目的研究载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽样3(APOBEC3s)脱氨酶对HPV(+)人类永生化上皮细胞(W12)基因组稳定性的影响。方法利用W12细胞为模型,通过基因转染APOBEC3A(A3A)、APOBEC3G(A3G)和GFP表达质粒,获得转染后24 h和48 h的两组样品。采...目的研究载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽样3(APOBEC3s)脱氨酶对HPV(+)人类永生化上皮细胞(W12)基因组稳定性的影响。方法利用W12细胞为模型,通过基因转染APOBEC3A(A3A)、APOBEC3G(A3G)和GFP表达质粒,获得转染后24 h和48 h的两组样品。采用Western blot方法检测细胞DNA损伤反应(DDR)通路中经典蛋白激酶的表达情况。此外,利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的方式,观察A3A和A3G的细胞定位。结果 Western blot结果显示,A3A过表达W12细胞样品中,经典DNA双链断裂的标记物γH2AX表达明显上调。DDR通路中ATM和Chk2激酶的磷酸化水平有所提高。此外,同源重组(HR)修复中的细胞因子p NBs1的表达也被上调。相反A3G的作用却不很明显。另外,GFP标记蛋白显示A3A分布在细胞核和细胞质,而A3G只定位在细胞质中。结论相比A3G,A3A的过表达可以明显影响W12细胞基因组的稳定性,进而激活宿主细胞DDR通路中多种蛋白激酶的活化。展开更多
文摘目的研究载脂蛋白B m RNA编辑酶催化多肽样3(APOBEC3s)脱氨酶对HPV(+)人类永生化上皮细胞(W12)基因组稳定性的影响。方法利用W12细胞为模型,通过基因转染APOBEC3A(A3A)、APOBEC3G(A3G)和GFP表达质粒,获得转染后24 h和48 h的两组样品。采用Western blot方法检测细胞DNA损伤反应(DDR)通路中经典蛋白激酶的表达情况。此外,利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的方式,观察A3A和A3G的细胞定位。结果 Western blot结果显示,A3A过表达W12细胞样品中,经典DNA双链断裂的标记物γH2AX表达明显上调。DDR通路中ATM和Chk2激酶的磷酸化水平有所提高。此外,同源重组(HR)修复中的细胞因子p NBs1的表达也被上调。相反A3G的作用却不很明显。另外,GFP标记蛋白显示A3A分布在细胞核和细胞质,而A3G只定位在细胞质中。结论相比A3G,A3A的过表达可以明显影响W12细胞基因组的稳定性,进而激活宿主细胞DDR通路中多种蛋白激酶的活化。
