考依据。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 分离鉴定 鸡胚 ELD50

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A型禽流感病毒H7N9株NS1基因的克隆和真核表达

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作者 黄海岩 刘新宇 蔡葵蒸 《甘肃畜牧兽医》 2021年第9期46-49,共4页

目的:构建H7N9亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。方法:提取H7N9亚型禽流感病毒分离株总RNA,RT-PCR扩增获得NS1的全长基因,克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-FLAG-NS1,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转... 目的:构建H7N9亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。方法:提取H7N9亚型禽流感病毒分离株总RNA,RT-PCR扩增获得NS1的全长基因,克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-FLAG-NS1,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,Western blot技术鉴定NS1蛋白的表达。结果:成功克隆了NS1全长基因,构建了H7N9毒株的NS1蛋白真核表达载体pRK-FLAG-NS1并转染于293T细胞中。结论:Western blot分析表明,NS1蛋白得到成功表达,为开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 H7N9病毒株 NS1基因 克隆 真核表达

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鼠伤寒沙门菌oppCDF基因缺失株的构建及生物学特性分析

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作者 杨婉 张家莉 +4 位作者 陈世雄 武绍碧 叶景芬 潘永 杨琦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期491-498,共8页

利用λ-Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌oppCDF基因缺失株,并检测其生长特性、运动性、生物被膜形成能力、胞内存活能力及LD50毒力。结果显示,与野生型菌株相比,oppCDF基因缺失株的生长特性无明显变化;oppCDF基因缺失株可降低鼠伤寒沙... 利用λ-Red同源重组技术构建鼠伤寒沙门菌oppCDF基因缺失株,并检测其生长特性、运动性、生物被膜形成能力、胞内存活能力及LD50毒力。结果显示,与野生型菌株相比,oppCDF基因缺失株的生长特性无明显变化;oppCDF基因缺失株可降低鼠伤寒沙门菌的运动性;oppC与oppF基因缺失后可提高鼠伤寒沙门菌生物被膜形成能力;同时,oppC基因缺失可降低在RAW267.4细胞内的存活能力和其在小鼠体内的毒力,oppF基因缺失可显著增强在RAW267.4内的存活能力和对小鼠毒力的影响,而oppD基因缺失后其在小鼠体内的毒力和RAW267.4内的存活率均无显著变化。研究表明,oppCDF基因与鼠伤寒沙门菌的运动性、生物被膜形成和毒力密切相关,为进一步揭示鼠伤寒沙门菌致病作用中的复杂调控和机制提供了理论基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 λ-Red同源重组 oppCDF基因 生物学特性

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