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新冠病毒相关蛋白TMPRSS2结构与功能的生信分析及表达载体构建 被引量：1
1
作者 徐本锦 李卓禧 +13 位作者 范蕾 李璟 严荣荣 杜淼 宣焱 门杰 陈晓聪 汤文婷 侯艳香 宋彬妤 杨娅男 刘晓梁 余骏骁 刘玲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1218-1226,共9页
目的人源TMPRSS2是一种跨膜丝氨酸蛋白酶,本文对该蛋白结构与功能进行系统生物信息学分析,优化密码子并构建原核表达载体,以探究其参与SARS-CoV-2侵染宿主细胞的分子机制。方法利用分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-TMPRSS2;采用Pro... 目的人源TMPRSS2是一种跨膜丝氨酸蛋白酶,本文对该蛋白结构与功能进行系统生物信息学分析,优化密码子并构建原核表达载体,以探究其参与SARS-CoV-2侵染宿主细胞的分子机制。方法利用分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-TMPRSS2;采用Protparam、NetPhos3.1、Blast、Clustal X2和MEGA7.0等分析工具对TMPRSS2蛋白的同源性、功能位点、亚细胞定位、三维结构和进化特点等进行生信分析。结果原核表达质粒构建正确;TMPRSS2蛋白属于中等分子量蛋白,由492个氨基酸残基构成,理论等电点为8.12,分子消光系数为118145 L·mol^(-1)·cm^(-1),半衰期30 h;TMPRSS2有15个潜在的糖基化位点,49个可能的磷酸化位点,无信号序列,是一种跨膜的亲水性蛋白。此外,该蛋白有13个潜在的B细胞表位及7个T细胞表位。二级结构分析显示,Random coil在TMPRSS2蛋白中占比最高(0.4533),其次是Extended strand(0.2520)。序列对比和进化分析显示,与人源TMPRSS2序列一致性最高且亲缘关系最近的是Pan troglodytes,其次是Gorilla。结论人源TMPRSS2蛋白在进化上保守,功能重要。本研究结果有助于揭示TMPRSS2蛋白的结构和作用机理,为新冠肺炎的诊疗提供思路,加速了靶向TMPRSS2蛋白的新型药物研发进程。 展开更多
关键词 新冠病毒 TMPRSS2 生信分析 载体构建 结构与功能 进化分析
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DKK-1在大鼠牙囊细胞体外的表达作用研究 被引量：2
2
作者 颜露 袁晓娟 +2 位作者 左婕 盛丽 刘奕杉 《口腔医学》 CAS 2019年第10期902-906,共5页
目的观察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK-1(Dickkopf-1)在牙囊细胞中的表达,探究在牙囊细胞成骨向分化形成过程中DKK-1的特异性表达机制,探讨其与牙齿萌出和颌骨生长发育的相关性。方法采用酶消化法分离培养牙囊细胞并纯化。将牙囊细... 目的观察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK-1(Dickkopf-1)在牙囊细胞中的表达,探究在牙囊细胞成骨向分化形成过程中DKK-1的特异性表达机制,探讨其与牙齿萌出和颌骨生长发育的相关性。方法采用酶消化法分离培养牙囊细胞并纯化。将牙囊细胞分为两组,对照组:普通α-MEM培养基培养,实验组:α-MEM+成骨诱导液培养。分别培养5 d后,采用免疫细胞化学法观察DKK-1的表达分布;分别培养10、20 d后采用Western Blot检测DKK-1、β-catenin、Runx2的蛋白表达水平。结果免疫组化显示DKK-1在实验组表达较对照组减弱。Western Blot检测结果示实验组Wnt通路的关键因子DKK-1条带蛋白表达明显下调,β-catenin蛋白及成骨相关蛋白Runx2的表达明显上调,培养时间越长实验结果与对照组区别越明显。结论 Wnt通路DKK-1在牙囊细胞中有表达且受成骨分化影响,体现Wnt/β-catenin通路中DKK-1的抑制作用,研究结果将为牙齿萌出和颌骨生长发育形成机制提供实验依据。 展开更多
关键词 DKK-1 牙囊细胞 WNT/Β-CATENIN 成骨细胞 破骨细胞
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晚期糖基化终产物促进血管外膜成纤维细胞迁移机制及坎地沙坦的干预作用研究
3
作者 刘亚洋 梁春 吴宗贵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期523-527,共5页
目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的影响及坎地沙坦的干预作用。方法组织贴块法培养SD大鼠的AF细胞,用Transwell小室检测AGEs对AF迁移的影响,RT-PCR及免疫印迹技术观察AGEs对AF晚期糖基化终产物受体(RAGE)... 目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的影响及坎地沙坦的干预作用。方法组织贴块法培养SD大鼠的AF细胞,用Transwell小室检测AGEs对AF迁移的影响,RT-PCR及免疫印迹技术观察AGEs对AF晚期糖基化终产物受体(RAGE)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路磷酸化的影响。结果不同浓度的AGE(50、100、150、200、300mg/L)均可从基因和蛋白水平上调RAGE的表达,且均在200mg/L时达到峰值(P<0.05)。p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂、坎地沙坦可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)刺激引起的RAGE表达(P<0.05)。AGEs可促进p38、ERK1/2、JNK的磷酸化,JNK在20min,p38、ERK1/2在30min时磷酸化达峰值(P<0.05)。p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂可分别抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化,RAGE中和抗体、坎地沙坦可抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化。不同浓度AGE(50、100、150、200、300mg/L)可促进AF细胞的迁移,该作用于200mg/L时达到峰值(P<0.05)。RAGE中和抗体、p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、坎地沙坦均可抑制AGE所致成纤维细胞的迁移(P<0.01)。结论AGEs经由RAGE影响MAPK通路而促进AF细胞迁移,坎地沙坦可通过阻断此途径抑制AF细胞迁移,这可能是其血管保护作用的机制之一。 展开更多
关键词 糖基化终产物 高级 成纤维细胞 细胞运动 丝裂原激活蛋白激酶类 坎地沙坦
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线粒体Prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中表达的变化 被引量：2
4
作者 朱金武 钱之玉 关勇彪 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期40-45,共6页
目的:研究线粒体prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中的表达变化,探讨线粒体prohib-itin蛋白在CCRF-CEM肿瘤细胞耐药发生机制中的作用。方法:提取紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞的线粒体总蛋白,对经双向电泳分离后得到的SDS-P... 目的:研究线粒体prohibitin蛋白在紫杉醇耐药的CCRF-CEM细胞中的表达变化,探讨线粒体prohib-itin蛋白在CCRF-CEM肿瘤细胞耐药发生机制中的作用。方法:提取紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞的线粒体总蛋白,对经双向电泳分离后得到的SDS-PAGE胶用ImageMasterTM2D Platinum software进行分析、比对,对胶上的蛋白点进行质谱分析,通过SWISS-PROT和NCBInr数据库鉴定蛋白的归属。结果:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中的线粒体prohibitin Protein15表达升高了68.6%(以蛋白表达的体积计)。结论:紫杉醇耐药的CCRF-CEM/taxol细胞中线粒体prohibitin表达增加。prohibitin可能通过调节线粒体的活动,对抗紫杉醇诱导的细胞凋亡,在耐药机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 多药耐药 CCRF—CEM PROHIBITIN 线粒体蛋白质组 二维电泳
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人骨骼肌肌钙蛋白C在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用 被引量：5
5
作者 刘先俊 周辉云 邓显锋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期586-590,共5页
为了探索重组人骨骼肌型肌钙蛋白C(rhTnC)的抗肿瘤作用,采用PCR技术,从人乳腺cDNA文库中获得编码TnC的cDNA序列,在大肠杆菌中进行了表达.经镍柱亲和层析纯化后,分别检测其在体外对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用与对小鼠异位移植肿瘤(S... 为了探索重组人骨骼肌型肌钙蛋白C(rhTnC)的抗肿瘤作用,采用PCR技术,从人乳腺cDNA文库中获得编码TnC的cDNA序列,在大肠杆菌中进行了表达.经镍柱亲和层析纯化后,分别检测其在体外对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用与对小鼠异位移植肿瘤(S-180)生长的抑制作用.结果表明,rhTnC在大肠杆菌中呈可溶性表达.分离纯化后的rhTnC在体外对人脐静脉内皮细胞生长呈剂量依赖性抑制(IC50为7.5μg/ml);对小鼠异位移植肿瘤的生长也有明显的抑制作用,在20mg/(kg·d)剂量下对S-180的抑制率为64.4%.以上结果说明,rhTnC可抑制血管内皮细胞生长,并具有抗肿瘤作用. 展开更多
关键词 重组人骨骼肌型肌钙蛋白C 血管内皮细胞 抗肿瘤作用
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神经营养素对牙髓干细胞神经向分化的影响 被引量：1
6
作者 薛冰 席花蕾 +3 位作者 姚丽红 徐婉秋 许晓航 王秀梅 《口腔医学》 CAS 2022年第9期846-850,共5页
牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)是一类具有高度增殖、多向分化潜能的成体干细胞,其来源丰富,具有提取较为便捷、伦理争议较小的优势。由于DPSCs具有多向分化的潜能,可以在一定条件下诱导成神经向分化,在神经损伤的修复和神... 牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)是一类具有高度增殖、多向分化潜能的成体干细胞,其来源丰富,具有提取较为便捷、伦理争议较小的优势。由于DPSCs具有多向分化的潜能,可以在一定条件下诱导成神经向分化,在神经损伤的修复和神经遗传性疾病的治疗等方面应用前景广阔。神经营养素(neurotrophin, NT)是一类能够促进轴突生长、利于神经细胞分化与存活的由神经所支配的组织或细胞产生的蛋白质分子,可以分为神经营养因子(neurotrophic factor, NTFs)家族、胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor, GDNF)家族、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)细胞因子家族、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族等,NT作为促进神经细胞分化的营养因子,也能够促进干细胞神经向分化,其对DPSCs神经向分化有一定的引导作用。该文简要介绍了NT在促进细胞神经向分化方面的作用,就NT对DPSCs神经向分化的影响和应用前景进行概述。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 神经营养素 神经向分化
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pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达
7
作者 朱金武 钱之玉 关勇彪 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期527-531,共5页
目的:摸索真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A)编码基因的合成、pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达。方法:用PCR合成eIF5A基因,将基因分别接在克隆载体pMD 18-T的EcoRⅤ多克隆位点上和真核表达载体pcDNA3.1的H... 目的:摸索真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A)编码基因的合成、pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体的构建及其在真核细胞CCRF-CEM中的表达。方法:用PCR合成eIF5A基因,将基因分别接在克隆载体pMD 18-T的EcoRⅤ多克隆位点上和真核表达载体pcDNA3.1的HindⅢ和EcoRⅠ的多克隆位点之间,构建eIF5A基因的克隆载体和真核表达载体,分别在大肠杆菌E.coliDH5α中转化并提取质粒,将真核表达载体pcDNA3.1/eIF5A的质粒提取后,用脂质体包合并转染真核细胞CCRF-CEM,用流式细胞仪对eIF5A的表达水平进行检测。结果:eIF5A在CCRF-CEM细胞中的表达水平为107.03,eIF5A在转染细胞CCRF-CEM/trans中的表达水平为114.27,表达升高。结论:本实验构建了pcDNA3.1/eIF5A真核表达载体,发现其在CCRF-CEM细胞中高表达。本实验结果将有助于探讨肿瘤治疗过程中的新靶标。 展开更多
关键词 真核细胞翻译启动因子5A(eIF5A) PCDNA3.1 克隆表达载体 真核表达载体
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骨保护素及其配体在口腔领域的研究进展 被引量：1
8
作者 郑茜聪 刘丽 《口腔医学》 CAS 2007年第2期104-106,共3页
骨保护素及其配体在骨代谢中起着重要的作用,该文主要阐述骨保护素(OPG)及其配体以及骨保护素配体的受体(RANK),讨论三者在牙槽骨骨改建的分子机制。
关键词 骨保护素 牙槽骨改建 破骨细胞 骨吸收
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铁调素及其与骨代谢的研究进展 被引量：2
9
作者 张千依 郭婧芳 +1 位作者 唐冠群 朱宪春 《口腔医学》 CAS 2015年第4期314-317,共4页
铁调素(Hepcidin)是一类调节机体铁稳态的抗菌多肽,由HAMP基因编码,大量研究表明血清中铁的含量、骨形成蛋白(BMPs)、白介素-6(IL-6)及低氧诱导因子(HIF)等可调控铁调素的表达;最新研究表明其与骨代谢相关,铁调素可通过"铁调素-铁... 铁调素(Hepcidin)是一类调节机体铁稳态的抗菌多肽,由HAMP基因编码,大量研究表明血清中铁的含量、骨形成蛋白(BMPs)、白介素-6(IL-6)及低氧诱导因子(HIF)等可调控铁调素的表达;最新研究表明其与骨代谢相关,铁调素可通过"铁调素-铁代谢-骨代谢"和"JAK/STAT"信号通路这两种途径影响骨代谢。该文就铁调素的生成机制及其在骨代谢中作用的相关研究进行综述。 展开更多
关键词 铁调素 骨代谢 骨形成蛋白 “JAK/STAT”信号通路
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