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初治结核病患者自噬相关基因表达水平的研究 被引量：3
1
作者 吕子征 王伟 +2 位作者 刘京铭 李传友 高孟秋 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第1期82-85,共4页
目的研究初治结核病患者自噬相关基因表达水平。方法选取2013年12月至2016年3月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的12例初治肺结核病患者作为病例组；选取首都医科大学附属北京胸科医院体检健康的新入职职工和在读学生12名作为对照... 目的研究初治结核病患者自噬相关基因表达水平。方法选取2013年12月至2016年3月在首都医科大学附属北京胸科医院就诊的12例初治肺结核病患者作为病例组；选取首都医科大学附属北京胸科医院体检健康的新入职职工和在读学生12名作为对照组。收集研究对象外周血，提取RNA，将RNA逆转录为cDNA，进行实时定量PCR。使用H37Rv标准株感染人外周血单核细胞（THP-1细胞）作为感染组，而未感染H37Rv标准株的THP1细胞作为未感染组，分别在感染4h和6h使用Trizol法提取RNA，将RNA逆转录为cDNA，进行实时定量PCR检测。实时定量PCR检测使用p肌动蛋白（β-actin）作为内参基因，测量各个基因的循环阈值（cyclethreshold，Ct），并计算各个基因的ACt值。不同样品同一基因的检测通过计算两者之间的ACt值差值，使用2-△△Ct比较基因之间的表达水平。结果病例组Ras蛋白脑组织同源类似物（Rheb）基因ACt值为8．71±0．58，对照组△Ct值为7．83±0．58，两组相比差异有统计学意义（t=3．74，P=0．001）；病例组Rheb基因表达下调。病例组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因△Ct值为11．88±0．97，对照组ACt值为10．81±1．04，两组相比差异有统计学意义（t=2．60，P=0．016）；病例组roTOR基因表达下调。使用-△△Ct法比较两组间自噬相关基因表达倍数关系，对照组Rheb基因表达水平是病例组的（1.85±0．91）倍；对照组roTOR基因表达水平是病例组的（2．76±1．56）倍。H37Rv标准株感染THP-1细胞6h后，感染组自噬相关蛋白LC3B基因△Ct值为6．41±0．15，未感染组△Ct值为7．04±0．05，两组相比差异有统计学意义（t=4．50，P=0．046）；感染组表达上调。感染组roTOR基因△Ct值为8．73±0．16，对照组△Ct值为10．10±0．20，两组相比差异有统计学意义（t=4．79，P=0．041），感染组表达上调。结论初治结核� 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 自噬 基因表达 免疫
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基于UPLC技术的吴茱萸定性定量一体化研究 被引量：10
2
作者 樊小瑞 刘梓晗 +4 位作者 冯伟红 刘晓谦 杨立新 王智民 李春 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第20期3945-3956,共12页
采用UPLC建立吴茱萸指纹图谱和多成分同步测定方法。采用Waters Acquity BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,0.2%甲酸乙腈-0.2%甲酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长320 nm。以去氢吴茱萸碱为参照峰,通过对29批吴茱萸进行... 采用UPLC建立吴茱萸指纹图谱和多成分同步测定方法。采用Waters Acquity BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,0.2%甲酸乙腈-0.2%甲酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长320 nm。以去氢吴茱萸碱为参照峰,通过对29批吴茱萸进行测定,建立了吴茱萸的UPLC指纹图谱,该指纹图谱可同时对24个共有峰进行检测,采用对照品对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱共10个色谱峰进行了指认。采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价软件"2008A版进行相似度评价,29批药材中有19批药材相似度大于0.9。此外,采用同一色谱条件对吴茱萸中的9个成分进行了同步测定。所测定的9个成分新绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸卡品碱和二氢吴茱萸卡品碱分别在0.000 46~0.138,0.000 146~0.175,0.000 412~0.124,0.000 448~0.134,0.000 452~0.136,0.003 38~0.169,0.000 44~0.132,0.001 07~0.128,0.001 71~0.128μg与各自峰面积积分值成良好线性关系,9种成分的平均加样回收率分别为100.3%,100.4%,101.6%,97.51%,102.9%,101.4%,103.8%,104.0%,95.99%,RSD分别为2.4%,2.0%,3.0%,0.80%,1.9%,2.1%,1.1%,2.2%,2.4%。该文建立的UPLC方法在20 min内实现了对吴茱萸化学成分的全谱分离,与文献报道方法相比,该文在一个色谱条件下同时实现了吴茱萸指纹图谱测定和多成分同步测定,而且所建方法具有专属性强、分离度高、色谱峰纯度高、方法简单易行的特点,为吴茱萸药材同步进行定性和定量分析提供了依据。 展开更多
关键词 吴茱萸 指纹图谱 多成分同步测定 超高效液相色谱
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全外显子测序检测一个遗传性易栓症家系的致病基因 被引量：2
3
作者 孟景晔 彭武建 +3 位作者 骆子义 戴炜 朱鹏 刘南松 《中国优生与遗传杂志》 2017年第4期42-44,共3页
目的对一例遗传性易栓症家系进行基因分析。方法对一个遗传性易栓症家系成员进行凝血因子、凝血功能检测,对2名患病的家系成员进行全外显子测序确定候选基因,对所有家系成员及正常对照组进行候选突变基因的Sanger测序验证。结果全外显... 目的对一例遗传性易栓症家系进行基因分析。方法对一个遗传性易栓症家系成员进行凝血因子、凝血功能检测,对2名患病的家系成员进行全外显子测序确定候选基因,对所有家系成员及正常对照组进行候选突变基因的Sanger测序验证。结果全外显子测序提示这个家系存在凝血因子Ⅱ基因的T165M突变。结论该易栓症家系的发病原因为凝血因子Ⅱ基因的第六外显子c.C494T(p.T165M)突变,全基因组外显子测序能解决传统定位克隆技术常常面临该病家系患者太少、病例散发、基因位点的异质性、外显不全及候选基因太多等难题,为该病产前诊断提供了新的途径。 展开更多
关键词 遗传性易栓症 全外显子测序 基因突变 凝血因子Ⅱ T165M
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