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基于阶梯乳化的微流控技术在医学领域中的应用 被引量:1
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作者 范盼盼 (综述)郑国侠 王云华(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第14期1782-1785,共4页
微流控技术因成本低、样品量小、分析时间短、高灵敏度和易于自动化等优点,已广泛用于分子检测、成像、药物输送、诊断以及细胞生物学等众多领域中。液滴技术是微流控技术的重要分支,其中基于阶梯乳化的微流控技术,由于液滴直径对分散... 微流控技术因成本低、样品量小、分析时间短、高灵敏度和易于自动化等优点,已广泛用于分子检测、成像、药物输送、诊断以及细胞生物学等众多领域中。液滴技术是微流控技术的重要分支,其中基于阶梯乳化的微流控技术,由于液滴直径对分散相和连续相的流速和流体特性不敏感,对流体控制要求低,现在不仅仅在生产单分散液滴领域,如分子检测、耐药性检测中发挥作用,也越来越多的在生产高单分散性和稳定质量的微胶囊和微凝胶等材料中扮演重要角色。本文主要介绍阶梯乳化在医学领域中的应用,以及探讨其存在的挑战和未来的发展。 展开更多
关键词 阶梯乳化 单分散液滴 微流控
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病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ对293T细胞APOBEC3G表达的影响 被引量:1
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作者 郑国霞 刘如锦 +4 位作者 齐燕 王小波 闫玉涛 谭晓华 杨磊 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期624-630,共7页
目的探讨病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)对载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)表达的影响及其机制。方法转染vMIP-Ⅱ质粒(vMIP-Ⅱ质粒组)、空质粒(空质粒组)至293T细胞。定量PCR和Western 印迹法分析转染vMIP-Ⅱ基因对2... 目的探讨病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(vMIP-Ⅱ)对载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)表达的影响及其机制。方法转染vMIP-Ⅱ质粒(vMIP-Ⅱ质粒组)、空质粒(空质粒组)至293T细胞。定量PCR和Western 印迹法分析转染vMIP-Ⅱ基因对293T细胞APOBEC3G表达的影响。空质粒组、vMIP-Ⅱ质粒组细胞分别加入1 000 IU/ml干扰素α(IFN-α),培养36 h后,Western印迹法检测空质粒组、vMIP-Ⅱ质粒组、空质粒+ IFN-α组、vMIP-Ⅱ质粒+ IFN-α组APOBEC3G的蛋白水平。对转染vMIP-Ⅱ质粒的293T细胞,分别用75 μmol/L JAK/STAT信号通路抑制剂AG490和20 μmol/LERK信号通路抑制剂U0126处理,24 h后收集细胞总蛋白,Western印迹法检测APOBEC3G蛋白水平。构建包含APOBEC3G启动子的荧光素酶报告基因重组质粒,启动子片段包括APOBEC3G全长启动子序列(POS)与长度1 560、960、720、480、420、360、330、240 bp序列及APOBEC3G启动子序列中不含调控元件的区域(NEG),将荧光素酶报告基因重组质粒和vMIP-Ⅱ质粒共转染293T细胞为实验组,以与空质粒共转染的293T细胞为对照,检测APOBEC3G启动子活性,分析vMIP-Ⅱ调控APOBEC3G转录活性的关键启动子作用区域。统计学比较采用t检验、单因素方差分析、LSD-t检验。结果 vMIP-Ⅱ转染组APOBEC3G mRNA、蛋白水平(2.500 ± 0.013、1.472 ± 0.013)均高于对照组(1、0.364 ± 0.030,t值分别为 6.22、6.54,均P < 0.05)。空质粒组、vMIP-Ⅱ质粒组、空质粒+ IFN-α组、vMIP-Ⅱ质粒+ IFN-α组APOBEC3G水平(分别为1、2.030 ± 0.108、2.700 ± 0.081、2.600 ± 0.099)差异有统计学意义(F = 67.026,P < 0.001),vMIP-Ⅱ质粒组与空质粒+ IFN-α组差异无统计学意义(t = 3.46,P > 0.05)。vMIP-Ⅱ质粒组、vMIP-Ⅱ质粒+ AG490组、vMIP-Ⅱ质粒+ U0126组APOBEC3G水平(0.617 ± 0.025、0.179 ± 0.061、0.359 ± 0.012)差异有统计学意义(F = 70.019,P < 0.001),后两组均低于vMIP-Ⅱ质粒组(t值分别为9.66、11.836,P < 0.01)。荧光� 展开更多
关键词 HIV-1 肉瘤 卡波西 萤光素酶类 病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ 抗HIV-1基因 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G JAK-STAT信号通路
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微流控芯片技术在细胞黏附研究中的优势与应用前景 被引量:1
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作者 专行 郑国侠 王云华 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第22期3584-3590,共7页
背景:细胞黏附性质影响细胞的迁移、增殖、分化,对于细胞分离和富集、组织工程、临床疾病研究及应用均有极其重要的意义。微流控芯片具有小型化、集成化、高通量、低能耗、分析快速等特性,在细胞黏附研究中具有独特的优势。目的:总结并... 背景:细胞黏附性质影响细胞的迁移、增殖、分化,对于细胞分离和富集、组织工程、临床疾病研究及应用均有极其重要的意义。微流控芯片具有小型化、集成化、高通量、低能耗、分析快速等特性,在细胞黏附研究中具有独特的优势。目的:总结并讨论微流控芯片技术在细胞黏附研究中应用的最新进展。方法:由第一作者检索2008至2018年PubMed数据库和百链云数据库,纳入与微流控技术、细胞黏附等相关的文献,并进行系统整理、归纳总结和分析。结果与结论:共检索到文献238篇,按照纳入和排除标准筛选后,共纳入53篇文献,通过阅读、总结和分析文献发现:微流控芯片平台为进行体外基于细胞黏附研究提供了新的可能性,其具有更高的通量,并且能精确控制生物、物理、化学因素构建体内细胞微环境,调控一系列细胞行为,包括细胞黏附、迁移、生长、增殖和分化及细胞与细胞、细胞与基质的相互作用等。微流控芯片技术在动态监测细胞黏附过程、定量检测细胞黏附力、分离和富集稀有细胞、筛选生物医学材料及研究细胞黏附相关疾病等方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 细胞黏附 微流控芯片技术 细胞黏附力 定量检测 细胞分离和富集 组织工程 生物医学材料 体外模型重建 药物筛选 国家自然科学基金
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下调LANA对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒复制的影响
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作者 章云衡 郑国霞 +4 位作者 童恩煜 任艳丽 狄春红 杨磊 谭晓华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1127-1134,共8页
本文旨在探讨下调潜伏相关核抗原(Latency-associated nuclear antigen,LANA)对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus,KSHV)复制的影响。以四环素(Doxycycline,DOX)处理KSHV阳性的iSLK.219细胞,在不同时间... 本文旨在探讨下调潜伏相关核抗原(Latency-associated nuclear antigen,LANA)对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus,KSHV)复制的影响。以四环素(Doxycycline,DOX)处理KSHV阳性的iSLK.219细胞,在不同时间点收集细胞,采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR)检测裂解复制期LANA mRNA表达水平。采用脂质体法转染si-LANA至iSLK.219细胞中下调LANA表达水平,以转染非特异siRNA为对照,24h后加入DOX激活病毒裂解复制,在裂解复制激活后不同时间点收集细胞和培养液上清。采用台盼蓝染色法检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescence protein,RFP)表达评价KSHV裂解复制水平;qPCR检测细胞内和上清液中KSHV基因组的拷贝数以判断病毒复制水平。诱导KSHV裂解复制后24h和48h LANA表达分别为潜伏期的2.2和2.6倍。敲低LANA后iSLK.219细胞裂解复制水平在24h、48h和72h比未敲低组分别下降了8.18、3.25和3.98倍。敲低LANA细胞内病毒基因组拷贝数没有明显增加,而未敲低组在细胞内病毒基因组拷贝数在72h增加到2.1倍。相较于未敲低组,上清液中的病毒拷贝数在所有时间点均显著减少。对细胞活力的分析显示敲低LANA降低了细胞活力。敲低LANA抑制KSHV裂解复制,LANA可能通过维持细胞存活和增加细胞内病毒基因组拷贝数促进KSHV病毒的裂解复制。 展开更多
关键词 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 潜伏相关核抗原 裂解复制
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蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克隆、表达与纯化
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作者 吴文杰 郑国侠 +2 位作者 高倩 杜曙光 王云华 《中国热带医学》 CAS 2019年第11期1014-1017,共4页
目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构... 目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21(DE3)。经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果电泳结果显示在约624 bp处出现目的DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量(Mr)约为25000,与预期分子量(Mr)22800基本相符。经Western blot分析显示该重组蛋白含有His6标签。结论本研究克隆、表达了蓝氏贾第虫GlMSR基因,并纯化获得重组蛋白,为进一步探索该酶的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 甲硫氨酸硫氧化物还原酶 克隆 表达 纯化
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双硫腙-碳纳米管/碳复合材料丝网印刷电极检测水体中的Cd(Ⅱ) 被引量:1
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作者 张召霖 袁英兰 +1 位作者 王云华 郑国侠 《环境与发展》 2020年第10期186-188,共3页
采用丝网印刷工艺制备碳纳米管/碳复合材料电极,通过双硫腙修饰,用阳极溶出伏安法检测水体中微量镉离子,并对双硫腙用量、支持电解质pH值、富集电位及时间等实验参数进行了优化。Cd^2+的浓度在(1.25~40)μg/L范围内与溶出峰电流呈良好... 采用丝网印刷工艺制备碳纳米管/碳复合材料电极,通过双硫腙修饰,用阳极溶出伏安法检测水体中微量镉离子,并对双硫腙用量、支持电解质pH值、富集电位及时间等实验参数进行了优化。Cd^2+的浓度在(1.25~40)μg/L范围内与溶出峰电流呈良好的线性关系(r^2=0.998),检出限0.42μg/L。该法用于实际水样中镉和铅的测定,平均回收率为99.25%。 展开更多
关键词 丝网印刷电极 碳纳米管 双硫腙 阳极溶出伏安法 Cd(Ⅱ)
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