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APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用 被引量：2
1
作者 温丽君 滕军放 +3 位作者 赵莘瑜 崔月梅 巴庆华 张爱玲 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期520-523,共4页
目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以... 目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以上寡核苷酸序列退火后连入pFU-GW-iRNA质粒,酶切和测序鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,产生具有感染能力的慢病毒颗粒,并感染SH-SY5Y细胞,分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组;应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695mRNA的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒;各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒;感染SH-SY5Y细胞72h后,不同组别APP695mRNA表达水平不同(F=554.442,P<0.001),APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论:成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体,该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695mRNA的表达。 展开更多
关键词 SIRNA 慢病毒载体 APP695基因
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狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代 被引量：4
2
作者 何丽芳 陈敏 +8 位作者 张益丽 任正勇 胡超 高显专 赵振鑫 马万 李兵 白梅 马波 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期1-4,共4页
目的：建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞，连续传代，检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Wal... 目的：建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞，连续传代，检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞，通过连续带毒传代至第7代，病毒滴度可达6．78lgLD50/mL，并在第10～15代内滴度维持在7．0lgLD50/mL以上，15～30代滴度稳定在7．0lgLD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDCP15制备的疫苗原液，各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部（2010版）的要求，疫苗效力在6．0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。 展开更多
关键词 狂犬病毒CTN-1V株 人胚肺二倍体细胞 适应 传代 狂犬病疫苗
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HIV-Tat蛋白诱导神经细胞自噬的研究进展 被引量：1
3
作者 李娟 杨根梦 +3 位作者 仝品芬 李桢 曾晓锋 代解杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期269-273,共5页
HIV-Tat蛋白是由HIV-1病毒感染细胞后分泌的反式转录激活因子,在HIV感染神经损害中发挥重要作用,是引起艾滋病相关脑病的重要致病因子。自噬即自我吞噬,主要作用是供给机体营养,但异常自噬则引起细胞死亡。HIV-Tat蛋白可以诱导神经细胞... HIV-Tat蛋白是由HIV-1病毒感染细胞后分泌的反式转录激活因子,在HIV感染神经损害中发挥重要作用,是引起艾滋病相关脑病的重要致病因子。自噬即自我吞噬,主要作用是供给机体营养,但异常自噬则引起细胞死亡。HIV-Tat蛋白可以诱导神经细胞自噬,从而使细胞死亡,但引起自噬的机制及信号转导通路不清楚。本文主要从HIV-Tat蛋白诱导神经细胞自噬的机制、信号转导通路等方面进行综述,旨在为进一步研究HIV-Tat蛋白与细胞自噬的关系及寻找新的治疗药物靶点提供参考。 展开更多
关键词 HIV-Tat蛋白 细胞自噬 调节机制 信号转导通路 HIV
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辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒肺炎Toll样受体2表达的影响 被引量：3
4
作者 孙思 陈玉玲 +2 位作者 左丽娜 张文辉 乔月华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1886-1890,共5页
目的:观察辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎小鼠肺组织Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)、干扰素γ(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响,并探讨辛伐他汀干预MCMV肺炎的可能机制。方法:将40只6~8周龄BALB/c小鼠随机... 目的:观察辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎小鼠肺组织Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)、干扰素γ(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响,并探讨辛伐他汀干预MCMV肺炎的可能机制。方法:将40只6~8周龄BALB/c小鼠随机分成5组:正常对照(NC)组、MCMV感染组和辛伐他汀干预(SMV1、SMV2和SMV3)组。SMV1、SMV2和SMV3组分别在腹腔注射MCMV前7 d、与MCMV同时和MCMV感染后3 d给予辛伐他汀(50 mg·kg^(-1)·d^(-1),均连续给药7 d)灌胃,NC组及MCMV组分别予以同体积的生理盐水灌胃。HE染色观察小鼠肺组织的病理改变,real-time PCR检测MCMV DNA的变化,免疫组化和Western blot检测肺组织中TLR-2的表达,ELISA检测肺组织中IFN-γ和MCP-1的变化。结果:与NC组相比,MCMV组肺组织病理染色显示肺泡间质水肿,肺泡壁增宽,内可见大量炎性细胞浸润;肺组织中TLR-2的表达增加,MCMV DNA含量升高,肺组织中炎症因子IFN-γ和MCP-1明显增多(P<0.05)。辛伐他汀干预后,与MCMV组相比,肺组织病理改变较前减轻,TLR-2的表达下降(P<0.05),MCMV DNA含量降低(P<0.05),炎性因子IFN-γ和MCP-1明显下降(P<0.05),且SMV1组TLR-2的表达量及MCMV DNA含量下降较SMV2和SMV3组更明显(P<0.05),而SMV2和SMV3两组相比差异无统计学显著性。结论:辛伐他汀干预通过下调TLR-2信号通路而降低TLR-2的表达,减少IFN-γ和MCP-1的分泌,并抑制MCMV DNA的复制,从而使肺组织的病理损害得以减轻;且提前给予辛伐他汀干预对预防MCMV的感染及减轻炎症反应具有重要作用。 展开更多
关键词 辛伐他汀 巨细胞病毒 TOLL样受体2 干扰素Γ 单核细胞趋化蛋白1
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MicroRNA-409-3p通过靶向ZEB1促进HCMV感染的胶质瘤细胞迁移的机制研究 被引量：1
5
作者 余波 张丙旭 +3 位作者 钟文静 王斌 钱冬萌 胡明 《青岛大学学报（自然科学版）》 CAS 2021年第3期56-62,共7页
近年来的临床研究显示人巨细胞病毒(HCMV)与神经胶质瘤关系密切,但HCMV促进胶质瘤进展的机制仍未阐明,而microRNA(miRNA)在神经胶质瘤中被检测到异常表达,因此提出潜伏感染的HCMV会通过调节宿主细胞miRNA从而影响神经胶质瘤发生发展的... 近年来的临床研究显示人巨细胞病毒(HCMV)与神经胶质瘤关系密切,但HCMV促进胶质瘤进展的机制仍未阐明,而microRNA(miRNA)在神经胶质瘤中被检测到异常表达,因此提出潜伏感染的HCMV会通过调节宿主细胞miRNA从而影响神经胶质瘤发生发展的假设。首先通过转录组分析和细胞实验,证实miR-409-3p在HCMV感染后显著下调。生物信息学预测显示锌指结合蛋白1(ZEB1)为其下游靶基因。miR-409-3p过表达后的细胞划痕实验以及Transwell迁移实验证实,miR-409-3p的过表达会导致ZEB1下调并抑制胶质瘤U87细胞迁移,而外源性过表达ZEB1可恢复U87细胞迁移能力。研究结果表明,潜伏感染的HCMV能够通过下调宿主细胞中miR-409-3p,从而上调ZEB1表达,促进神经胶质瘤细胞迁移。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 microRNA-409-3p ZEB1 胶质瘤
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济南市未婚育的HIV阳性男男性行为者的婚育意愿及影响因素 被引量：5
6
作者 庾泳 蔡慧玲 +2 位作者 李辉 肖富群 黎嘉宏 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1024-1029,共6页
目的了解未婚育HIV阳性MSM的婚育意愿现状及其影响因素。方法采用横断面设计,对济南市市中区865名未婚育的HIV阳性MSM进行问卷调查,收集其社会人口学资料及其他一般特征、病耻感、婚姻态度、婚育意愿等信息,采用二分类非条件Logistic回... 目的了解未婚育HIV阳性MSM的婚育意愿现状及其影响因素。方法采用横断面设计,对济南市市中区865名未婚育的HIV阳性MSM进行问卷调查,收集其社会人口学资料及其他一般特征、病耻感、婚姻态度、婚育意愿等信息,采用二分类非条件Logistic回归模型分析其婚育意愿的影响因素。结果45.9%(397/865)的HIV阳性MSM可能或肯定要结婚,平均期望结婚年龄为(32.6±4.4)岁,54.6%(472/865)可能或肯定要生育,平均期望生育年龄为(35.0±4.5)岁。多因素Logistic回归结果表明:年龄≥32岁(OR=2.21,95%CI:1.58~3.09)、农村户籍(OR=1.54,95%CI:1.09~2.19)、独生子女(OR=1.78,95%CI:1.28~2.48)、受教育程度为大学本科以下(OR=1.79,95%CI:1.28~2.50)、双性恋(OR=1.67,95%CI:1.13~2.46)、近12个月曾与女性性交(OR=1.96,95%CI:1.14~3.36)、未将HIV阳性结果告知家人(OR=1.45,95%CI:1.02~2.06)、未患有梅毒(OR=1.66,95%CI:1.07~2.58)、除HIV阳性外无其他慢性病(OR=3.28,95%CI:2.33~4.62)、低病耻感(OR=2.83,95%CI:1.51~5.31)/(OR=2.41,95%CI:1.28~4.55)、对婚姻态度积极(OR=3.08,95%CI:2.26~4.22)的HIV阳性MSM婚姻意愿更强;年龄≥32岁(OR=2.56,95%CI:1.85~3.56)、农村户籍(OR=1.74,95%CI:1.24~2.45)、独生子女(OR=2.03,95%CI:1.47~2.81)、受教育程度为大学本科以下(OR=1.57,95%CI:1.14~2.15)、月收入≥4000元(OR=1.96,95%CI:1.43~2.68)、双性恋(OR=1.91,95%CI:1.30~2.81)、未将HIV阳性结果告知家人(OR=2.07,95%CI:1.48~2.89)、未患有梅毒(OR=1.60,95%CI:1.06~2.41)、HIV阳性诊断时间≥32个月(OR=1.54,95%CI:1.12~2.12)、除HIV阳性外无其他慢性病(OR=1.46,95%CI:1.07~2.01)的HIV阳性MSM生育意愿更强。结论有较高比例未婚育的HIV阳性MSM仍可能或肯定要婚育,那些年龄较大、农村户籍、独生子女、受教育程度较低、双性恋、未将HIV阳性结果告知家人、未患有梅毒、除HIV阳性外无其他慢性病的HIV阳性MSM婚育的可能性更高,亟需进一步研究促进其合理、合法实现婚育的� 展开更多
关键词 男男性行为者 艾滋病 婚姻意愿 生育意愿
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艾诺韦林联合替诺福韦、拉米夫定在初治HIV/AIDS患者的疗效及安全性分析
7
作者 马淑静 符燕华 +5 位作者 谢小馨 李军 甘霖 杨小燕 孔令弘 龙海 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期872-876,共5页
目的评估TDF+3TC+艾诺韦林(ANV)方案治疗初治HIV/AIDS患者在临床中的有效性和安全性。方法前瞻性收集从2022年2月至2022年8月在贵阳市公共卫生中心使用TDF+3TC+ANV方案作为初始治疗艾滋病患者的临床数据,截止收集日期为2023年3月1日,描... 目的评估TDF+3TC+艾诺韦林(ANV)方案治疗初治HIV/AIDS患者在临床中的有效性和安全性。方法前瞻性收集从2022年2月至2022年8月在贵阳市公共卫生中心使用TDF+3TC+ANV方案作为初始治疗艾滋病患者的临床数据,截止收集日期为2023年3月1日,描述患者一般特征,且对治疗前后的病毒载量、CD4细胞、CD4/CD8细胞比值、体重、肝肾功能以及血脂等指标进行比较分析。结果共纳入患者148例,意向性分析(ITT)结果病毒学抑制率为69.6%(103/148),符合方案集分析(PP)结果病毒学抑制率为83.7%(103/123),123例患者治疗24周CD4细胞水平为346.0(223.0,484.0)个/μL明显高于治疗前的317.0(142.0,414.0)个/μL(P<0.001)、HDL-C较基线升高(0.9 vs.1.1 mmoL/L,P<0.001)、血清肌酐较基线升高(67.0 vs.71.0μmoI/L,P=0.023),AST从治疗前的25.0(20.0,34.0)U/L降至23.0(18.0,28.0)U/L(P=0.014),且差异有统计学意义(P均<0.05),其余指标较治疗前变化差异无统计学意义(P均>0.05)。治疗24周后,高密度脂蛋白和肝功能异常的患者比例较基线减少,其差异有统计学意义(P均<0.05),其余数值变化差异无统计学意义(P均>0.05)。药物相关不良事件的发生率为6.8%(10/148),无不良反应导致患者服药期间停用TDF+3TC+ANV。结论TDF+3TC+ANV治疗初治HIV/AIDS患者的抗病毒效果好,对免疫功能恢复有积极作用;肝肾安全性良好,且对血脂无不良影响。 展开更多
关键词 艾诺韦林 艾滋病 疗效 安全性
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实时定量RT-PCR检测博尔纳病病毒方法的建立 被引量：2
8
作者 钱钧 包丽丽 +6 位作者 贾丽娜 李小光 佟雷 宋武琦 翟爱霞 李玉军 张凤民 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第4期293-295,共3页
目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法。方法设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的... 目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法。方法设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的特异性和敏感性检测。结果建立了特异检测BDV RNA的实时定量RT-PCR技术,并且可以检测到感染细胞中1个拷贝以上BDV RNA。结论本技术可以直接用于BDV感染的检测和定量分析。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 逆转录聚合酶链反应 实时PCR
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鞘内注射一代和三代腺病毒载体免疫反应的比较 被引量：2
9
作者 裴树俊 徐学武 +4 位作者 俞卫锋 缪雪绒 吕浩 吴刚 何焱 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期58-61,共4页
目的:比较鞘内注射第一代与第三代腺病毒载体后引起免疫反应的差异。方法:SD大鼠随机分为对照组、第一代腺病毒载体(Ad-NEP)组、第三代腺病毒载体(HDAd-NEP)组。各组在注射病毒或生理盐水后不同时间点,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、Ig... 目的:比较鞘内注射第一代与第三代腺病毒载体后引起免疫反应的差异。方法:SD大鼠随机分为对照组、第一代腺病毒载体(Ad-NEP)组、第三代腺病毒载体(HDAd-NEP)组。各组在注射病毒或生理盐水后不同时间点,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、IgG的浓度及脾脏中CD80表达情况。结果:各项检测指标在病毒或生理盐水注射前(0d),均无统计学差异;IL-2、TNF-α、IgG等在注射后同一时间点,Ad-NEP组均高于HDAd-NEP组(P<0.05),且两组均高于对照组(P<0.01);注射后1d、3d,Ad-NEP组的IL-6水平显著高于HDAd-NEP组(P<0.05),且两组均高于对照组(P<0.01);在注射后7d,Ad-NEP组CD80表达水平高于HDAd-NEP组(P<0.05),两组均高于对照组(P<0.01)。结论:第三代腺病毒载体也能引起一定程度的免疫反应,但第三代腺病毒载体引起的免疫反应要较第一代腺病毒载体引起的免疫反应弱。 展开更多
关键词 鞘内注射 腺病毒 第一代 第三代 免疫反应
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病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ在毕赤酵母中的表达及其抗HIV-1活性
10
作者 莫雪梅 孙晗笑 +2 位作者 贾忠伟 李秀英 张光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期629-633,共5页
目的在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性。方法通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-... 目的在毕赤酵母中表达病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ(Viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ),并检测其抗HIV-1活性。方法通过PCR技术从质粒pQE-vMIP-Ⅱ中扩增vMIP-Ⅱ基因,插入酵母表达载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ,转化毕赤酵母菌X33,甲醇诱导表达。表达产物经镍离子亲和层析和分子筛层析纯化后,进行Western blot鉴定,并检测重组vMIP-Ⅱ蛋白对HIV-1诱导的细胞合胞体形成的抑制作用。结果重组表达质粒pPICZaA-vMIP-Ⅱ经酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组vMIP-Ⅱ蛋白的相对分子质量约为8 500,以分泌形式表达于重组酵母菌的发酵上清中;纯化的重组蛋白纯度达97.3%,且可与HRP标记的vMIP-Ⅱ多克隆抗体发生反应;重组vMIP-Ⅱ蛋白组的合胞体数目明显少于阳性对照组(P﹤0.05),其IC50值为1.35 ng/ml。结论已成功在毕赤酵母中表达了重组vMIP-Ⅱ蛋白,其具有较强的抑制HIV-1的活性。 展开更多
关键词 病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ 毕赤酵母 HIV-1
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HIV-1临床株SC42无感染性细胞-细胞融合模型的构建 被引量：2
11
作者 石哲芳 魏雪玲 刘奇 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第8期892-895,900,共5页
目的构建一种无感染性、可视化,用于检测HIV-1进入抑制剂在临床株SC42上的抑制活性的HIV细胞-细胞融合模型。方法将HIV-1 SC42 env基因插入质粒pAAV-IRES-EGFP,获得可同时且分别表达HIV-1 SC42 env及GFP的真核表达质粒,经过转染293T细胞... 目的构建一种无感染性、可视化,用于检测HIV-1进入抑制剂在临床株SC42上的抑制活性的HIV细胞-细胞融合模型。方法将HIV-1 SC42 env基因插入质粒pAAV-IRES-EGFP,获得可同时且分别表达HIV-1 SC42 env及GFP的真核表达质粒,经过转染293T细胞,使之同时表达这两种蛋白(293T/SC42/EGFP),作为模拟HIV病毒的效应细胞与靶细胞TZM-b1共同培养,观察细胞融合情况及合胞体的形成。使用经典HIV-1进入抑制剂C34和T1144检测该细胞融合模型的效果。结果效应细胞293T/SC42/EGFP和靶细胞TZM-b1细胞混合2 h后,在荧光显微镜下可见明显的细胞融合现象;24 h后可形成合胞体。HIV-1进入抑制剂C34、T1144能够抑制细胞融合,其IC分别为(600±6.22)nmol/L和(44±5.88)nmol/L。结论成功构建了HIV-1进入抑制剂药物检测筛选模型。该模型的构建无需在P3生物安全实验室完成,操作简单、方便且无感染性。 展开更多
关键词 HIV-1 SC42 ENV 进入抑制剂 细胞-细胞融合
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单纯疱疹病毒体外诱导特异性抗体应答的实验研究
12
作者 季明春 周瑶玺 +1 位作者 姚堃 童鲲 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1994年第1期41-44,共4页
用灭活的单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ１）为致敏原，体外诱导成人外周血淋巴细胞产生特异性抗体应答，特异性抗体诱生水平与血清抗体无相关性（Ｒ＝０．４５，Ｐ＞０．０５），抗体类型为ＩｇＧ。同法... 用灭活的单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓ，ＨＳＶ１）为致敏原，体外诱导成人外周血淋巴细胞产生特异性抗体应答，特异性抗体诱生水平与血清抗体无相关性（Ｒ＝０．４５，Ｐ＞０．０５），抗体类型为ＩｇＧ。同法致敬新生儿淋巴细胞则不能诱生任何类型的特异抗体，表明此体外抗体应答属继发性免疫应答。特异性抗体应答有明显的ＨＳＶ１抗原剂量依赖性，且需要Ｔ、Ｂ细胞的相互作用。ＨＳＶ１体外致敏的实验研究，为探讨正常和疾病状态下体外特异性抗体应答和免疫调节提供一个有用的实验模型。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 抗体 免疫应答
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EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定 被引量：7
13
作者 朱振宇 严世荣 +2 位作者 黄迪 陈尚武 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 1995年第4期5-8,共4页
根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比... 根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 克隆 分子 DNA酶基因 EB病毒
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广东博罗县2001～2006年狂犬病流行病学分析
14
作者 杨科明 邓寿平 曾文辉 《中国热带医学》 CAS 2007年第8期1414-1415,共2页
目的 探讨博罗县狂犬痛流行特点和发病因素,进一步做好狂犬病防治工作.方法 收集2001～2006年6年来狂犬病疫情监测资料,采用流行病学分析方法,分析病例的分布、被伤情况及防治情况等.结果 2001～2006年,全县共报告病例41例.病例主要分... 目的 探讨博罗县狂犬痛流行特点和发病因素,进一步做好狂犬病防治工作.方法 收集2001～2006年6年来狂犬病疫情监测资料,采用流行病学分析方法,分析病例的分布、被伤情况及防治情况等.结果 2001～2006年,全县共报告病例41例.病例主要分布在博罗县西部一带,男性发病占75.6%,12岁以下儿童占31.7%,发病者主要为农民和农村儿童,季节性分布不明显,发病者以Ⅲ度咬伤占了较大部分,绝大部分发病者受伤后对伤口未作规范有效的消毒处理,其中37人未进行狂犬疫苗注射,所有人均未进行抗狂犬病免疫血清或免疫球蛋白注射.结论 养犬数增加,犬的免疫接种率低,狂犬病防治知识在农村地区宣传不深入,伤后处理不及时、不规范,疫苗质量及管理把关不严等是博罗县狂犬病发病率回升的主要原因.因此,加大以上各方面的管理是防制狂犬病的有效措施. 展开更多
关键词 狂犬病 流行病学分析
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湖北省未经抗病毒治疗的HIV-1感染者的耐药基因变异分析 被引量：5
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作者 汤恒 占发先 +3 位作者 彭国平 陈慧萍 彭庭海 褚小刚 《中国热带医学》 CAS 2007年第9期1505-1507,共3页
目的了解湖北省部分地区未经抗病毒治疗的HIV感染者的耐药基因变异情况。方法采集HIV-1感染者抗凝全血,提取血浆病毒RNA,用巢式PCR方法(Nested polymerase chain reaction,nested-PCR)扩增HIV-1 pol区基因片段的核酸序列,并进行序列测... 目的了解湖北省部分地区未经抗病毒治疗的HIV感染者的耐药基因变异情况。方法采集HIV-1感染者抗凝全血,提取血浆病毒RNA,用巢式PCR方法(Nested polymerase chain reaction,nested-PCR)扩增HIV-1 pol区基因片段的核酸序列,并进行序列测定及耐药基因型分析。结果135份样本中有115份扩增出pol区基因并进行序列测定。在蛋白酶基因上检测到的基因突变有:L63ASP(99.13%),A71TV(32.18%),V77IM(93.04%),I93L(90.43%),L10I(1.74%),K20EMR(3.48%),L24V(0.87%),V32AE(1.74%),M36I(2.61%),I47M(0.87%);逆转录酶上针对核苷类逆转录酶抑制剂的突变有:E44K(0.87%),T215S(0.87%);针对非核苷类逆转录酶抑制剂的突变有:K103INR(3.48%),V106I(1.74%),G190AR(1.74%)。显示115份样本中对NNRTIs的高度耐药突变出现2例,而针对PIs和NRTIs没有出现中度以上的耐药突变。结论湖北省未经抗病毒治疗的HIV感染者多数对现有的免费抗病毒药物敏感,但也发现有少数耐药基因的存在。应加强用药的科学性和抗病毒治疗用药的监管。 展开更多
关键词 HIV-1 耐药变异 高效抗逆转录病毒治疗
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狂犬病毒3aG株糖蛋白基因克隆及真核表达载体的构建 被引量：1
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作者 张海 李六金 +4 位作者 施新猷 娄清林 李秦 姜焕宏 赵世君 《第四军医大学学报》 2000年第7期900-902,共3页
目的　构建含狂犬病毒 3a G株糖蛋白的重组质粒p CI- neorab G,为进一步表达及 DNA免疫做准备 .方法　从感染了狂犬病毒 3a G株的鼠脑组织中提取总 RNA进行 RT-PCR,扩增出编码糖蛋白的基因片段 ,重组入 p UC19克隆载体 .再将 p UC19rab ... 目的　构建含狂犬病毒 3a G株糖蛋白的重组质粒p CI- neorab G,为进一步表达及 DNA免疫做准备 .方法　从感染了狂犬病毒 3a G株的鼠脑组织中提取总 RNA进行 RT-PCR,扩增出编码糖蛋白的基因片段 ,重组入 p UC19克隆载体 .再将 p UC19rab G中的糖蛋白基因片段亚克隆入 p CI- neo真核表达载体 .结果　从 3a G株基因组中扩增出特异的糖蛋白基因片段 ,克隆成功 p UC19rab G;经亚克隆 ,筛选鉴定获得了 p CI- neorab G 重组质粒 .结论　构建成功狂犬病毒p U C19rab G重组质粒 ,亚克隆成功 p CI- neorab G重组质粒 ,为下一步表达及 展开更多
关键词 狂犬病毒 RT-PCR 3aG株 糖蛋白 基因克隆
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某医院就诊女性人群HPV感染率及亚型分析 被引量：10
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作者 张鸢 韩一栩 +2 位作者 周小飞 陈琨 张若 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第19期2996-2999,共4页
目的探讨某医院就诊女性人群中人乳头瘤病毒(HPV)感染率及亚型情况。方法回顾性分析2014年1月-2016年12月于医院接受HPV感染检测的6 438名患者的临床资料,按照患者的年龄阶段分为五组,其中≤30岁为A组,共1 280例,31～40岁为B组,共1 287... 目的探讨某医院就诊女性人群中人乳头瘤病毒(HPV)感染率及亚型情况。方法回顾性分析2014年1月-2016年12月于医院接受HPV感染检测的6 438名患者的临床资料,按照患者的年龄阶段分为五组,其中≤30岁为A组,共1 280例,31～40岁为B组,共1 287例,41～50岁为C组,共1 293例,51～60岁为D组,共1 286例,61～70岁为E组,共1 292例,分析五组患者HPV感染率及不同亚型分布情况。结果 HPV检测结果为阳性患者1 081例,阳性率为16.79%,高危型HPV检出767例,低危型HPV检出155例,不确定型HPV共检出159例;在高危型HPV中,以HPV-16,HPV-52,HPV-58,HPV-18,HPV-51五种亚型为主;高危型,低危型和不确定型HPV阳性率分别为11.91%(767/6 438)、2.41%(155/6 438)、2.47%(159/6 438);各组患者之间的HPV阳性率,差异均有统计学意义(P<0.001);A组患者在各项目中的数据均高于其他组,E组患者在各项目中的数据均低于其他组(P<0.05),随着患者年龄的增加,HPV感染阳性率,高危型HPV阳性率和低危型HPV阳性率逐渐降低(P<0.05)。结论该医院就诊女性人群感染HPV以高危型为主,30岁以下的人群各型HPV的感染率均较高,临床应采取具有针对性的控制措施,对于该人群宫颈癌的防控效果具有重要的意义。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 生殖系统 感染 防控
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SEN病毒研究概况
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作者 陈泓强 罗红 《医学信息（医学与计算机应用）》 2002年第11期663-663,共1页
关键词 传播途径 血液传播 SEN病毒 研究概况
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扎伊尔埃博拉病毒糖蛋白泛MHC Ⅱ限制性表位预测及验证
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作者 刘洋 孙昊 +5 位作者 陆振华 兰明福 许家豪 孙报增 姜东伯 杨琨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期308-314,共7页
目的生物信息学预测获得埃博拉病毒(EBOV)糖蛋白泛主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)限制性优势表位,分析其特征并筛选鉴定可用于疫苗研制的候选对象。方法通过IEDB分析预测EBOV糖蛋白的优势表位,并对优势表位进行聚类分析,保守性分析和分... 目的生物信息学预测获得埃博拉病毒(EBOV)糖蛋白泛主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)限制性优势表位,分析其特征并筛选鉴定可用于疫苗研制的候选对象。方法通过IEDB分析预测EBOV糖蛋白的优势表位,并对优势表位进行聚类分析,保守性分析和分子对接。同时,利用编码糖蛋白DNA的质粒pVAX-GP免疫小鼠,酶联免疫斑点试验(ELISpot)验证预测获得的表位。结果在构成人群覆盖率达99%的人类白细胞抗原Ⅱ(HLAⅡ)超家族限制性15表位肽预测中筛选获得19个优势表位,H-2筛选获得13个优势表位。ELISpot结果显示pVAX-GP可诱导小鼠脾细胞产生针对合成优势表位的细胞免疫反应,其中表位LFLRATTELRTFSIL和GYYSTTIRYQATGFG在C3H小鼠体内具有显著激活细胞免疫反应的效果。保守性分析结果中存在种间和种内均保守的优势表位,不存在种内不保守而种间保守的优势表位。分子对接显示实验鉴定的两条优势表位可在人HLAⅡ类超家族分子中均可获得良好的对接分数,进一步肯定其在人群免疫中应用的可行性。结论多肽LFLRATTELRTFSIL和GYYSTTIRYQATGFG可作为EBOV表位疫苗的候选表位。 展开更多
关键词 扎伊尔埃博拉病毒(EBOV) 泛主要组织相溶性复合体Ⅱ(pan-MHCⅡ)限制性表位 表位预测 保守性分析 分子对接
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病毒感染中细胞自噬研究进展 被引量：5
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作者 张林琳 谢正德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期974-982,共9页
细胞自噬是一种依赖于溶酶体的细胞内降解途径,用于细胞维持内环境的稳态。自噬广泛存在于真核细胞的生理、病理过程中。研究发现自噬与病毒之间的相互作用是一个复杂且多向化的过程,一方面自噬能够参与机体免疫应答、发挥抗病毒效应;... 细胞自噬是一种依赖于溶酶体的细胞内降解途径,用于细胞维持内环境的稳态。自噬广泛存在于真核细胞的生理、病理过程中。研究发现自噬与病毒之间的相互作用是一个复杂且多向化的过程,一方面自噬能够参与机体免疫应答、发挥抗病毒效应;另一方面,细胞的自噬机制也可被病毒操纵,以利于其自身复制。本文对近年来细胞自噬与病毒感染的相互作用进展,尤其是病毒如何调控自噬以促进其复制和致病的机制加以综述。 展开更多
关键词 病毒感染 细胞自噬 固有免疫 适应性免疫
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