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含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒的构建和表达 被引量：4
1
作者 常乐 张括 +3 位作者 张瑞 谢洁红 李金明 王露楠 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期737-741,共5页
目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换... 目的:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,构建并表达含轮状病毒NSP3基因耐RNA酶的病毒样颗粒,并探讨其稳定性。方法:设计含PvuⅠ和KpnⅠ酶切位点的上、下游引物,扩增1 049 bp轮状病毒NSP3基因片段,并将包装位点-5位的U替换为C,提高与MS2衣壳蛋白作用的亲和力。用PvuⅠ和KpnⅠ双酶切扩增的目的基因和pACYC-MS2表达载体,连接获得重组载体pACYC-MS2-NSP3,转化TOP10感受态细胞后用PCR验证阳性克隆并测序。阳性克隆转化BL21(DE3)细胞后表达含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,用超声破碎、纯化获得表达产物,鉴定并讨论其稳定性。结果:成功构建pACYC-MS2-NSP3表达载体并获得了含轮状病毒NSP3基因病毒样颗粒,其可耐受DNA酶和RNA酶的降解,并在-20℃、4℃、室温25℃下10 d保持稳定。结论:通过改变MS2噬菌体衣壳蛋白RNA包装位点的亲和力,可以成功构建耐RNA酶的病毒样颗粒,本研究所构建的病毒样颗粒具有耐RNA酶的特性和良好的稳定性,为轮状病毒实时荧光定量逆转录-PCR的标准品和质控品的研究提供了一个可行的方法。 展开更多
关键词 轮状病毒属 基因 NSP3 病毒粒子 核糖核酸酶类
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两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白的表达及其致ICR小鼠腹泻的毒力比较 被引量：3
2
作者 庞伟 黄永坤 +5 位作者 孟明耀 王萍 刘建生 徐冬蕾 戚勤 侯宗柳 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期94-97,共4页
目的研究两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白139位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从2002～2004年昆明地区婴幼儿轮状病毒感染者大便样品中,通过RT-PCR,PCR扩增了22株轮状病毒株的NSP4全长基因、cDNA序列,并对cDNA序列测序,发现这些病毒... 目的研究两株Wa株人源轮状病毒NSP4蛋白139位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从2002～2004年昆明地区婴幼儿轮状病毒感染者大便样品中,通过RT-PCR,PCR扩增了22株轮状病毒株的NSP4全长基因、cDNA序列,并对cDNA序列测序,发现这些病毒株的NSP4氨基酸序列高度保守,仅在79位、139位氨基酸位点存在差异。选取139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株,在E.coli BL21中,用pGEX5X-1载体融合表达了两株病毒的86～175位氨基酸(GST-NSP4_(86-175);并酶切融合头得到两种NSP4_(86-175)蛋白,在ICR乳鼠中比较这4种不同蛋白致小鼠腹泻的差异。结果发现GST-NSP4_(86-175)蛋白毒性比NSP4_(86-175)蛋白强,而139位氨基酸不同(V/I)的两株病毒株的NSP4_(86-175)蛋白毒性没有明显的差异。结论139位氨基酸位点的变异并不影响NSP4蛋白的毒力改变。 展开更多
关键词 轮状病毒 NSP4蛋白 腹泻
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母乳轮状病毒感染与婴幼儿轮状病毒肠炎的相关性 被引量：1
3
作者 陈小红 徐元智 《包头医学》 2008年第2期93-93,共1页
目的:研究乳母感染轮状病毒(RV)与婴幼儿RV肠炎的关系。方法:采用ELISA法测定健康及确诊RV肠炎婴幼儿母亲母乳RV抗原。结果:RV肠炎婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者142例,占72.1%。健康婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者3例,占5.0%。两组比较差异... 目的:研究乳母感染轮状病毒(RV)与婴幼儿RV肠炎的关系。方法:采用ELISA法测定健康及确诊RV肠炎婴幼儿母亲母乳RV抗原。结果:RV肠炎婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者142例,占72.1%。健康婴幼儿母亲乳汁RV抗原阳性者3例,占5.0%。两组比较差异有显著性(x2=84.17,P<0.05)。结论:母亲感染RV可能通过乳汁传染给自己的婴幼儿使其罹患RV肠炎。 展开更多
关键词 轮状病毒感染 乳 人 肠炎 婴儿
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1813例腹泻患儿轮状病毒检测结果分析 被引量：7
4
作者 刘丽 陈丹 +1 位作者 吴皖 鲁艳 《中华全科医学》 2012年第3期458-459,共2页
目的了解孝感市中心医院1个月～5岁之间腹泻患儿轮状病毒(RV)的感染情况。方法采集腹泻患儿的新鲜粪便标本,采用A群轮状病毒诊断试剂盒,对该院2008～2010年住院部儿科及感染腹泻患儿的粪便标本进行A群轮状病毒的检测。结果在1813例腹泻... 目的了解孝感市中心医院1个月～5岁之间腹泻患儿轮状病毒(RV)的感染情况。方法采集腹泻患儿的新鲜粪便标本,采用A群轮状病毒诊断试剂盒,对该院2008～2010年住院部儿科及感染腹泻患儿的粪便标本进行A群轮状病毒的检测。结果在1813例腹泻的患儿粪便中检查536例RV阳性标本,阳性率为29.6%;其中秋季779例,检出RV阳性标本320例,占41.2%;冬季544例,检出RV阳性标本174例,占32%;年龄段在0～0.5岁婴幼儿感染率达到26.2%;0.5～2岁婴幼儿感染率为46.7%,随着年龄增大,轮状病毒感染率随之降低。结论 RV感染是导致婴幼儿腹泻的主要原因之一,以6个月～2岁组为A群轮状病毒的高发年龄组,每年秋冬季为感染高发期。从粪便中检测RV抗原,对婴幼儿感染性与病毒性腹泻的早期快速鉴别诊断提供了可靠依据。 展开更多
关键词 轮状病毒 腹泻 胶体金法
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