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热点突变法提高人源抗TNF-α抗体的亲和力 被引量:2
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作者 陈晓穗 汪保安 +4 位作者 周丽君 王欲晓 曲佳 张达矜 王琰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期644-648,共5页
目的 通过热点突变法对一株人源抗TNF αScFv进行体外亲和力成熟。方法 根据体内抗体亲和力成熟时V基因体细胞突变的热点 ,设计引物进行多步重叠PCR ,在本株ScFv的H CDR3和L CDR3热点部位引入随机突变 ,构建噬菌体抗体库 ,采用硫氰酸... 目的 通过热点突变法对一株人源抗TNF αScFv进行体外亲和力成熟。方法 根据体内抗体亲和力成熟时V基因体细胞突变的热点 ,设计引物进行多步重叠PCR ,在本株ScFv的H CDR3和L CDR3热点部位引入随机突变 ,构建噬菌体抗体库 ,采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行筛选 ,对选出的克隆测定其相对亲和力 ,并进一步将 4株转换表达成为可溶性Fab ,以非竞争ELISA法测定其亲和常数。结果 构建了库容为 1.8× 10 7的热点突变抗体库 ,筛选得到了多株亲和力明显提高的抗TNF α抗体的突变体 (最多达 10倍 )。结论 热点突变法是体外提高抗体亲和力的有效和可行的方法。 展开更多
关键词 热点突变法 抗TNF-α抗体 亲和力 人源抗体 抗体库
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人破伤风免疫噬菌体抗体库的建立及鉴定 被引量:1
2
作者 刘军莉 王群 +3 位作者 张蘋 高尚先 孙汶生 张利宁 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第6期636-639,共4页
目的:建立人破伤风免疫噬菌体抗体库,筛选抗破伤风类毒素的抗体基因,并在大肠杆菌中表达可溶性Fab段。方法:从破伤风类毒素免疫志愿者中分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,用一组人IgGFab基因特异性引物,从合成的cDNA中经PCR扩增出抗体轻链(VL... 目的:建立人破伤风免疫噬菌体抗体库,筛选抗破伤风类毒素的抗体基因,并在大肠杆菌中表达可溶性Fab段。方法:从破伤风类毒素免疫志愿者中分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,用一组人IgGFab基因特异性引物,从合成的cDNA中经PCR扩增出抗体轻链(VL+CL)和重链Fd(VH+CH1)基因,分别经XbaⅠ/SacⅠ和SpeⅠ/XhoⅠ酶切克隆入噬菌粒pComb3。用破伤风外毒素作为抗原进行筛选富集获得特异性抗破伤风类毒素的噬菌体抗体,切去噬菌体外壳蛋白基因Ⅲ(gⅢ),表达可溶性人抗破伤风类毒素的Fab段。结果:经核苷酸序列分析证实,所获得的基因为人IgGFab基因;用ELISA鉴定表明,表达的人IgGFab抗体能特异性地与破伤风外毒素结合。结论:利用噬菌体抗体库技术筛选可得到与破伤风外毒素特异性结合的人抗破伤风类毒素基因工程抗体。 展开更多
关键词 破伤风类毒素 噬菌体 免疫球蛋白类 Fab 抗体 细菌
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CD45在T细胞活化中的调节作用 被引量:1
3
作者 王会贤 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1994年第2期63-66,共4页
CD45是表达于所有造血干细胞来源的有核细胞表面的一个同源二聚体分子。它具有蛋白酪氨酸磷酸水解酶活性,可通过调节一系列底物蛋白的磷酸化程度来参与T细胞活化。另外,它还直接与T细胞表面其它分子发生关系,作用于T细胞。关于CD45分子... CD45是表达于所有造血干细胞来源的有核细胞表面的一个同源二聚体分子。它具有蛋白酪氨酸磷酸水解酶活性,可通过调节一系列底物蛋白的磷酸化程度来参与T细胞活化。另外,它还直接与T细胞表面其它分子发生关系,作用于T细胞。关于CD45分子的作用机制虽然已有了初步了解,但仍然有许多问题尚待解决。 展开更多
关键词 抗原 CD 淋巴细胞活化 T细胞
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中国汉族两群体HLA-DQA1基因的遗传构成及有关15群体DQA1基因频率的比较分析 被引量:9
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作者 潘星华 陆建荣 +4 位作者 刘杰 张克雄 朱定良 谈家桢 庚镇城 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期276-279,共4页
以HLA基因的PCR-RFLP分型方法研究了哈尔滨地区(Hans-H,71例)和上海地区(Hans-S,98例)两个汉族群体HLA-DQA1座位的遗传多态性。共检出8种等位基因。两群体均以DQA1*0301频率最高,而*0401最低(哈尔滨群体未检出),频率分布符合Hardy-Weinb... 以HLA基因的PCR-RFLP分型方法研究了哈尔滨地区(Hans-H,71例)和上海地区(Hans-S,98例)两个汉族群体HLA-DQA1座位的遗传多态性。共检出8种等位基因。两群体均以DQA1*0301频率最高,而*0401最低(哈尔滨群体未检出),频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。综合分析华人12群体及日本人、高加索人和尼格鲁人等3群体的HLA-DQA1的基因频率显示:卡方总体检验Hans-H及Hans-S与北方华人其它4群体(除维族)间相互无显著差异(P>0.05)),但逐项检验群体间多存在一个至几个基因频率的显著差异(P<0.05~0.001)。总体检验北方华人6群体(包括Hans-S)与南方5群体间均有显著差异(P<0.05~0.001),但满族与南方汉人3群体总体检验无显著差异(P>0.05),而维族与北方华人6群体则有显著差异(P<0.05~0.001)。另外,华人与异族间总体均有非常显著差异(P<0.001),但相对而言,华人(尤其是北方人)与日本人最为接近,华人与高加索人相似性较大,与尼格鲁人差异最大,而高加索人与尼格鲁人差异也较小。并对上述结果进行了讨论。 展开更多
关键词 PCR-PFLP分型 HLA-DQA1 遗传多态性 汉族群体
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人白细胞转移因子稳定性试验
5
作者 潘玫玫 刘玮 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第A01期387-388,共2页
关键词 白细胞 转移因子 稳定性 试验
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杂化杂交瘤产生双特异性单克隆抗体研究进展
6
作者 吴玉水 朱忠勇 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1995年第3期100-103,共4页
杂化杂交瘤产生的双特异性单克隆抗体已广泛应用于体内外研究,包括细胞间的相互作用、改进免疫学诊断方法、自身免疫性疾病和肿瘤的导向治疗等诸多领域。本文着重就杂交瘤融合技术制备的双特异性单克隆抗体的有关理论和技术的优缺点,... 杂化杂交瘤产生的双特异性单克隆抗体已广泛应用于体内外研究,包括细胞间的相互作用、改进免疫学诊断方法、自身免疫性疾病和肿瘤的导向治疗等诸多领域。本文着重就杂交瘤融合技术制备的双特异性单克隆抗体的有关理论和技术的优缺点,以及应用研究进展作一简要综述。 展开更多
关键词 单克隆抗体 杂交瘤技术 双特异性 抗体 制备
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人CD34抗原基因克隆及鉴定
7
作者 舒翠玲 汲言山 +3 位作者 沈倍奋 王建安 孙启鸿 胡美茹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期136-138,共3页
CD34抗原是一个阶段特异性白细胞分化抗原,在早期造血调控方面起着重要的作用。本文采用RT-PCR方法,从高效表达CD34抗原的KG-la细胞系中成功地克隆出CD34抗原全长cDNA,并对重组基因进行了酶切鉴定和序列... CD34抗原是一个阶段特异性白细胞分化抗原,在早期造血调控方面起着重要的作用。本文采用RT-PCR方法,从高效表达CD34抗原的KG-la细胞系中成功地克隆出CD34抗原全长cDNA,并对重组基因进行了酶切鉴定和序列分析。结果表明除胞内区有一碱基改变,其它序列与报道完全一致。 展开更多
关键词 CD34 抗原 基因克隆 序列分析 鉴定
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同源框基因蛋白ISL—1抗血清的制备 被引量:1
8
作者 李统威 范明 沈红 《神经科学》 SCIE CAS 1995年第4期185-187,共3页
用PCR方法合成了IsL-1cDNA的一段543bp的编码序列,将该cDNA克隆于表达载体pQE-32中,含pQE-32/IsL-1重组子的M15转化菌株经诱导培养后获得了IsL-1融合蛋白,用该蛋白免疫家兔,产生抗... 用PCR方法合成了IsL-1cDNA的一段543bp的编码序列,将该cDNA克隆于表达载体pQE-32中,含pQE-32/IsL-1重组子的M15转化菌株经诱导培养后获得了IsL-1融合蛋白,用该蛋白免疫家兔,产生抗IsL-1抗体,经免疫组化初步检测发现大鼠中枢神经系统内广泛存在IsL-1免疫阳性细胞。IsL-1在中枢神经系统的作用有待研究。 展开更多
关键词 抗血清 免疫组化 同源框基因蛋白
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肝病患者的肝组织单细胞悬液与外周血中淋巴细胞亚群的分析比较 被引量:6
9
作者 韩亚萍 刘源 +4 位作者 李军 陈念 董莉 蔡洁 黄祖瑚 《检验医学》 CAS 北大核心 2005年第5期448-451,共4页
目的探讨肝脏组织单细胞悬液的制备方法,了解慢性肝病患者的肝组织和外周血的淋巴细胞亚群差异。方法分别选择慢性乙型肝炎(CHB)14例、自身免疫性肝炎(AIH)4例和原发性肝细胞癌(HCC)3例,在超声引导下经皮作肝脏穿刺活检,用单细胞制备仪... 目的探讨肝脏组织单细胞悬液的制备方法,了解慢性肝病患者的肝组织和外周血的淋巴细胞亚群差异。方法分别选择慢性乙型肝炎(CHB)14例、自身免疫性肝炎(AIH)4例和原发性肝细胞癌(HCC)3例,在超声引导下经皮作肝脏穿刺活检,用单细胞制备仪或物理研磨方法将肝组织制备成单细胞悬液,肝组织中淋巴细胞经4种特异性荧光抗体标记,在流式细胞仪(FCM)上作四色荧光分析,并与外周血测定结果比较。结果单细胞制备仪和物理研磨方法制备的肝组织单细胞悬液,细胞成活率分别为92.4%和91.5%;检测肝组织单细胞悬液中淋巴细胞亚群,正常对照组和慢性肝病各组间差异均有显著性(P<0.05),AIH组和CHB组间差异有显著性(P<0.05)。而外周血中淋巴细胞亚群检测,HCC组和CHB组间差异有显著性(P<0.05)。肝组织和外周血相应项目比较差异均有显著性(P<0.05)。结论用2种方法制备单细胞悬液能满足FCM检测的特殊需要;肝脏组织中淋巴细胞与外周血的淋巴细胞亚群比例差异有显著性。 展开更多
关键词 淋巴细胞亚群 单细胞悬液 肝脏 穿刺
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“我们战胜了SARS,也一定能战胜禽流感”——温家宝在北京考察人用禽流感疫苗和药物研制工作
10
《卫生政策》 2005年第12期1-1,共1页
新华社北京11月17日电 正当我国防控高致病性禽流感的关键时期,中共中央政治局常委、国务院总理温家宝7日在北京深入科研单位,考察我国人用禽流感疫苗和药物研制工作。温家宝代表党中央、国务院,看望奋战在抗击禽流感疫情科研第一线... 新华社北京11月17日电 正当我国防控高致病性禽流感的关键时期,中共中央政治局常委、国务院总理温家宝7日在北京深入科研单位,考察我国人用禽流感疫苗和药物研制工作。温家宝代表党中央、国务院,看望奋战在抗击禽流感疫情科研第一线的科技工作者,向他们表示亲切的问候和崇高的敬意。 展开更多
关键词 禽流感疫苗 研制工作 温家宝 SARS 北京 药物 人用 高致病性禽流感 中共中央政治局 科研单位
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NF-κB Regulates B-Cell-Derived Nerve Growth Factor Expression 被引量:1
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作者 Klaus Heese Noriko Inoue Tohru Sawada 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2006年第1期63-66,共4页
In the mammalian brain, four neurotrophins have been identified: nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), neurotrophin-3 (NT-3) and neurotrophin-4/5 (NT-4/5). NGF exerts an importa... In the mammalian brain, four neurotrophins have been identified: nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), neurotrophin-3 (NT-3) and neurotrophin-4/5 (NT-4/5). NGF exerts an important role in the development and functions of the central and peripheral nervous system. However, it has recently been documented that several types of immune cells, such as mast ceils, iymphocytes, basophils and eosinophils, produce, store and release NGF. Accumulating preclinical and clinical data indicate that dysfunctions of NGF and the other neurotrophins may contribute to impaired immune responses and concentration of NGF frequently correlates with disease severity. Thus, the aim of this study was to elucidate the potential signaling mechanisms of cytokineneurotrophins interactions contributing to increased NGF levels. Our data show that the transcription factor NF-κB plays a pivotal role in regulating B-cell-derived NGF expression. 展开更多
关键词 immune system INFLAMMATION INTERLEUKIN NGF NEUROTROPHIN
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核糖核酸干扰技术在移植免疫中的应用前景
12
作者 朱珉 陈刚 陈实 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期253-254,共2页
关键词 核糖核酸干扰技术 移植免疫 基因沉默现象 哺乳动物细胞 病毒载体系统 RNAi 双链RNA 靶基因表达 转基因小鼠 培养细胞
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增强DNA疫苗免疫应答的新进展 被引量:1
13
作者 周璨林 张富春 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第1期22-25,共4页
DNA疫苗为编码抗原蛋白的真核表达载体,注入体内后在原位表达所编码的抗原并诱导免疫应答,在预防感染、治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤等疫病中有着很好的应用前景。但与灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低。有多种策略能够增强或... DNA疫苗为编码抗原蛋白的真核表达载体,注入体内后在原位表达所编码的抗原并诱导免疫应答,在预防感染、治疗自身免疫性疾病、过敏性疾病和肿瘤等疫病中有着很好的应用前景。但与灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低。有多种策略能够增强或调节DNA疫苗诱导的免疫应答,其中,作为外源基因载体的质粒的组成及插入的有关基因均可直接或间接地影响免疫反应的效果,在构建DNA疫苗质粒时,加入细胞因子、融合信号、泛素等基因以及ISS序列,另外还可以通过设计一些对抗原提成细胞有影响的分子共注射,以及加入转移分子,都可以明显增强DNA疫苗的免疫效果,从而有利于研制更有效的DNA疫苗。 展开更多
关键词 DNA疫苗 免疫应答 免疫刺激序列
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抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12单克隆抗体制备及初步鉴定
14
作者 司瑞 徐志凯 +5 位作者 张芳琳 白文涛 吴兴安 王海涛 于澜 胡刚 《科学技术与工程》 2006年第19期3043-3046,共4页
制备抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的单克隆抗体(mAb),为进一步研制布鲁菌检测方法和免疫制剂提供基础。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗核糖体蛋白L7/L12的mAb,并用Westernblot和ELISA方法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等... 制备抗羊布鲁菌核糖体蛋白L7/L12的单克隆抗体(mAb),为进一步研制布鲁菌检测方法和免疫制剂提供基础。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗核糖体蛋白L7/L12的mAb,并用Westernblot和ELISA方法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了4株抗L7/L12蛋白的mAb:1B1,2A2,2H9和2H10,相对亲和力为2A2>2H10>2H9>1B1,4株mAb识别的抗原表位相近,但仍存在一定的差异。得到的4株稳定的杂交瘤细胞系分泌的mAb能特异结合L7/L12蛋白。 展开更多
关键词 羊布鲁菌 核糖体蛋白L7/L12 单克隆抗体
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正常及肿瘤细胞中参与IL─3基因表达调节的转录因子研究 被引量:1
15
作者 石统东 甘立霞 +1 位作者 曹廷兵 朱锡华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期155-158,共4页
应用凝胶迁移率分析法,以静止与激活的正常人原代T淋巴细胞和Jurkat细胞为材料,以IL-3基因5′侧翼含κB样位点的序列为探针,考证NF-κB是否参与IL-3基因表达的调节。结果表明:①在以PHA/PMA刺激及未刺... 应用凝胶迁移率分析法,以静止与激活的正常人原代T淋巴细胞和Jurkat细胞为材料,以IL-3基因5′侧翼含κB样位点的序列为探针,考证NF-κB是否参与IL-3基因表达的调节。结果表明:①在以PHA/PMA刺激及未刺激的Jurkat细胞和正常人T淋巴细胞中,都存在与这一序列结合的蛋白带,其中在刺激后的正常人T淋巴细胞中出现了一条新的蛋白结合带,而Jurkat细胞中则没有新带型出现,但刺激后的结合带强度显著高于未刺激组。②正常人T淋巴细胞和Jurkat细胞中,与此序列结合的蛋白带型是不相同的。③当用150倍克分子过量的未标记探针与32P标记的探针竞争结合核蛋白因子后,从凝胶迁移中清楚地看到Jurkat细胞和正常人T淋巴细胞中的蛋白带都特异地消失。以上结果提示:①IL-3基因5′侧翼的κB样序列的确存在与之特异结合的蛋白因子,且该蛋白因子的表达是可诱导的。②正常细胞和肿瘤细胞中,与κB样序列结合的转录因子是不完全相同的。从而提示:在正常细胞和肿瘤细胞中。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 白细胞介素3 基因表达 转录因子
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小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响 被引量:2
16
作者 王艳艳 李茂全 +1 位作者 宋敏 白云 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期805-811,共7页
目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用。方法通过RT- PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋... 目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用。方法通过RT- PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化,细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况。体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后,3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-V/PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况,ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平。结果小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达,其蛋白表达率由23%增加为94%;原代小胶质细胞活化后表达OX40L。小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌,抑制了T细胞凋亡。结论小胶质细胞活化后表达OX40L分子,OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖,抑制其凋亡,从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用。有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制,进一步认识OX40L的表达及功能。 展开更多
关键词 小胶质细胞 T淋巴细胞 共刺激分子 OX40L 中枢神经系统
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细胞因子受体与分子模拟现象 被引量:1
17
作者 王洪海 乔雯 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期184-186,共3页
本文介绍了细胞团子受体与病毒蛋白成分的同源现象,揭示了病毒非法复制的基因产物模拟了宿主免疫系统的关键成分-细胞因子受体。因此模拟病毒基因可为处理炎症和病毒感染的治疗开辟新的途径。
关键词 细胞因子受体 分子模拟现象
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挥发性有机物对小鼠脑组织形态学和氨基酸类递质的影响 被引量:2
18
作者 张焕珠 宋伟民 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期269-272,共4页
目的通过挥发性有机物(VOCs)对小鼠脑组织中递质类氨基酸含量的影响,探讨VOCs对小鼠神经系统的毒性。方法采用静式吸入染毒,小鼠亚急性暴露于挥发性有机物,设置对照、低(甲醛1.5mg/m3;VOCs20mg/m3)、中(甲醛4.5mg/m3;VOCs60mg/m3)、高... 目的通过挥发性有机物(VOCs)对小鼠脑组织中递质类氨基酸含量的影响,探讨VOCs对小鼠神经系统的毒性。方法采用静式吸入染毒,小鼠亚急性暴露于挥发性有机物,设置对照、低(甲醛1.5mg/m3;VOCs20mg/m3)、中(甲醛4.5mg/m3;VOCs60mg/m3)、高浓度暴露组(甲醛13.5mg/m3;VOCs180mg/m3),染毒结束后,做脑组织常规病理,采用高效液相色谱法测定小鼠脑组织(皮质和海马)氨基酸类递质[包括兴奋性氨基酸类递质谷氨酸(Glu)、门冬氨酸(ASP);抑制性氨基酸类递质氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)]含量。结果暴露组小鼠脑组织皮质和海马兴奋性氨基酸类递质含量随染毒浓度增加而降低,而抑制性氨基酸类递质含量随染毒浓度增加而增加。脑组织病理表现为VOCs暴露组神经元变性坏死。结论挥发性有机物引起小鼠学习记忆能力下降和麻醉作用。 展开更多
关键词 挥发性有机物 抑制性氨基酸类递质 兴奋性氨基酸类递质 学习记忆 氨基酸
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干细胞基础研究进展 被引量:2
19
作者 唐佩弦 《医学研究杂志》 2007年第6期4-8,共5页
关键词 细胞基础 成体干细胞 诱导分化 细胞因子 组织细胞 造血细胞 脂肪组织 体组织
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Dynavax公司的改良乙肝疫苗有希望
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作者 景新(摘) 《国外药讯》 2007年第7期38-39,共2页
Dynavax Technologies公司的研究性乙型肝炎疫苗Heplisav(Ⅰ)在一项有较难产生免疫力的中老年人参加的Ⅲ期试验中显示,伴有比用GlaxoSmithKline公司的EngerixB(Ⅱ)更大的血清保护率。
关键词 Dynavax公司 GlaxoSmithKline公司 乙肝疫苗 改良 乙型肝炎疫苗 Ⅲ期试验 中老年 免疫力
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