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甲状腺过氧化物酶mRNA cRNA探针的构建及意义
1
作者 陈云 朱明华 +1 位作者 周晓军 倪灿荣 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期584-588,共5页
目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA... 目的探讨甲状腺过氧化物酶(thyroperoxidase,TPO)mRNA cRNA探针的构建及原位表达的检测方法和意义。方法取甲状腺结节新鲜组织,在RT-PCR扩增TPO cDNA的基础上,构建pSPT19-TPO质粒,经HindⅢ和BamHⅠ单酶切后成线性化模板,在SP6和T7 RNA聚合酶作用下,体外转录合成地高辛标记的TPO cRNA反义和正义探针,进行TPO mRNA的原位杂交实验。结果TPO mRNA阳性杂交信号分布于甲状腺滤泡细胞的胞质,本组腺瘤2例、结节性甲状腺肿4例、瘤周甲状腺组织1例原位杂交阳性,乳头状癌2例、桥本病1例原位杂交阴性。核酸原位杂交和RT-PCR检测甲状腺组织TPO mRNA的表达,结果一致。结论成功构建甲状腺过氧化物酶mRNA的cRNA探针;检测TPO mRNA是一种较准确反映甲状腺组织TPO状态的方法,TPO mRNA的原位检测可结合组织形态学了解甲状腺滤泡细胞的功能表达状况。 展开更多
关键词 甲状腺过氧化物酶 甲状腺 CRNA探针 原位杂交
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硫氧还蛋白过氧化物酶2在人结直肠癌的表达及其对HCT116细胞增殖、迁移的作用
2
作者 陈德波 周艳峰 +3 位作者 许荣誉 王青兰 洪成业 洪志鹏 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期584-587,共4页
目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2（PRDX2）蛋白在结直肠癌、腺瘤及正常黏膜组织中的差异性表达及其与结直肠癌的生物学关系；利用RNA干扰（RNAi）技术，特异性沉默PRDX2基因的表达，观察沉默PRDX2对结直肠癌细胞HCTJ16增殖与迁移的影响... 目的探讨硫氧还蛋白过氧化物酶2（PRDX2）蛋白在结直肠癌、腺瘤及正常黏膜组织中的差异性表达及其与结直肠癌的生物学关系；利用RNA干扰（RNAi）技术，特异性沉默PRDX2基因的表达，观察沉默PRDX2对结直肠癌细胞HCTJ16增殖与迁移的影响并探讨其机制。方法采用Westernblot、免疫组织化学检测并分析PRDX2蛋白的表达与结直肠癌发生及预后的关系。构建稳定沉默PRDX2细胞株，设立阴性对照组（shContr01）和沉默PRDX2实验组（shPRDX2-F3），通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，划痕实验和Transwell小室检测体外迁移能力，WesternNot检测E-钙黏蛋白（E—cadherin）、N．钙黏蛋白（N—cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、Snail、Slug蛋白表达。结果PRDX2蛋白在结直肠癌、腺瘤和正常黏膜组织中的表达阳性率依次减低（P〈0．01）。其表达与结直肠癌的TNM分期（P〈0．01）、肿瘤分化程度（P〈0．01）有关，PRDX2蛋白阳性表达者生存率（71．90％）明显低于阴性表达者（86．28％，P〈0．05）。沉默PRDX2基因后能抑制HCTI16细胞的增殖生长；PRDX2沉默后HCT116细胞克隆数量[（69．53±5．20）个]少于空载对照组[（98．33±10．69）个，P〈0．05]；沉默PRDX2的细胞迁移能力增强，且E—cadherin蛋白表达下降，N—cadherin、Vimentiu、Snail、S1ug蛋白表达增强。结论PRDX2蛋白表达参与结直肠癌的发生、发展，并与结直肠癌的预后有关。沉默PRDX2可抑制结直肠癌细胞HCT116增殖，促进迁移，其机制可能与转录因子Snail、Slug表达有关。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白过氧化物酶2蛋白 结直肠癌 组织芯片 增殖 转移
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多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析 被引量：1
3
作者 李永光 李文卉 +5 位作者 盖文燕 姚菊霞 曲自刚 贾万忠 Radu Blaga 付宝权 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期67-70,共4页
从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希... 从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。 展开更多
关键词 多头带绦虫 脑多头蚴 硫氧还蛋白过氧化物酶 克隆 序列分析
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中国青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶表达、纯化及活性特征 被引量：1
4
作者 廖剑 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期781-786,共6页
目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下... 目的:将编码青岛文昌鱼硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)的基因克隆于原核表达载体,并通过表达获得重组的TPx蛋白。方法:将已获得的TPxcDNA片段克隆于原核表达载体pET-32a(+)M,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pET-32a(+)M-TPx。37℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组TPx蛋白再经过纯化,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白。并对重组蛋白进行活性鉴定和结构分析。结果:构建的重组质粒pET-32a(+)M-TPx在大肠杆菌中高效表达,经纯化后的重组TPx蛋白纯度可达90%以上,其单体相对分子质量为24460。重组TPx蛋白是以同源二聚体和单体混合的形式存在,在二硫苏糖醇(DTT)存在时具有还原H2O2活性和对超螺旋DNA或对硫醇基敏感蛋白的保护作用。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了重组TPx蛋白,并且证实其活性与其高级结构紧密相关。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白过氧化物酶 青岛文昌鱼 原核表达 蛋白质纯化 酶活性 结构
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三种消毒剂杀菌效果试验观察 被引量：1
5
作者 钱建东 王洪林 王小萍 《疾病控制杂志》 2005年第5期487-488,共2页
关键词 过氧化物 灭菌 消毒药
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PPARγ激动剂对妊娠期糖尿病小鼠氧化应激和炎症水平的影响 被引量：11
6
作者 徐梦 马艳玲 +4 位作者 赵奇红 胡传来 何修界 秦风云 朱梦 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期195-198,共4页
目的探究过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)激动剂对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)小鼠体内氧化应激和炎症水平的影响。方法 7周C57bl/6J小鼠建立GDM模型,选取24只... 目的探究过氧化物酶增殖体激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)激动剂对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)小鼠体内氧化应激和炎症水平的影响。方法 7周C57bl/6J小鼠建立GDM模型,选取24只随机均分:GDM模型组和罗格列酮(rosiglitazone,RSG)干预组。选12只孕鼠作空白对照组。记录受孕日期(gestation day,GD)及GD10~GD18孕鼠体重及血糖。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定血糖;放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)测血清胰岛素水平;酶联免疫吸附法测定孕鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)水平;WST-1法测定超氧化物歧化酶含量(superoxide dismutase,SOD);过氧化物酶微量测定法检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的含量。结果不同时间段的孕鼠体重(F=306.53,P<0.001),血糖(F=31.20,P<0.001)差异有统计学意义;时间与组别交互效应的影响差别均具有统计学意义(均有P<0.05)。各组孕鼠胰岛素水平差异具有统计学意义(F=6.33,P=0.009);各组孕鼠血清SOD、GSH-Px水平及炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-8)水平差异均有统计学意义(均有P<0.05)。结论 PPARγ激动剂可升高GDM小鼠血清SOD、GSH-Px水平,降低TNF-α水平,改善GDM小鼠体内氧化应激及炎症水平。 展开更多
关键词 妊娠 糖尿病 PPARΓ 氧化性应激 白细胞介素6 白细胞介素8
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CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病胰岛素抵抗研究进展 被引量：5
7
作者 焉晓乘 刘元涛 《青岛大学学报（医学版）》 CAS 2019年第2期247-249,252,共4页
糖尿病(DM)是威胁人类健康的非传染性疾病之一,我国糖尿病患病率显著增加,且发病有年轻化趋势。胰岛素抵抗(IR)与胰岛功能减退是2型糖尿病等代谢性疾病的病理基础。导致IR的病因众多,包括遗传学因素以及肥胖、药物等环境因素。细胞色素P... 糖尿病(DM)是威胁人类健康的非传染性疾病之一,我国糖尿病患病率显著增加,且发病有年轻化趋势。胰岛素抵抗(IR)与胰岛功能减退是2型糖尿病等代谢性疾病的病理基础。导致IR的病因众多,包括遗传学因素以及肥胖、药物等环境因素。细胞色素P450s表氧化酶(CYP450)与其代谢产物环氧-二十碳三烯酸(EETs)在肥胖、IR等方面发挥重要作用。本文就CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病IR的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 细胞色素P450酶系统 环氧-二十碳三烯酸 表氧化酶水解酶 肥胖 炎症 胰岛素抗药性 综述
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携带人PPARα基因高效真核表达载体的构建及其意义 被引量：5
8
作者 章涛 杨贵忠 +4 位作者 袁野 李苌清 万敬员 蒋建新 周岐新 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期413-417,共5页
目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,... 目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRES2-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα基因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论成功构建重组质粒phPPARα-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 基因克隆 真核表达
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