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镁毒害抑制茉莉酸信号通路增加拟南芥对南方根结线虫敏感性的研究
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作者 刘沛 王丹 胡先奇 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期220-227,共8页
【目的】研究镁毒害胁迫下拟南芥生理过程及响应南方根结线虫侵染的变化及相关分子机理。【方法】以贫营养的蛭石为培养基质,通过盆栽试验分析镁毒害胁迫(15 mmol/L MgCl2)下拟南芥叶绿素合成变化及拟南芥对南方根结线虫侵染抗/感性变化... 【目的】研究镁毒害胁迫下拟南芥生理过程及响应南方根结线虫侵染的变化及相关分子机理。【方法】以贫营养的蛭石为培养基质,通过盆栽试验分析镁毒害胁迫(15 mmol/L MgCl2)下拟南芥叶绿素合成变化及拟南芥对南方根结线虫侵染抗/感性变化;通过转录组测序策略分析镁毒害胁迫下拟南芥基因上、下调变化关系;对表达差异显著的基因进行实时荧光定量PCR验证。【结果】镁毒害胁迫下,拟南芥叶绿素合成受到显著影响,其叶片叶绿素含量均显著或极显著低于对照(P<0.05或P<0.01)。拟南芥线虫敏感性分析显示:镁毒害处理组接种线虫30 d后,根内发育形成的雌成虫数及根表形成的根结数均显著多于对照(P<0.05),表明镁毒害胁迫增加了拟南芥对南方根结线虫侵染的敏感性。转录组测序结果显示:镁毒害胁迫下,拟南芥中8个与氨基酸、碳水化合物、脂类、维生素和次级代谢产物等代谢相关的基因显著上调;下调基因中,有5个基因均属于信号转导过程,分别涉及茉莉酸生物合成通路和茉莉酸介导的防卫反应通路。实时荧光定量PCR验证表明:分别用2个内参基因校正后,各上、下调基因表达趋势一致,与转录组测序数据吻合。【结论】镁毒害胁迫干扰了拟南芥植株以叶绿素合成为代表的正常生理过程,抑制了拟南芥细胞茉莉酸生物合成和信号传导相关关键基因的表达,增加了拟南芥对南方根结线虫侵染的敏感性。镁可能是参与拟南芥中茉莉酸介导抗南方根结线虫防卫反应的重要矿质元素。 展开更多
关键词 镁毒害 拟南芥 茉莉酸信号通路 南方根结线虫
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播娘蒿DsCOR蛋白纯化、抗体制备及对冷诱导的响应 被引量：3
2
作者 杨舸 李晶 +4 位作者 吕林峰 王乐 宋玲玲 乔代蓉 曹毅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期337-340,共4页
为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)极强的抗寒特性,在大肠杆菌中重组表达已克隆的播娘蒿抗寒基因DsCOR,比较Ni亲合层析和煮沸-透析袋电洗脱蛋白纯化方法,制备纯化的DsCOR重组蛋白多克隆抗体,Western Blotting检测播娘蒿在寒冷胁迫下DsCO... 为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)极强的抗寒特性,在大肠杆菌中重组表达已克隆的播娘蒿抗寒基因DsCOR,比较Ni亲合层析和煮沸-透析袋电洗脱蛋白纯化方法,制备纯化的DsCOR重组蛋白多克隆抗体,Western Blotting检测播娘蒿在寒冷胁迫下DsCOR的表达特性.结果表明,两种纯化技术均能纯化DsCOR蛋白,透析袋电洗脱法纯化蛋白浓度为1.21mg/mL,是Ni亲和层析法纯化蛋白浓度的2倍,且经PEG8000浓缩后的蛋白总量分别为9.075mg和4.256mg;制备的DsCOR抗体效价达1:12800,Western Blotting检测显示只有经过低温冷诱导的播娘蒿DsCOR蛋白才表达,证明了DsCOR基因受低温诱导的规律. 展开更多
关键词 播娘蒿 DsCOR基因 蛋白纯化 多克隆抗体 冷诱导 抗寒性
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播娘蒿转录因子DsCBF与CRT/DRE元件的相互作用 被引量：2
3
作者 王乐 李晶 +4 位作者 曹瑜 张玲 巨艳 乔代蓉 曹毅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期609-612,共4页
CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的一种调控转录激活因子,CBF蛋白AP2结合domain可与COR基因启动子CBT/DRE元件特异性地结合,启动耐寒基因COR的表达.为研究播娘蒿DsCBF的功能,构建pET32a-DsCBF原核表达载体,... CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的一种调控转录激活因子,CBF蛋白AP2结合domain可与COR基因启动子CBT/DRE元件特异性地结合,启动耐寒基因COR的表达.为研究播娘蒿DsCBF的功能,构建pET32a-DsCBF原核表达载体,通过冻融法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍亲和层析纯化CBF蛋白.利用EMSA(Electrophoretic mobility shift assay)分析DsCBF蛋白与播娘蒿DsCOR基因的启动子上CRT/DRE元件的相互作用.EMSA结果显示,DsCBF蛋白与含有CCGAC核心序列及TATA-box和AT-TA回文结构的50bp探针结合有滞后现象,表明与DsCOR启动子上的CRT/DRE元件有特异性结合;而与仅有CCGAC的CRT/DRE核心序列的40bp探针结合则无滞后现象,表明DsCBF与蛋白结合的识别可能与TATA-box和AT-TA回文结构有关. 展开更多
关键词 播娘蒿 CBF CRT/DRE EMSA 银染
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