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不结球白菜高亲和性硝酸盐转运蛋白NRT2.2的克隆和表达分析 被引量：2
1
作者 孙菲菲 王镇 +3 位作者 李建刚 王夏 孙雪花 侯喜林 《江西农业学报》 CAS 2014年第9期6-11,共6页
以不结球白菜品种"苏州青"为材料,克隆得到了1个高亲和性硝酸盐转运蛋白基因——BcNRT2.2,该基因的全长为1593 bp,编码530个氨基酸。序列分析结果表明:BcNRT2.2基因含有AGWGNMG共识别基序,其氨基酸序列与拟南芥NRT2.2的同源性... 以不结球白菜品种"苏州青"为材料,克隆得到了1个高亲和性硝酸盐转运蛋白基因——BcNRT2.2,该基因的全长为1593 bp,编码530个氨基酸。序列分析结果表明:BcNRT2.2基因含有AGWGNMG共识别基序,其氨基酸序列与拟南芥NRT2.2的同源性为86%;其二级结构主要由α-螺旋和自由卷曲构成;预测BcNRT2.2蛋白含有12个跨膜域。实时定量PCR分析结果表明:BcNRT2.2主要在根部表达,并受高浓度硝酸盐的诱导;BcNRT2.2在原始叶片中表达量较低,但受低温、高温和干旱胁迫的诱导后而高量表达。 展开更多
关键词 不结球白菜 硝酸盐转运蛋白 克隆 表达 非生物胁迫
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cDNA微阵列实验分析中常用的统计方法 被引量：3
2
作者 吴骋 贺佳 +1 位作者 贺宪民 付旭平 《国外医学（生物医学工程分册）》 2004年第5期305-309,共5页
针对cDNA微阵列杂交实验从设计、收集样本到数据的采集、整理和分析等全过程,介绍了 如何基于统计学原理对各个过程常见的问题进行处理,并对各种方法的优缺点简要概述,为研究者有效 进行微阵列实验提供参考。
关键词 CDNA微阵列 统计方法 数据处理
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“多利”真是母体的翻版吗？
3
作者 华振鹤 《上海科学生活》 2000年第4期17-18,共2页
自从英国罗斯林研究所的科学家扬·维尔穆特在1996年7月用成年绵羊的乳腺细胞培育出一只克隆绵羊“多利”以后，世界顿时掀起了一股克隆热。许多人认为，由于遗传物质相同，克隆出来的后代必定是其母体的“翻版”。于是，有人想克... 自从英国罗斯林研究所的科学家扬·维尔穆特在1996年7月用成年绵羊的乳腺细胞培育出一只克隆绵羊“多利”以后，世界顿时掀起了一股克隆热。许多人认为，由于遗传物质相同，克隆出来的后代必定是其母体的“翻版”。于是，有人想克隆自己死去的宠物，甚至有个别科学狂人扬言要克隆出自己本人等。 展开更多
关键词 克隆绵羊 “多利” 有性生殖 无性生殖
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高浓度琼脂糖电泳分离差异显示PCR产物方法探讨 被引量：3
4
作者 张君诚 唐荣华 +1 位作者 官德义 庄伟建 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第4期37-39,共3页
荧光差异显示技术(fluorescentdifferentialdisplay,FDD)的操作成本及对仪器和试剂盒的依赖性高,限制了该技术的应用。介绍一种使用高浓度琼脂糖电泳方法显示荧光差异显示PCR扩增结果的简便方法,该方法在筛选低钙与足钙处理条件下花生... 荧光差异显示技术(fluorescentdifferentialdisplay,FDD)的操作成本及对仪器和试剂盒的依赖性高,限制了该技术的应用。介绍一种使用高浓度琼脂糖电泳方法显示荧光差异显示PCR扩增结果的简便方法,该方法在筛选低钙与足钙处理条件下花生胚胎的差异表达基因中得到了较好的结果。 展开更多
关键词 琼脂糖 差异提示 电泳 分离
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骨形态发生蛋白基因真核表达质粒的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达 被引量：1
5
作者 王海彬 刘少军 +5 位作者 樊粤光 何伟 刘武 徐传毅 姜自伟 曾意荣 《广州中医药大学学报》 CAS 2006年第6期522-525,共4页
【目的】克隆人骨形态发生蛋白(BMP4)基因,构建真核表达质粒,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达,为进一步研究以BMP4进行骨修复的基因治疗奠定基础。【方法】采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,从人的松质骨中扩增BMP4的环形脱氧核糖核酸... 【目的】克隆人骨形态发生蛋白(BMP4)基因,构建真核表达质粒,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达,为进一步研究以BMP4进行骨修复的基因治疗奠定基础。【方法】采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,从人的松质骨中扩增BMP4的环形脱氧核糖核酸(cDNA),插入pGEM-Teasy载体,测序证实后,将其亚克隆至质粒PCDNA3.1B(-)中构建BMP4真核表达载体;采用脂质体将重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,以RT-PCR和免疫组织化学方法鉴定转染细胞中BMP4基因的表达。【结果】经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,RT-PCR和免疫组化方法证明转基因CHO细胞克隆中存在人BMP4基因。【结论】成功获得了人BMP4的全长基因,且序列与已知序列高度一致。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 基因疗法 骨疾病
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抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定
6
作者 詹爱军 王新卫 王宪文 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第3期1071-1072,1085,共3页
用基因疫苗pcDNA-H9、纯化H9N2亚型AIV和重组噬菌体T4-H9HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6)、H9-02(3B1)、H9-03(3H11)、H9-04(1A4)、H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结... 用基因疫苗pcDNA-H9、纯化H9N2亚型AIV和重组噬菌体T4-H9HA免疫Balb/C小鼠,细胞融合后用HI和ELISA方法筛选出5株抗H9亚型AIV HA的特异性单克隆抗体H9-01(2E6)、H9-02(3B1)、H9-03(3H11)、H9-04(1A4)、H9-05(2G9)。各株单抗亚型测定的结果为H9-01、H9-02和H9-05均为IgG2b,H9-03为IgG1,H9-04为IgG2a,轻链的亚型均为kappa链。经特异性和与同型病毒的反应谱检测,它们均是HA特异性单克隆抗体。为进一步分析H9N2亚型AIV的结构与功能以及建立监测该亚型AIV的试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型AIV 单克隆抗体 亚型 鉴定
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CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及其生物信息学分析 被引量：1
7
作者 马新艳 《南阳师范学院学报》 CAS 2008年第12期55-58,共4页
从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic vi-rus,CMV）分离物。把该分离物接种于西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RT-PCR扩增获得CMV的外壳蛋白（cp）基因,将其... 从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic vi-rus,CMV）分离物。把该分离物接种于西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RT-PCR扩增获得CMV的外壳蛋白（cp）基因,将其克隆到pUCm-T质粒上。经序列测定和生物信息学分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸。预测该蛋白的等电点为5。12,分子量约为24kD。其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,只有香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%。根据这些分析,该CMV分离物属于亚组I。另外还对黄瓜花叶病毒外壳蛋白的高级结构作出了预测。 展开更多
关键词 CMV 中国分离物 外壳蛋白基因 序列分析 生物信息学分析
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牛催乳素cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达
8
作者 舒幼敏 史瀛仙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期288-292,共5页
从牛垂体中分离出总的mRNA,经逆转录酶及大肠杆菌DNA聚合酶合成双链cDNA,以pBR322作为克隆载体并用加G.C尾的方法进行重组,把重组质粒导入大肠杆菌中,建立了牛垂体mRNA的cDNA文库。用标记的人工合成的牛催乳素基因片段作为探针进行杂交... 从牛垂体中分离出总的mRNA,经逆转录酶及大肠杆菌DNA聚合酶合成双链cDNA,以pBR322作为克隆载体并用加G.C尾的方法进行重组,把重组质粒导入大肠杆菌中,建立了牛垂体mRNA的cDNA文库。用标记的人工合成的牛催乳素基因片段作为探针进行杂交,并从库中筛选到几个阳性克隆,经酶谱分析和DNA序列分析证明克隆中有一个含有全长的牛催乳素cDNA序列。将所获得的克隆进行'剪切',加上启动子,然后导入大肠杆菌JM 103中并在IPTG诱导下表达。用SDS-PAGE检测,证明有表达产物存在,再通过酶标测定证明该表达产物具有与天然牛催乳素相似的免疫学活性。 展开更多
关键词 CDNA 克隆 牛催乳素 大肠杆菌 催乳素 基因表达
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玉米锌转运蛋白基因ZmZIP4 cDNA的克隆和表达分析 被引量：2
9
作者 刘海军 高慧 +4 位作者 黄亚群 陈景堂 祝丽英 赵永峰 张祖新 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1077-1083,共7页
利用RT-PCR从玉米自交系178幼苗组织中分离到1个锌转运蛋白基因,命名为ZmZIP4(GenBank Num-ber:HM048832)。该基因开放阅读框(ORF)为1 161 bp,编码1条386个氨基酸残基的多肽,分子量为38.66 kD,等电点为7.5,有7个跨膜结构域。氨基酸序列... 利用RT-PCR从玉米自交系178幼苗组织中分离到1个锌转运蛋白基因,命名为ZmZIP4(GenBank Num-ber:HM048832)。该基因开放阅读框(ORF)为1 161 bp,编码1条386个氨基酸残基的多肽,分子量为38.66 kD,等电点为7.5,有7个跨膜结构域。氨基酸序列比对和进化树分析发现,ZmZIP4与水稻OsZIP4的同源性最高。亚细胞定位试验结果显示,ZmZIP4位于细胞膜上。由低锌胁迫诱导试验结果推测,ZmZIP4可能作为一个锌转运蛋白在玉米低锌胁迫中起作用。 展开更多
关键词 玉米 基因克隆 锌转运蛋白 OsZIP4 表达分析
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韩国克隆“荧光犬”
10
《中国工作犬业》 2011年第9期57-57,共1页
（首尔综合电）韩国科学家利用克隆技术,成功制造出一种会发出亮光的＂荧光犬＂,这一研究成果能够帮助人们研发治疗早老性痴呆症和帕金森症等疾病的方法。来自韩国国立首尔大学的研究小组说,这头名为＂泰根＂的雌性米格鲁猎兔犬生于200... （首尔综合电）韩国科学家利用克隆技术,成功制造出一种会发出亮光的＂荧光犬＂,这一研究成果能够帮助人们研发治疗早老性痴呆症和帕金森症等疾病的方法。来自韩国国立首尔大学的研究小组说,这头名为＂泰根＂的雌性米格鲁猎兔犬生于2009年。 展开更多
关键词 克隆技术 韩国 荧光 犬 帕金森症 研究成果 科学家 痴呆症
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乳腺免疫研究进展 被引量：8
11
作者 巢国正 陈耀星 +2 位作者 邱春红 白永平 邓泽沛 《中国畜牧兽医》 CAS 2003年第1期34-36,共3页
乳腺生物反应器是现今生物学领域备受关注的焦点。探索和研究乳腺免疫调节机制将有助于加快乳腺生物反应器产业化进程。作者综述了乳腺免疫特点。
关键词 乳腺生物反应器 乳腺免疫 非特异性免疫 特别性免疫 功能细胞 效应分子
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克隆骡子集体亮相西雅图美国科学年会
12
作者 颜亮 《中学生物教学》 2004年第3期17-17,共1页
关键词 克隆 骡子 美国爱达荷大学 基因 赛马
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克隆人：千万个雷锋在成长
13
作者 荣迪 《上海科学生活》 2001年第3期28-37,共10页
如果我们真的掌握了克隆人的技术，有三种人最有可能被我们复制。
关键词 克隆人 克隆羊 体细胞 克隆技术
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谷氨酸棒杆菌海藻糖合成酶基因的克隆及功能鉴定 被引量：1
14
作者 韦宇拓 朱绮霞 +3 位作者 罗兆飞 陈发忠 汪嵘 黄日波 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期1-6,共6页
利用生物信息学手段,在GenBank数据库进行氨基酸的同源性检索分析,发现来自谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)一功能未确定的ORF序列被注释为假设的海藻糖酶(putative trehalose synthase),它与已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序... 利用生物信息学手段,在GenBank数据库进行氨基酸的同源性检索分析,发现来自谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)一功能未确定的ORF序列被注释为假设的海藻糖酶(putative trehalose synthase),它与已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有60%以上的同源性.本研究把这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达及进行功能鉴定.实验表明这段ORF序列为一新的海藻糖合成酶基因,其表达产物能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子.重组酶性质的初步研究表明重组酶在pH 7.0～7.5,30℃转化麦芽糖效率最高. 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 海藻糖合成酶 基因克隆 功能鉴定 海藻糖
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母猪VEGF基因mRNA全序列的克隆与分析 被引量：2
15
作者 陈来华 王立贤 +3 位作者 王立刚 季跃光 颜华 张龙超 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第6期47-51,共5页
本研究运用多种分子生物学方法对母猪胎盘VEGF mRNA全序列进行克隆和分析,结果发现：母猪胎盘VEGFmRNA全长约3500 bp,其完整的cDNA编码190个氨基酸,通过同源性比较预测了VEGF基因的DNA序列全长约为16kb。VEGF基因编码的氨基酸序列与人... 本研究运用多种分子生物学方法对母猪胎盘VEGF mRNA全序列进行克隆和分析,结果发现：母猪胎盘VEGFmRNA全长约3500 bp,其完整的cDNA编码190个氨基酸,通过同源性比较预测了VEGF基因的DNA序列全长约为16kb。VEGF基因编码的氨基酸序列与人、小鼠和恒河猴的同源性分别为78.82%、79.44%和96.34%。经生物信息学分析,预测VEGF蛋白理论分子量为22.33 kD,其等电点为7.89;大约在1-20,40-45,50-60,65-80,100-105位之间的氨基酸存在疏水性区域,用TMHMM2.0分析猪VEGF的跨膜结构发现此蛋白所有氨基酸都位于膜表面,证实了VEGF是一种表面蛋白。用signalP 3.0分析发现在1-27位氨基酸可能为信号肽（P=0.999）,且可能在26和27位氨基酸之间发生切割（P=0.956）。对VEGF核苷酸序列和氨基酸序列、蛋白质结构和功能的分析,进一步证实本研究得到了VEGF基因mRNA的全序列,为VEGF基因与母猪繁殖性能的关联性研究提供依据。 展开更多
关键词 猪 VEGF基因 全序列克隆 生物信息学分析
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鸡α-干扰素基因的克隆及序列分析 被引量：1
16
作者 李玉峰 李峰 +3 位作者 艾武 宋敏训 黄兵 马秀丽 《山东家禽》 2003年第11期12-13,共2页
利用RT-PCR方法,从ConA诱导的鸡淋巴细胞中扩增出鸡α-干扰素基因,经同源性比较,发现家禽α-干扰素核苷酸序列之间同源性较高,而与哺乳动物的同源性较低,说明家禽α-干扰素的生物学功能与哺乳动物可能存在一定差异。
关键词 鸡 α—干扰素 基因 克隆 序列分析 核苷酸 同源性 淋巴细胞 RT—PCR 哺乳动物 家禽 生物学功能
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犊牛瘤胃干酪乳杆菌分离鉴定及其耐酸相关基因ffh的克隆 被引量：4
17
作者 龙淼 逄晓阳 +3 位作者 邢欣 于申业 朱连勤 刘国文 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期752-754,766,共4页
利用乳酸杆菌分离培养基(SL)对犊牛瘤胃内的乳酸杆菌进行分离,对分离出的乳酸杆菌进行革兰氏染色、生化反应及16S rRNA同源性分析鉴定。对分离鉴定的干酪乳杆菌提取其基因组,根据Genbank发表的干酪乳杆菌耐酸相关基因(ffh基因)设计1对... 利用乳酸杆菌分离培养基(SL)对犊牛瘤胃内的乳酸杆菌进行分离,对分离出的乳酸杆菌进行革兰氏染色、生化反应及16S rRNA同源性分析鉴定。对分离鉴定的干酪乳杆菌提取其基因组,根据Genbank发表的干酪乳杆菌耐酸相关基因(ffh基因)设计1对引物进行PCR,利用pMD18-T载体进行克隆,构建重组质粒,进行PCR及测序鉴定,获得耐酸基因ffh,为下一步研制瘤胃微生态制剂及构建瘤胃内耐酸的乳酸分解基因工程菌奠定了基础。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 分离鉴定 ffh基因 克隆
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全雌性轮虫新物种依靠吞食DNA行无性繁殖
18
《生物学教学》 2013年第4期75-75,共1页
据生物通网2012年11月21日报道，科学家发现了一种全新的轮虫物种，它们全由雌性个体组成，其无性繁殖的历史可能已经持续了8000万年。新发现发表在新一期的《公共图书馆·遗传学》杂志上。
关键词 无性繁殖 新物种 全雌性 轮虫 DNA 吞食 公共图书馆 科学家
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龙葵E2泛素结合酶基因SorUBC克隆及表达特性分析 被引量：8
19
作者 蔡佳文 金晓霞 +3 位作者 于丽杰 崔柏杨 魏迅 董延龙 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期26-36,45,共12页
对龙葵SorUBC基因克隆并分析其在多种非生物胁迫处理下表达特性，为E2泛素结合酶在植物逆境胁迫中应用提供理论依据。试验采用电子克隆结合RT—PCR方法从龙葵中克隆得到泛素E2结合酶UBC基因编码区序列，命名为SorUBC，登陆GenBank，编号... 对龙葵SorUBC基因克隆并分析其在多种非生物胁迫处理下表达特性，为E2泛素结合酶在植物逆境胁迫中应用提供理论依据。试验采用电子克隆结合RT—PCR方法从龙葵中克隆得到泛素E2结合酶UBC基因编码区序列，命名为SorUBC，登陆GenBank，编号：KU233684。SorUBC基因编码区全长888bp，编码295个氨基酸。进化树分析显示，该基因编码氨基酸序列与马铃薯、番茄同源性最高，为95％，其次是烟草，为91％。该蛋白在第266—284氨基酸位具有1个跨膜螺旋区域，泛素化位点预测表明其含有8个泛素化位点。利用荧光定量PCR技术分析SorUBC基因在龙葵各器官表达特征和不同非生物胁迫处理下（干旱、盐、碱、高温和低温）根部和叶片表达特性，同时测定龙葵叶片生理响应。结果表明，SorUBC基因表达具有组织差异性，在叶片和果实中表达量较高。非生物胁迫处理（干旱、盐、碱、高温和低温）后根部和叶片基因表达情况显示该基因存在早期（3或5h）应答上调表达，且根部与叶片基因表达量和变化趋势差异显著，根部表达量变化比叶片显著，推测SorUBC基因在龙葵早期响应干旱、盐、碱、高温和低温非生物胁迫中起调控作用。生理特征数据表明，在干旱、盐和高温胁迫中龙葵叶片MDA含量变化差异不显著，POD和SOD活性总体呈先降后升趋势，说明其在胁迫后期（9h）对活性氧造成的损伤起缓解作用。 展开更多
关键词 龙葵 SorUBC 克隆 表达分析 非生物胁迫 生理特性
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海岛棉GbHCT13基因的功能验证 被引量：2
20
作者 滕露 郑凯 +1 位作者 曲延英 陈全家 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1439-1449,共11页
该研究利用海岛棉‘新海21’和陆地棉ND203以及模式植物拟南芥,通过转基因及荧光定量检测等方法探究海岛棉GbHCT13基因(GenBank登录号MW048849)在纤维发育中的功能。结果显示:(1)成功构建重组载体pCAMBIA3301-GbHCT13,经农杆菌介导法转... 该研究利用海岛棉‘新海21’和陆地棉ND203以及模式植物拟南芥,通过转基因及荧光定量检测等方法探究海岛棉GbHCT13基因(GenBank登录号MW048849)在纤维发育中的功能。结果显示:(1)成功构建重组载体pCAMBIA3301-GbHCT13,经农杆菌介导法转化、除草剂抗性基因筛选、荧光定量检测方法鉴定获得转GbHCT13基因拟南芥T3代植株4株;qRT-PCR检测表明,转基因植株中GbHCT13基因表达量较野生型极显著增加。(2)转基因拟南芥过表达GbHCT13基因使植株同一时期的生长较野生型旺盛,株形、叶片数、抽薹数和茎秆表皮毛数量均与野生型存在差异;组织化学分析发现,转GbHCT13基因的拟南芥较野生型茎秆初生木质部生长活跃,导管增粗,次生木质部导管细胞壁横截面积变大,但髓质细胞无明显变化;过表达GbHCT13使拟南芥中木质素合成途径基因发生不同程度改变,其中CAD、CCoAOMT、PAL和4CL与GbHCT13基因的表达呈正相关。(3)经大田筛选、分子鉴定,成功获得转GbHCT13基因棉花植株3株;转GbHCT13基因棉花的棉纤维伸长率增加,纤维强度增大;沉默GbHCT13基因使棉花植株木质素含量降低,茎秆表皮毛数量减少,木质部导管细胞数量减少,导管细胞壁中木质素沉积量降低,而棉株并未发生株高上的明显矮化现象,且木质素合成通路中的CAD、CCoAOMT、CCR、PAL 4个基因的表达均呈降低趋势,说明抑制GbHCT13使得棉花生长代谢受阻,影响纤维发育起始。研究表明,GbHCT13基因能影响棉花植株中木质素合成从而调控纤维的生长发育,其功能与GbHCT13基因在模式植物拟南芥中的基本一致。 展开更多
关键词 海岛棉 GbHCT13基因 转基因 基因沉默 功能验证
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