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O^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶的基因表达调控
1
作者 季守平 章扬培 《细胞生物学杂志》 CSCD 1997年第3期112-115,共4页
DNA损伤修复是生命科学研究的重要课题。DNA修复在防止基因突变,保证遗传信息稳定性的过程中起着极其重要的作用。近20年来,人们通过大量研究发现细胞内0~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O^6-metnylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)... DNA损伤修复是生命科学研究的重要课题。DNA修复在防止基因突变,保证遗传信息稳定性的过程中起着极其重要的作用。近20年来,人们通过大量研究发现细胞内0~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O^6-metnylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)能专一性很强地修复DNA烷化损伤,防止细胞癌变和死亡;大量试验还证明细胞内MGMT活性的高低是决定肿瘤细胞对亚硝脲类药物产生耐药性的分子基础。详尽了解MGMT基因表达调控机理对DNA损伤修复的理论研究和克服肿瘤细胞耐药性的实践都具有重要的意义。 展开更多
关键词 甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶 基因表达调控
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介导含硫多肽类抗生素耐药的23S rRNA甲基转移酶NHR的生化功能
2
作者 沈妍 王哲 陈东戎 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期189-193,215,共6页
目的研究23S rRNA甲基转移酶-硫链丝菌肽抗药性RNA甲基转移酶(thiostrepton-resistance-RNA methyltransferase,TSR)和23S rRNA甲基转移酶-那西肽抗药性RNA甲基转移酶(nosiheptide-resistance-RNA methyltransferase,NHR)的生化功能,探... 目的研究23S rRNA甲基转移酶-硫链丝菌肽抗药性RNA甲基转移酶(thiostrepton-resistance-RNA methyltransferase,TSR)和23S rRNA甲基转移酶-那西肽抗药性RNA甲基转移酶(nosiheptide-resistance-RNA methyltransferase,NHR)的生化功能,探讨细菌对含硫多肽类抗生素产生耐药性的分子机制。方法构建克隆,体外表达并纯化TSR和NHR蛋白;利用T7聚合酶体外转录系统体外转录生成23S rRNA底物片段;构建RNA甲基转移酶活性的体外检测体系,在14C-SAM存在的情况下,利用液体闪烁计数仪测定相应底物RNA被甲基化的程度;通过Gel shift方法观察RNA底物与TSR或NHR蛋白的体外相互结合作用。结果得到体外表达的纯化TSR、NHR蛋白及RNA底物;TSR蛋白和NHR蛋白均能将RNA底物甲基化,且NHR甲基转移酶的活性更强;TSR和NHR蛋白与RNA底物均有结合,结合强度均随蛋白浓度增加而增强。结论 TSR和NHR蛋白都能将23S rRNA的特异位点1067A甲基化,并能诱导细菌的抗生素耐药性。 展开更多
关键词 抗生素耐药性 23S rRNA甲基转移酶 硫链丝菌肽 那西肽
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鼠肝DNA甲基化酶的纯化及物理化学性质的研究
3
作者 白坚石 何忠效 顾郁 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第6期735-739,共5页
以Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝为材料，确立了一个简便的纯化鼠肝ＤＮＡ甲基化酶的程序，包括：细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤... 以Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝为材料，确立了一个简便的纯化鼠肝ＤＮＡ甲基化酶的程序，包括：细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０柱层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测，纯化后的酶已达电泳均一，且酶的比活力提高１１２倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为３６５ｋＤ，以ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基，大亚基为９５ｋＤ，小亚基为８５ｋＤ，推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。 展开更多
关键词 DNA甲基化酶 提纯 理化特性
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青霉素酰化酶在新型复合载体上的固定化研究
4
作者 史楠 王福岭 《山西化工》 2010年第3期19-21,25,共4页
在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固... 在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固载最适条件为:戊二醛用量0.1 mmol/L,pH值7.64,给酶量1%,温度42℃,时间11 h^12 h。此条件下所得固定化酶的活力为34000 U/mL;测得所制固定化酶的最适pH值为7.82,最适温度为45℃。 展开更多
关键词 青霉素酰化酶 丙烯酰胺 接枝 固定化酶
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