DNA拓扑异构酶与细胞凋亡 被引量：15

1

作者 黄兆琦 《医学研究生学报》 CAS 2002年第6期539-541,共3页

细胞凋亡 (又称细胞程序性死亡 )的调控由多种基因、核内外酶、信号蛋白等成分协同完成 ,其中DNA拓扑异构酶认为是细胞凋亡过程中核内相关的调控因素。

关键词 DNA 拓扑异构酶 细胞凋亡

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嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力测定的研究 被引量：13

2

作者 曹健 王月囡 +2 位作者 王红军 王育军 于海东 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第1期155-158,共4页

亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提... 亚油酸异构酶能催化亚油酸转化为具有生理活性的共轭亚油酸。有关该酶活力的测定方法在国内外不同的文献中差别较大,尚没有统一的方法。本文对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶活力的测定方法进行了研究,以期为该酶分离纯化过程中酶活力的测定提供参考。通过单因素试验和正交试验,确定了该酶的最佳酶反应条件为:粗酶液添加量0.10ml,亚油酸0.70ml,Tween-802.00ml,反应温度37℃,反应时间3h。 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌 亚油酸异构酶 酶活力测定

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牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达与纯化

3

作者 文征宇 侯文韬 +1 位作者 杨龙雨 陈鹏 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第3期49-53,共5页

【目的】建立牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ(Vaccinia topoisomeraseⅠ)的原核表达体系及纯化方法,以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ。【方法】优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的全基因序列,构建牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达... 【目的】建立牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ(Vaccinia topoisomeraseⅠ)的原核表达体系及纯化方法,以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ。【方法】优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的全基因序列,构建牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达载体(pET28a/TOPO)并转化E.coliBL21 Star(DE3)菌株,优化其诱导表达条件,表达蛋白经Talon his-tag purification resin螯合层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定纯化效果,借助酶切质粒pLLP-OmpA检测纯化蛋白的活性。【结果】转化pET28a/TOPO的E.coliBL21 Star(DE3)特异地表达了牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ蛋白,最佳诱导条件为30℃下以0.5 mmol/L IPTG诱导12 h。该蛋白经钴离子螯合层析柱纯化后,SDS-PAGE电泳结果显示其为分子质量36 ku的蛋白。酶切和冻融试验结果表明,该酶具有高活性和高稳定性。【结论】成功构建了牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达和纯化体系,为后续拓扑异构酶Ⅰ的应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ 原核表达 蛋白纯化

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纤维二糖2-差向异构酶的酶学性质及在乳制品中的应用 被引量：2

4

作者 方正 肖雅琴 +3 位作者 陈秋铭 张涛 江波 沐万孟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1121-1128,共8页

近年来,对纤维二糖2-差向异构酶(CE)的研究取得了许多突破性的进展。针对不同的寡糖,CE表现出不同程度的差向异构化和异构化活性,催化乳糖生成的依匹乳糖和乳果糖,两种都是有益生元性质的乳糖衍生物,在保健食品及药品中具有非常广阔的... 近年来,对纤维二糖2-差向异构酶(CE)的研究取得了许多突破性的进展。针对不同的寡糖,CE表现出不同程度的差向异构化和异构化活性,催化乳糖生成的依匹乳糖和乳果糖,两种都是有益生元性质的乳糖衍生物,在保健食品及药品中具有非常广阔的前景。因此,CE在工业应用的中游和下游工艺越来越引起重视,来自嗜温和嗜热微生物的CE也被应用于不同需求的生产中。尤其是嗜温微生物来源的CE能在较低温中保持活性,推进了CE在乳制品行业中的应用。作者针对性总结了CE的酶学性质和催化产物的最新研究进展,及其在乳制品行业中的发展。 展开更多

关键词 纤维二糖2-差向异构酶 依匹乳糖 乳果糖 乳制品

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9种金属离子对缢蛏消化酶活力的影响 被引量：37

5

作者 吴众望 潘鲁青 董双林 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期297-300,共4页

以酶学分析的方法研究9种金属离子(Cu2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+、Zn2+、Ca2+、Pb2+、Ag+和Mn2+)对缢蛏(Sinonovaculaconstricta)蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活力的影响。缢蛏壳长(5 64±0 25)cm,9种金属离子浓度分别设置为2×10-6mol/... 以酶学分析的方法研究9种金属离子(Cu2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+、Zn2+、Ca2+、Pb2+、Ag+和Mn2+)对缢蛏(Sinonovaculaconstricta)蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活力的影响。缢蛏壳长(5 64±0 25)cm,9种金属离子浓度分别设置为2×10-6mol/L、2×10-5mol/L、2×10-4mol/L、2×10-3mol/L、2×10-2mol/L5个梯度。实验表明,缢蛏3种消化酶活力大小为淀粉酶>蛋白酶>纤维素酶;在实验设置的浓度范围内,Cu2+、Fe3+、Mg2+、Pb2+对蛋白酶活力影响不显著,Hg2+、Zn2+、Ca2+、Ag+、Mn2+对蛋白酶活力影响显著;Mg2+、Pb2+对淀粉酶活力影响不显著,Cu2+、Fe3+、Hg2+、Zn2+、Ca2+、Ag+、Mn2+对淀粉酶活力影响显著;Ca2+、Mg2+、Zn2+对纤维素酶活力影响不显著,Pb2+、Cu2+、Fe3+、Hg2+、Ag+、Mn2+对纤维素酶活力影响显著。不同浓度金属离子对缢蛏蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活力的影响表现出不同的变化趋势。 展开更多

关键词 金属离子 缢蛏 蛋白酶 淀粉酶 纤维素酶

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黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco,Richardson)同功酶分析 被引量：7

6

作者 尹洪滨 孙中武 +3 位作者 姚道霞 孙德志 庞艳红 薛淑群 《东北师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期92-97,共6页

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对产自黑龙江水系的黄颡鱼同功酶进行了分析.结果表明:在黄颡鱼的性腺、眼、肌肉、肝、心、肾6种组织中,10种酶(ADH,EST,GDH,IDH,MDH,LDH,POD,-αAMY,G-6-PDH和SOD)的同功酶谱均存在明显的组织特异性.其... 采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对产自黑龙江水系的黄颡鱼同功酶进行了分析.结果表明:在黄颡鱼的性腺、眼、肌肉、肝、心、肾6种组织中,10种酶(ADH,EST,GDH,IDH,MDH,LDH,POD,-αAMY,G-6-PDH和SOD)的同功酶谱均存在明显的组织特异性.其中的5种酶在雌雄性别间也存在着显著的差异.这种雌雄性别间存在的较为明显、稳定的酶谱差异可以作为黄颡鱼性别鉴定的一项参考指标.10种酶共记录出25个基因位点,其中Adh-1,Adh-3,Gdh-1,Gdh-2,Pod-2和Est-1为多态位点.黄颡鱼群体的多态位点百分数为24.00%(P0.99),平均预期杂合度和平均实际杂合度分别为0.096 2和0.005 0,极显著地偏离了Hardy-Weinberg平衡;平均有效等位基因数为1.24,在目前硬骨鱼类多样性研究资料中处于下限值;多态位点的固定指数为0.983 5,杂合子处于较深程度的缺失状态.从以上数据可以看出,这批引自黑龙江水系的黄颡鱼群体的种质较为纯化. 展开更多

关键词 黄颡鱼 同功酶 组织特异性 遗传结构

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用Raman光谱法研究出血蛋白酶的二级结构

7

作者 郑思定 舒莲美 +1 位作者 冉永禄 杜祖健 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1989年第3期278-283,共6页

用喇曼光谱方法测定了蛇毒出血蛋白酶的二级结构。通过分析酰胺Ⅰ和酰胺Ⅲ的喇曼特征频率,可以判定LHTa和LHTb是α-螺旋、β-回折和无规卷曲的结构,与用Lippert方法进行计算所得的结果相同。

关键词 出血蛋白酶 蛋白酶 喇曼光谱 结构

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人磷酸丙糖异构酶在大肠埃希菌中的表达、纯化及鉴定

8

作者 刘洁 金科华 《湖北科技学院学报（医学版）》 2023年第4期298-302,共5页

目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质... 目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质粒和PCR产物,并用DNA连接酶连接,连接产物转化DH5α感受态细胞,用含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将抗性菌落接种于含卡那霉素的LB培养基,于37℃250r/min培养过夜,抽提质粒,双酶切和测序鉴定重组质粒pET-28a-TPI。将重组质粒pET-28a-TPI转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,于含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将一个抗性菌落接种于100mL含卡那霉素的LB培养基,于37℃摇床中250r/min培养至A600约0.9,加入0.1mmol/L IPTG诱导TPI表达4h,收集菌体,超声裂解细胞,裂解液上清中的TPI用Ni^(2+)亲和层析柱纯化。用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物,纯化的TPI经超滤浓缩后,保存于-20℃。结果pET-28a-TPI序列正确,可溶性TPI在大肠埃希菌中获得表达,产量达300mg/L,纯度约90%。结论高产率、高纯度的TPI为后续研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 磷酸丙糖异构酶 可溶性 表达 纯化 超滤

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DNA拓扑异构酶的分型

9

作者 郑晓飞 孙志贤 《生命的化学》 CAS CSCD 1997年第5期30-31,共2页

ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用，如在ＤＮＡ复制、... ＤＮＡ拓扑异构酶的分型郑晓飞孙志贤（军事医学科学院放射医学研究所，北京１００８５０）关键词ＤＮＡ拓扑异构酶ＤＮＡ拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶。ＤＮＡ拓扑异构酶在细胞生命过程中起着重要作用，如在ＤＮＡ复制、修复、转录、重组中解开在复制和重组... 展开更多

关键词 酶 DNA拓扑异构酶 分型

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培养条件对嗜酸乳杆菌发酵产亚油酸异构酶的影响 被引量：2

10

作者 吴祖芳 石清花 翁佩芳 《宁波大学学报（理工版）》 CAS 2007年第3期306-310,共5页

以1株经自然分离的嗜酸乳杆菌经化学诱变筛选得到的产亚油酸异构酶高产突变株(Lac.Nb1)为出发菌株,以亚油酸底物为诱导剂,考察了培养条件对其产亚油酸异构酶的影响,得到最佳发酵培养条件:菌龄15h,接种量2%,温度37℃,初始pH 5.5,装液量80... 以1株经自然分离的嗜酸乳杆菌经化学诱变筛选得到的产亚油酸异构酶高产突变株(Lac.Nb1)为出发菌株,以亚油酸底物为诱导剂,考察了培养条件对其产亚油酸异构酶的影响,得到最佳发酵培养条件:菌龄15h,接种量2%,温度37℃,初始pH 5.5,装液量80 mL(250 mL三角瓶),摇床转速100r·min^(-1),经发酵培养条件优化后其产量比优化前提高了38.8%. 展开更多

关键词 嗜酸乳杆菌 亚油酸异构酶 培养条件

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固定化葡萄糖异构酶最适pH值的调节 被引量：3

11

作者 孔维 周慧 +2 位作者 刘辉 李惟 沈家聪 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1992年第2期212-215,共4页

用多孔强碱性三乙醇胺基聚苯乙烯树脂作为载体,用CNBr与载体上多羟基作用共价偶联葡萄糖异构酶(GI)。最适偶联条件表明:CNBr量增多,蛋白载量增加,但比活下降。固定化葡萄糖异构酶(IGI)最适反应温度比天然酶提高15℃。并系统地研究了影响... 用多孔强碱性三乙醇胺基聚苯乙烯树脂作为载体,用CNBr与载体上多羟基作用共价偶联葡萄糖异构酶(GI)。最适偶联条件表明:CNBr量增多,蛋白载量增加,但比活下降。固定化葡萄糖异构酶(IGI)最适反应温度比天然酶提高15℃。并系统地研究了影响IGI活力-pH的曲线的各种因素:用具有不同平均孔径的载体(R=137A,185A,230A,365A)固定化GI,在低离子强度条件下(0.0064mol/L),测定其最适pH值分别7.76,7.56,7.50,8.20。选择平均孔径为230A且具有不同数量三乙醇胺基的载体(0.94,1.05,1.13,1.37mmol/g干胶)分别固定化GI,其最适pH值分别为7.70,7.50,7.46,7.36。 展开更多

关键词 PH值 葡萄糖异构酶

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嗜酸乳杆菌发酵产亚油酸异构酶培养基条件的研究 被引量：6

12

作者 石清花 翁佩芳 吴祖芳 《宁波大学学报（理工版）》 CAS 2006年第4期457-461,共5页

以产亚油酸异构酶为指标,鉴定从泡菜中分离的嗜酸乳杆菌L1,对产酶培养基的碳源、氮源、无机盐及其配比和表面活性剂等方面进行了优化,最后得到了优化后培养基,其组成为:蛋白胨10g,酵母提取物5g,牛肉膏15g,葡萄糖20g,无水乙酸钠2.5g,柠... 以产亚油酸异构酶为指标,鉴定从泡菜中分离的嗜酸乳杆菌L1,对产酶培养基的碳源、氮源、无机盐及其配比和表面活性剂等方面进行了优化,最后得到了优化后培养基,其组成为:蛋白胨10g,酵母提取物5g,牛肉膏15g,葡萄糖20g,无水乙酸钠2.5g,柠檬酸二铵3g,Tween-801.5mL,MgSO40.14g,MnSO4.H2O0.3g,K2HPO4.3H2O1.31g.经发酵验证:培养基经优化后产酶是未优化前的1.32倍。 展开更多

关键词 共轭亚油酸 亚油酸异构酶 培养基 优化

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链霉菌M1033葡萄糖异构酶的分离纯化及其性质的研究 被引量：16

13

作者 黄婉治 王淳 +5 位作者 刘兢 崔涛 刘咸安 牛立文 王玉珍 徐洵 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期283-289,共7页

链霉菌M1033菌株所产的葡萄糖异构酶培养液经二级(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-Sephadex A50,Sephadex-G150柱层析分离纯化,可得到电泳均一的纯酶。该酶的全分子量为91000左右,由两个相同的亚基组成。其pI为4.3,经糖染色后证明并非糖蛋白;最... 链霉菌M1033菌株所产的葡萄糖异构酶培养液经二级(NH_4)_2SO_4沉淀、DEAE-Sephadex A50,Sephadex-G150柱层析分离纯化,可得到电泳均一的纯酶。该酶的全分子量为91000左右,由两个相同的亚基组成。其pI为4.3,经糖染色后证明并非糖蛋白;最适反应温度70℃,在该温度下分别以D-木糖和D-葡萄糖为底物,测得最适pH分别为8.0和8.3。该酶为金属激活酶。Co^(2+)和Mg^(2+)对该酶有激活作用,Ca^(2+)则使之几乎失活。金属离子的激活作用随底物而异。动力学研究表明,该酶对D-木糖有更大的亲和性。 展开更多

关键词 链霉菌 葡萄糖异构酶 分离 纯化

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