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高效体积排阻色谱法定量检测口蹄疫疫苗中146S的疫苗预处理方法 被引量:4
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作者 宋艳民 杨延丽 +6 位作者 苏志国 刘丽丽 朱元源 徐嫄 邹兴启 赵启祖 张松平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1441-1452,共12页
旨在建立一种口蹄疫灭活病毒疫苗的处理方法,去除尺寸排阻色谱法(HPSEC)检测146S抗原过程中的杂质干扰,获得最佳的检测信号并实现146S抗原含量的准确测定。分别考察了超速离心法、PEG沉淀法、核酸酶消化法对两批疫苗样品中的HPSEC检测... 旨在建立一种口蹄疫灭活病毒疫苗的处理方法,去除尺寸排阻色谱法(HPSEC)检测146S抗原过程中的杂质干扰,获得最佳的检测信号并实现146S抗原含量的准确测定。分别考察了超速离心法、PEG沉淀法、核酸酶消化法对两批疫苗样品中的HPSEC检测干扰杂质的去除效果。在优化条件下,超速离心法处理后146S检测结果分别为7.1、7.6 μg/mL,PEG沉淀法为9.7、10.4 μg/mL;酶消化法处理后的检测值最高,分别为10.5、10.4 μg/mL,且杂质去除完全、处理速度快、操作条件温和。通过响应面法确定最优酶消化处理条件如下:200 μL水相中添加终浓度421 U/mL的Benzonase,25.1 ℃下反应1.29 h。在该最优条件下,对4家企业各3种不同血清型共12批疫苗样品进行146S含量检测,结果表明建立的方法对不同疫苗均有良好适用性,且重复性好(RSD<5.3%,n=3)。通过该处理方法,解决了杂质对146S定量检测的干扰,扩大了HPSEC检测技术的应用范围,进一步确保了检测结果的准确可靠。 展开更多
关键词 尺寸排阻色谱 口蹄疫疫苗 146S 定量 酶消化
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高分子多孔微球产品的制备及其在类病毒颗粒分离纯化中的应用 被引量:2
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作者 那向明 周炜清 +2 位作者 李娟 苏志国 马光辉 《化学进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2018年第1期5-13,共9页
高分子多孔微球在医药领域的分离纯化中应用广泛,是重要的化工产品。高分子多孔微球的形成是一个复杂的过程,利用聚合物与有机溶剂致孔剂的相分离,可得到小于100 nm孔径的多孔微球;而水和疏水性聚合物之间相分离程度远大于有机溶剂与聚... 高分子多孔微球在医药领域的分离纯化中应用广泛,是重要的化工产品。高分子多孔微球的形成是一个复杂的过程,利用聚合物与有机溶剂致孔剂的相分离,可得到小于100 nm孔径的多孔微球;而水和疏水性聚合物之间相分离程度远大于有机溶剂与聚合物间的相分离程度,因此可获得大于100 nm孔径的多孔微球。针对不同应用领域选择不同的方法,设计并制备出合理的微球结构,对多孔微球的实际应用十分关键。本综述介绍了纳孔、介孔、大孔微球产品的制备方法悬浮聚合和种子聚合法,重点介绍本课题组制备超大孔微球的方法——反胶团溶胀法和W/O/W复乳法,上述两种方法解决了常规方法难以制备大孔径微球产品的问题,拓展了多孔微球在类病毒颗粒等大尺寸蛋白分离纯化领域的应用。在此基础上,以HB-VLPs为模型对比了不同孔径微球对类病毒颗粒吸附量、回收率、结构、以及纯化效果的差异,揭示超大孔微球产品在类病毒颗粒分离纯化中的优势。 展开更多
关键词 高分子多孔微球 超大孔微球 类病毒颗粒 生物大分子分离纯化
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鸡白痢沙门氏菌兔抗血清多抗IgG的纯化与稳定 被引量:2
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作者 尤星力 杨延丽 +2 位作者 苏志国 张媛 张松平 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1204-1211,共8页
建立了离子交换层析介质一步纯化鸡白痢沙门氏菌兔抗血清获得多抗免疫球蛋白G (IgG)的方法,利用IgG与杂蛋白等电点的差异,指导阴阳离子交换层析介质筛选和操作条件优化;针对多抗IgG易失活的难题,采用差示扫描荧光法为纯化后的IgG筛选稳... 建立了离子交换层析介质一步纯化鸡白痢沙门氏菌兔抗血清获得多抗免疫球蛋白G (IgG)的方法,利用IgG与杂蛋白等电点的差异,指导阴阳离子交换层析介质筛选和操作条件优化;针对多抗IgG易失活的难题,采用差示扫描荧光法为纯化后的IgG筛选稳定剂。结果表明,通过毛细管等电聚焦测得兔抗血清多抗IgG的等电点为6.04~7.08,阳离子交换介质CM Sepharose FastFlow层析纯化的IgG最高电泳纯度为63.5%,高效液相尺寸排阻色谱测得IgG回收率为15.5%;阴离子交换层析纯化效果更佳,pH 5.5条件下Q Sepharose XL(Q-XL)介质层析获得的IgG最高纯度达99.3%,回收率达67.5%;200 g/L山梨醇对IgG具有最佳稳定作用,IgG的2个热变性温度分别提高了5.52和8.84℃,70℃时山梨醇的稳定作用更明显;以200 g/L山梨醇为稳定剂、用阴离子交换层析介质Q Sepharose XL一步纯化所得IgG具有高纯度、高收率及高稳定性,且制备工艺简单。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门氏菌 免疫球蛋白G 标准物质 纯化 等电点 离子交换层析 稳定
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核糖核酸酶A的错流超滤复性 被引量:2
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作者 王向娟 李秀男 +4 位作者 陈超 苏志国 马光辉 赵大伟 余蓉 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1455-1462,共8页
针对重组蛋白高表达形成的包涵体,基于中空纤维膜的错流超滤复性具有较大的应用潜力。为研究不同条件对基于中空纤维膜的错流超滤复性的影响,以核糖核酸酶A(RNase A)为例,以复性过程的活性收率和质量收率作为考察指标,设计了RNase A复... 针对重组蛋白高表达形成的包涵体,基于中空纤维膜的错流超滤复性具有较大的应用潜力。为研究不同条件对基于中空纤维膜的错流超滤复性的影响,以核糖核酸酶A(RNase A)为例,以复性过程的活性收率和质量收率作为考察指标,设计了RNase A复性初始浓度(A)、跨膜压力(B)、循环流速(C)的3因素3水平正交实验。结果表明,错流超滤复性过程中,以上复性条件对RNase A的质量收率基本没有影响,对RNase A的活性收率具有显著影响,其较优组合为A1B1C2,即RNase A复性初始浓度为0.3 mg/mL、跨膜压力34.0 kPa、循环流速935 cm/min。在以上复性条件下,RNase A的活性收率可达92.31%,质量收率为77.56%。 展开更多
关键词 超滤复性 核糖核酸酶A 活性收率 质量收率 正交实验
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新型电荷型纳米盘的可控制备及其与细胞色素P450的结合性能
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作者 陶娇丽 黄永东 +6 位作者 赵岚 朱凯 吴学星 周丹妮 苏志国 马光辉 刘红缨 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1197-1203,共7页
分别采用氮气吹干法和旋转蒸发法制备由磷脂和膜支架蛋白组成的电荷型纳米盘,用凝胶过滤色谱对其尺寸分级,分析了其性能,考察了其与肝微粒体细胞色素P450的结合能力。结果表明,纳米盘外观澄清透明,微观呈圆盘状,平均直径10nm,在p H 7.4... 分别采用氮气吹干法和旋转蒸发法制备由磷脂和膜支架蛋白组成的电荷型纳米盘,用凝胶过滤色谱对其尺寸分级,分析了其性能,考察了其与肝微粒体细胞色素P450的结合能力。结果表明,纳米盘外观澄清透明,微观呈圆盘状,平均直径10nm,在p H 7.4下Zeta电位为-19.86 m V;肝微粒体破碎液与纳米盘能很好结合,CO差示光谱在450 nm出现明显吸收峰,细胞色素P450含量为0.10 nmol/mg,比活比未经纳米盘处理时提高13.0倍,较传统方法提升1.5倍,且操作时间由数日缩短至数小时。电荷型纳米盘在结合膜蛋白细胞色素P450的同时,活性保持良好,在膜蛋白研究领域极具应用潜力。 展开更多
关键词 纳米盘 电荷 膜蛋白 纯化 重构 细胞色素P450
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新型耐碱蛋白A介质的制备与性能
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作者 韦巍 黄永东 +7 位作者 赵岚 吴学星 朱天孝 李冬雪 靳海波 张荣月 苏志国 马光辉 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期609-616,共8页
以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础,构建一种新型耐碱蛋白A,并偶联至琼脂糖基质,获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质,分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(h Ig G)与蛋白A介质的结合过程。结果表明,该介质具有较商... 以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础,构建一种新型耐碱蛋白A,并偶联至琼脂糖基质,获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质,分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(h Ig G)与蛋白A介质的结合过程。结果表明,该介质具有较商品配基更高的结合力和稳定的再生性能,hIgG动态载量达62.0 mg/mL,40次再生操作后载量为初始载量的84%。该介质在抗体纯化领域具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 耐碱蛋白A 层析介质 亲和层析 抗体纯化 动态载量
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大孔树脂吸附法提取羟基钴胺素 被引量:1
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作者 杨军 王自强 +2 位作者 王云山 张万忠 苏志国 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期728-734,共7页
比较了8种大孔树脂对费氏丙酸杆菌发酵提取液光解转化后形成的羟基钴胺素的吸附性能,考察了上柱料液pH值对吸附量的影响,分析了不同浓度和pH下乙醇溶液作为洗脱剂的解吸情况,研究了上柱速率对吸附量和解吸率的影响。结果表明,静态实验中... 比较了8种大孔树脂对费氏丙酸杆菌发酵提取液光解转化后形成的羟基钴胺素的吸附性能,考察了上柱料液pH值对吸附量的影响,分析了不同浓度和pH下乙醇溶液作为洗脱剂的解吸情况,研究了上柱速率对吸附量和解吸率的影响。结果表明,静态实验中,LX-50B型大孔树脂对羟基钴胺素的吸附性能最好,当上柱溶液pH为6时,LX-50B树脂饱和吸附量最高,为203.87mg/g。用pH为2的60%乙醇溶液作洗脱剂时解吸效果最好,羟基钴胺素提取液以2 BV(床柱体积)/h速度上柱吸附饱和,用60%乙醇溶液以0.5 BV/h速度洗脱后,羟基钴胺素浓度提高至1863.32 mg/L,为原提取液浓度的35倍,纯度由0.38%提升至15.73%,提取纯化效果良好。 展开更多
关键词 脱氧腺苷钴胺素 羟基钴胺素 大孔树脂 提取
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