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鱼源无乳链球菌的血清型及分子分型研究 被引量：6
1
作者 张雨薇 耿毅 +6 位作者 余泽辉 汪开毓 陈德芳 向正刚 李亚军 郭坤宁 牟维豪 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期800-806,共7页
为了解不同鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)分子分型特征,分析菌株之间的相关性和同源性,研究在采用S.agalactiae特异性cfb基因对分离菌株鉴定的基础上,对26株不同鱼源S.agalactiae进行了荚膜多糖血清型(CPS)多重PCR鉴定,同... 为了解不同鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)分子分型特征,分析菌株之间的相关性和同源性,研究在采用S.agalactiae特异性cfb基因对分离菌株鉴定的基础上,对26株不同鱼源S.agalactiae进行了荚膜多糖血清型(CPS)多重PCR鉴定,同时采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子特征比较与同源性分析。结果显示,26株菌CPS型存在Ia(n=22)和III型(n=4)两种类型,其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为Ia血清型,齐口裂腹鱼源菌株存在Ia(n=2)和III(n=4)型两种CPS型;多位点序列分型共得到3种STs序列型(ST-891、ST-103、ST-19),其中黄河裸裂尻鱼源和罗非鱼源菌株均为新的序列型ST-891,齐口裂腹鱼源菌株存在ST-103和ST-19两种STs型;PFGE聚类分析可分为16个PFGE谱型(A-P),其中优势带型为P型(n=9)。相同荚膜多糖血清型—MLST分型菌株在PFGE带型中呈现高度聚集。CPS分型与MLST分型、PFGE分型有很好的相关性,而CPS型、STs序列型、PFGE带型与宿主的来源没有明显的相关性。不同鱼源S.agalactiae分子特征的相似性,提示其存在交叉感染的可能性,而齐口裂腹鱼源S.agalactiae分子特征的多样性,提示其存在遗传变异的情况。 展开更多
关键词 无乳链球菌 荚膜多糖血清分型 多位点序列分型 脉冲场凝胶电泳
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金钗石斛原生质体的制备与融合 被引量：1
2
作者 徐德林 储士润 +4 位作者 潘胤池 郑明辉 钱刚 陈芳 李林 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第8期935-944,共10页
以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)再生苗的幼嫩叶片为实验材料,以原生质体活力率为评价指标,用正交试验设计对原生质体制备过程中的纤维素酶浓度、果胶酶浓度、离析酶浓度和酶解时间四个关键因素进行最佳组合筛选,发现当纤维素酶为... 以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)再生苗的幼嫩叶片为实验材料,以原生质体活力率为评价指标,用正交试验设计对原生质体制备过程中的纤维素酶浓度、果胶酶浓度、离析酶浓度和酶解时间四个关键因素进行最佳组合筛选,发现当纤维素酶为9.5 mg/m L、果胶酶为5.0 mg/m L、离析酶为6.0 mg/m L、酶解时间为3.0 h的组合条件下,制备的原生质体活力率最高,为94.42%。在此基础上,采用高钙高pH值结合PEG4000诱导法进行原生质体融合研究,以高活力的赤水和瑞丽金钗石斛原生质体为材料,以异核体融合率为评价指标,用响应面法优化设计对原生质体融合过程中的PEG浓度、CaCl_2浓度、pH和融合时间四个因素进行最佳组合筛选,发现当PEG4000浓度为38.41%、CaCl_2浓度为0.44 mol/L、pH为9.26、融合时间为28.87 min的组合条件下,异核体融合率达到最高,为0.924%。同时,响应面法分析还发现,PEG浓度和CaCl_2浓度之间、PEG浓度和pH之间、CaCl_2浓度和融合时间两个因素共同对异核体融合率有显著影响。此外,响应面分析还发现,当pH为9.26时,PEG浓度、CaCl_2浓度和融合时间的值在一定范围内变化并不会显著影响异核体融合率的值,数值均维持在0.94%左右。该研究完善了金钗石斛原生质体制备和融合的技术体系,为金钗石斛种质资源的保护、拓展和新品种选育提供了实验材料,为其他近缘物种的相关研究提供了实验参考。 展开更多
关键词 金钗石斛 原生质体制备 原生质体融合 正交试验法 响应面法
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