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不同非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞方法的比较 被引量:2
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作者 魏嘉田 卢沛伶 +5 位作者 黄婧 柳雪 蔡海明 巫国辉 张玲华 聂云飞 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第33期5347-5352,共6页
背景:探索能够高效、稳定获取基质血管组分细胞的方法对于临床应用有非常重要的价值。目前分离基质血管组分的方法主要包括酶解法、推注破碎法、接触式超声波破碎法等,存在安全性和细胞存活率低、材料污染等不足,而非接触式超声波破碎... 背景:探索能够高效、稳定获取基质血管组分细胞的方法对于临床应用有非常重要的价值。目前分离基质血管组分的方法主要包括酶解法、推注破碎法、接触式超声波破碎法等,存在安全性和细胞存活率低、材料污染等不足,而非接触式超声波破碎法则能很好的解决这个问题。目的:寻找一种最优的非接触式超声波处理获得脂肪源基质血管组分细胞的方法。方法:实验所用人体脂肪组织(皮下脂肪)由广州中家医家庭医生整形美容医院提供,体检无其他基础疾病,取材前均获知情同意并签署知情同意书。以3种不同的超声波仪器(超声波清洗仪功率约为800 W、超声波细胞破碎仪功率约为1 000 W、非接触式超声波细胞破碎仪功率约为1 200 W)对脂肪材料进行非接触式超声处理15,20,25 min,以接触式超声波细胞破碎法为对照,功率为100 W,超声处理16 s,分别检测基质血管组分细胞大小、存活数量、细胞活力、细胞碎片率和微生物感染度。该研究实施符合广州中家医家庭医生整形美容医院的相关伦理要求。结果与结论:(1)3种方法所获得的基质血管组分细胞活性均高于接触式超声波破碎法(P<0.05);(2)3种方法所获得的基质血管组分细胞污染度均低于接触式超声波破碎法;(3)3种方法获得的基质血管组分细胞大小差异无显著性意义(P>0.05);(4)3种方法所获得的基质血管组分细胞碎片均少于接触式超声波破碎法(P<0.05),其中非接触式超声波细胞破碎仪处理20 min后采用酶解方法获取基质血管组分细胞的效果最好。 展开更多
关键词 脂肪组织 基质血管组分 非接触式超声波 纯物理破碎 细胞活力
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Raw264.7细胞向破骨细胞分化诱导培养体系的改良 被引量:2
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作者 李新 张舒岩 +5 位作者 杨立彬 李冉 蒋然然 陈治光 李树蕾 李树红 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1114-1118,I0006,共6页
目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO... 目的:通过改良细胞培养方案建立体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟破骨细胞(OC)的高效培养体系。方法:向Raw264.7细胞培养液α-MEM中添加50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3,于5%CO2、37℃孵箱中培养12d,每3d换液1次,每次换液前对细胞进行短暂消化。倒置显微镜下观察细胞形态变化,并利用HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、FITCphalloidin染色和免疫荧光染色鉴定OC是否成熟并具有吞噬功能。结果:通过改良培养方法,在诱导过程中培养孔内的大部分区域始终保持单层细胞的生长状态。镜下观察和HE染色,诱导第12天时OC胞体覆盖培养面积的70%;FITC-phalloidin染色,伴随着OC成熟,伪足内出现的束状伪足小体逐渐变为环形,最终融合带状肌动蛋白环环绕在胞质周围;免疫荧光染色,诱导12d后OC表达的降钙素受体(CTR)较前体细胞显著增加,TRAP染色显示OC胞浆内呈现大量红色颗粒。提示获得的OC成熟并具有吞噬功能。结论:本实验通过改良培养方法,联合应用细胞因子50μg·L-1 M-CSF、100μg·L-1 RANKL和1×10-8 mol·L-1 1α,25-(OH)2D3建立了体外诱导Raw264.7细胞分化形成成熟OC的高效培养体系。 展开更多
关键词 Raw 264.7细胞 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 核因子ΚB受体活化因子配体 1.25二羟基 维生素D3
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自体骨髓间充质干细胞治疗脑干出血41例临床分析 被引量:1
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作者 王军 王晓峰 张荣军 《中国实用神经疾病杂志》 2013年第23期20-22,共3页
目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑干出血的疗效。方法 41例接受自体骨髓间充质干细胞移植患者(干细胞治疗组)和41例接受常规治疗患者(对照组),实施美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分和日常生活能力指数(Barthel index)评分... 目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑干出血的疗效。方法 41例接受自体骨髓间充质干细胞移植患者(干细胞治疗组)和41例接受常规治疗患者(对照组),实施美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分和日常生活能力指数(Barthel index)评分,并比较两种治疗方法的差异。结果干细胞治疗组在治疗后14d、3个月NIHSS评分显著低于对照组(P<0.05);干细胞治疗组在治疗后3个月Barthel index评分及Barthel index加分幅度显著高于对照组(P<0.05);干细胞治疗组治疗后3个月疗效优于对照组。结论自体骨髓干细胞治疗可有效改善脑干出血患者的预后。 展开更多
关键词 间充质干细胞 脑干出血 自体
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GPC3在不同侵袭能力肝细胞癌细胞株中的表达及其与4E-BP1和PS6K的相关性研究
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作者 高飞 董勤 《医学综述》 2020年第11期2228-2234,共7页
目的检测两种不同侵袭能力的肝细胞癌(HCC)细胞系的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、真核细胞启动因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6蛋白激酶(PS6K)的mRNA和蛋白表达,并探讨3种基因与肝癌细胞转移侵袭能力的相关性。方法分别采用荧光定量... 目的检测两种不同侵袭能力的肝细胞癌(HCC)细胞系的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、真核细胞启动因子4E结合蛋白1(4E-BP1)和核糖体S6蛋白激酶(PS6K)的mRNA和蛋白表达,并探讨3种基因与肝癌细胞转移侵袭能力的相关性。方法分别采用荧光定量聚合酶链反应和Western blotting方法检测低转移侵袭力MHCC-97L、对照细胞系HL-7702、高转移侵袭力MHCC-97H细胞系的GPC3、4E-BP1、PS6K的mRNA和蛋白表达水平,采用R语言分析3种蛋白与HCC细胞侵袭能力的相关性。结果cbioportal分析结果显示,GPC3、4E-BP1、PS6K表达异常的HCC患者生存时间明显短于表达正常的HCC患者(P<0.05),整体生存率和生存周期均降低。与HL-7702细胞系相比,MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01),4E-BP1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01),MHCC-97L细胞GPC3 mRNA和蛋白水平降低(P<0.01),4E-BP1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.01)。MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K mRNA水平显著高于MHCC-97L细胞(8.12±0.21比2.34±0.42,8.19±0.54比5.23±0.25)(P<0.01),4E-BP1 mRNA水平低于MHCC-97L细胞(1.28±0.45比9.13±0.12)(P<0.01)。MHCC-97H细胞表达的GPC3和PS6K蛋白水平显著高于MHCC-97L细胞(0.82±0.01比0.34±0.04,0.82±0.07比0.31±0.02)(P<0.01),4E-BP1蛋白水平低于MHCC-97L细胞(0.18±0.07比1.13±0.03)(P<0.01)。经R语言编程进行相关性矩阵分析显示,在MHCC-97L中,GPC3与4E-BP1呈负相关(r=-0.850),GPC3与PS6K呈正相关(r=0.868),PS6K与4E-BP1呈负相关(r=-0.898);在MHCC-97H中,GPC3与4E-BP1呈负相关(r=-0.877),GPC3与PS6K呈正相关(r=0.888),PS6K与4E-BP1呈负相关(r=-0.898)。结论GPC3和PS6K的mRNA和蛋白水平随着HCC转移侵袭能力的增强而升高,PS6K与GPC3表达呈正相关。4E-BP1的表达则随着HCC转移侵袭能力的增强而降低,与GPC3的表达呈负相关,且这3种蛋白的表达均与HCC转移侵袭能力的增强密切相关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 真核细胞启动因子4E结合蛋白1 核糖体S6蛋白激酶1
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人破骨细胞的体外培养及鉴定 被引量:4
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作者 刘水涛 雷鸣 +3 位作者 安佰京 杨军 张鹏礼 邢更彦 《武警医学》 CAS 2011年第5期381-384,共4页
目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描... 目的探索人破骨细胞的体外培养及鉴定方法 ,为各类试验研究提供大量高活性破骨细胞。方法分离骨髓血得到单个核细胞,用不同培养液、诱导剂在不同浓度下培养破骨细胞,通过TRAP染色鉴定破骨细胞形态,ELISA法检测特异性蛋白表达水平,扫描电镜分析骨片骨陷窝面积。结果用α-MEM培养液,10^(-7)mmol/L浓度的1,25(OH)_2VD_3或50ng/ml浓度的RANKL和30ng/ml的M-CSF作为诱导剂,所培养的破骨细胞多核、特异性蛋白表达水平高、蚀骨能力强。结论 用DMEM培养液和α-MEM培养液培养均是一种能在体外诱导生成大量人破骨细胞的方法。同时,建议采用1,25(OH)_2VD_3作为诱导剂。 展开更多
关键词 人破骨细胞 细胞培养 TRAP染色
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