常规抗结核药物联合经支气管镜冷冻治疗支气管结核的临床疗效及其对免疫功能的影响研究 被引量：34

1

作者 赵磊 狄岩 +4 位作者 王瑜玲 薛剑 戎燕筱 曹金凤 康书慧 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第29期3554-3557,共4页

目的探讨常规抗结核药物联合经支气管镜冷冻治疗支气管结核(EBTB)的临床疗效,分析治疗前后患者免疫功能的变化。方法选取2013—2015年于石家庄市第五医院确诊为EBTB患者50例为研究对象。患者常规给予2HRZE(S)/10HRE抗结核方案治疗;支气... 目的探讨常规抗结核药物联合经支气管镜冷冻治疗支气管结核(EBTB)的临床疗效,分析治疗前后患者免疫功能的变化。方法选取2013—2015年于石家庄市第五医院确诊为EBTB患者50例为研究对象。患者常规给予2HRZE(S)/10HRE抗结核方案治疗;支气管镜下清理支气管分泌物,在病变部位给予异烟肼0.3 g局部注射,冷冻探头冷冻病灶,冷冻时间约60 s/次,自行解融1 min,每个病灶反复3~5次。1周后复查支气管镜,清理冷冻坏死组织。根据患者耐受情况及病变严重程度,可多次进行冷冻治疗。记录治疗期间不良反应发生情况,治疗2个月后评价临床疗效,并于治疗前及治疗2个月后检测血清T淋巴细胞亚群和免疫球蛋白水平。结果患者接受冷冻治疗3~11次,平均(4.0±2.5)次。治疗2个月后,显效41例(82.0%),有效8例(16.0%),无效1例(2.0%),总有效率为98.0%(49/50)。5例患者出现咳嗽,3例患者出现轻微出血,未出现其他严重不良反应及并发症。治疗后CD_3^+T细胞比例、CD_4^+T细胞比例、CD_4^+T细胞及CD_8^+T细胞比值高于治疗前,CD_8^+T细胞比例低于治疗前(P<0.05)。治疗前后免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论常规抗结核药物联合经支气管镜冷冻治疗EBTB可取得良好效果,可改善患者T淋巴细胞亚群紊乱。 展开更多

关键词 结核 肺 抗结核药 冷冻疗法 支气管镜 治疗结果 T淋巴细胞亚群

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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建 被引量：5

2

作者 李慧春 陈鹏飞 +12 位作者 李先斌 丁思嘉 王康 张文超 杨德强 李林 徐晶晶 虞凌雪 姜一峰 高飞 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期19-24,共6页

猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,... 猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪小肠上皮细胞 酵母双杂交cDNA文库

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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染肺泡巨噬细胞后差异表达膜蛋白的鉴定与分析 被引量：3

3

作者 张玉娇 高飞 +6 位作者 曲泽慧 姜一峰 周艳君 虞凌雪 李丽薇 赵款 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期1-8,共8页

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害养猪业发展的重要传染病之一。2006年我国首次爆发高致病性PRRS(highly-pathogenicPRRS,HP-PRRS),与经典的PRRS相比,HP-PRRS发病率和死亡率均显著升高。目前,对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)引起的高发病率和高死亡率的机制仍不清楚。本研究利用1MOI的EGFP标记的HP-PRRSV毒株HuN4(rHuN4-EGFP)和其体外传代致弱毒株HuN4-F112(rHuN4-F112-EGFP)分别感染肺泡巨噬细胞(pulmonaryalveolarmacrophage,PAM),24h后通过流式细胞术,从FITC通道收集被PRRSV强弱毒感染的PAM,提取膜蛋白进行Shotgun质谱分析。试验最终获得82个在强弱毒感染PAM过程中存在差异表达的膜蛋白。感染rHuN4-EGFP的样品与未感染样品相比,有72个蛋白特异表达;感染rHuN4-F112-EGFP的样品与未感染样品相比,有12个蛋白特异表达。通过GO分析发现,这些蛋白主要参与代谢、生物调节与细胞加工过程,大多数蛋白具有结合、催化活性。进一步在MARC-145细胞上过表达部分差异膜蛋白,发现其中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9(proprotein coverteases subtilism/kexin 9,PCSK9)能明显抑制PRRSV强毒株和弱毒株的复制,Clusterin、Apoliprotein C-II能促进PRRSV强毒株复制。本研究表明利用Shotgun质谱技术鉴定出的差异表达膜蛋白对PRRSV复制有影响,深入分析PRRSV感染后差异表达的膜蛋白变化将有利于进一步明确其致病机制。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 肺泡巨噬细胞 膜蛋白

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PRRSV在感染早期通过活化CREB竞争抑制p65与CBP结合 被引量：2

4

作者 李先斌 王鑫 +9 位作者 谭祥梅 陈鹏飞 赵雄伟 吴瑕 虞凌雪 高飞 姜一峰 于海 童光志 周艳君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期670-676,共7页

为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情... 为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情况及其结合动态。结果显示Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)能够引起CREB明显磷酸化,Hu N4株感染PAMs和Marc-145细胞使p38磷酸化水平显著上调,PKA通路抑制剂可以明显抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化水平,但不影响PAMs中CREB的磷酸化水平。并且Hu N4株感染Marc-145细胞1 h后磷酸化的CREB能够与CBP结合,并抑制了p65与CBP的结合。当抑制剂H-89和SB203580抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化后,CREB与CBP的结合同时受到抑制。本研究表明HP-PRRSV Hu N4株感染细胞后,可以通过激活p38 MAPK通路而活化CREB,活化的CREB与p65竞争结合CBP,而抑制p65与CBP的结合,使得HP-PRRSV在感染早期抑制了IFN-β的表达。本研究为深入研究HP-PRRSV的免疫抑制机理提供了实验依据。 展开更多

关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 CREB P65 CBP IFN-Β

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糖原合酶激酶-3介导β-catenin抑制猪流行性腹泻病毒的增殖 被引量：1

5

作者 左叶雯 孔宁 +11 位作者 李智丽 童武 焦亚娟 王桦 郑浩 高飞 孙大格 于海 李丽薇 虞凌雪 童光志 单同领 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第5期16-22,共7页

糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够促进细胞内多种蛋白质的磷酸化,从而参与调控细胞的多种抗病毒功能。其中β-catenin是GSK-3信号通路下游的一个重要转录调节因子,能够被GSK-3磷酸... 糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够促进细胞内多种蛋白质的磷酸化,从而参与调控细胞的多种抗病毒功能。其中β-catenin是GSK-3信号通路下游的一个重要转录调节因子,能够被GSK-3磷酸化,磷酸化的β-catenin能够被细胞内泛素化蛋白酶体降解途径降解。为探究GSK-3/β-catenin在猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhoea virus,PEDV)复制过程中所发挥的作用,本研究通过在Marc-145细胞上分别抑制GSK-3的活性和Wnt/β-catenin通路后感染PEDV,检测结果显示,抑制GSK-3的活性后,β-catenin含量增加,并且能够抑制PEDV的增殖;抑制Wnt/β-catenin通路后,β-catenin含量降低,促进PEDV在Marc-145细胞上的增殖。结果表明,PEDV感染Marc-145细胞后,宿主细胞能够下调GSK-3的活性,并进一步上调β-catenin的含量,从而抑制病毒在细胞内的增殖。本研究从分子层面上解释了GSK-3介导β-catenin在病毒复制过程中的作用,为PED的防控与治疗提供了一定的指导意义。 展开更多

关键词 糖原合成酶激酶-3 Β-CATENIN 猪流行性腹泻病毒

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猪外周血及骨髓源树突状细胞分化方法的建立 被引量：1

6

作者 赵文影 姜一峰 +9 位作者 虞凌雪 赵款 朱豪杰 高飞 李国新 张玉娇 李丽薇 周艳君 刘雪兰 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期61-65,共5页

本研究对猪源树突状细胞(dendritic cell,DC)的分化条件进行了摸索,通过对试验猪只日龄的选择、刺激物浓度和刺激时间的比较以及DC表面分子标记的选择,确定了猪外周血和骨髓源DC的分化条件。静脉采集15日龄猪只抗凝血分离获得外周血单... 本研究对猪源树突状细胞(dendritic cell,DC)的分化条件进行了摸索,通过对试验猪只日龄的选择、刺激物浓度和刺激时间的比较以及DC表面分子标记的选择,确定了猪外周血和骨髓源DC的分化条件。静脉采集15日龄猪只抗凝血分离获得外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),贴壁12 h后,用终浓度80 ng/mL的GM-CSF和40 ng/mL的IL-4共同刺激7 d,用CD152作为DC的表面分子标志,试验结果显示:贴壁的单核细胞在GM-CSF和IL-4的共同刺激下,7 d后能够将超过60%的单核细胞刺激分化为CD152^+的DC。取15日龄猪只的股骨和胫骨并冲洗骨髓腔,参考外周血来源DC的分化方法,结果显示:可以获得约63%的骨髓源单核细胞刺激分化为CD152^+的DC。本研究建立的DC分化方法为进一步研究病毒感染后猪体建立获得性免疫应答的机制奠定了平台基础。 展开更多

关键词 外周血单核细胞 树突状细胞 细胞分化

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针对猪瘟病毒E2蛋白的实时荧光定量PCR方法的建立及应用 被引量：1

7

作者 高飞 姜一峰 +6 位作者 李国新 张玉娇 李丽薇 虞凌雪 周艳君 郑海红 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第5期23-28,共6页

根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的保守序列,设计合成一套特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件进行优化后,检测其特异性和灵敏性。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR在101～108范围内线性相关... 根据猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的保守序列,设计合成一套特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件进行优化后,检测其特异性和灵敏性。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR在101～108范围内线性相关系数为0.997,能够检测到相当于10 copies/μL的病毒核酸,比常规PCR检测方法敏感性强;采用建立的实时荧光定量PCR方法检验猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒2型呈现阴性结果,特异性强;变异系数为0.09%～0.7%,小于1%,具有良好的重复性。本研究建立的猪瘟病毒实时荧光定量PCR方法为临床上猪瘟病毒的诊断和定量研究提供了重要的检测工具。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 荧光定量PCR E2蛋白

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猪流行性腹泻病毒Nsp12与宿主RNF7蛋白相互作用的研究

8

作者 赵雄伟 李慧春 +13 位作者 陈鹏飞 周书亭 吴瑕 劳梦琴 童武 高飞 虞凌雪 刘长龙 孔宁 单同领 于海 姜一峰 童光志 周艳君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期461-467,共7页

猪流行性腹泻病毒(PEDV)编码的Nsp12蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性,在PEDV复制过程中发挥重要作用。为了研究与Nsp12蛋白相互作用的宿主细胞蛋白对PEDV复制的影响,本研究利用酵母双杂交技术将诱饵质粒pGBKT7-Nsp12与猪小肠绒毛... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)编码的Nsp12蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性,在PEDV复制过程中发挥重要作用。为了研究与Nsp12蛋白相互作用的宿主细胞蛋白对PEDV复制的影响,本研究利用酵母双杂交技术将诱饵质粒pGBKT7-Nsp12与猪小肠绒毛上皮细胞(IECs)cDNA酵母表达文库进行杂交筛选,获得的阳性克隆经过测序鉴定证实为环指蛋白7(RNF7),将pGBKT7-Nsp12与p GADT7-RNF7进行酵母回复验证,结果显示二者共转化后能分解SD/-4/X/A中的X-α-Gal形成蓝色菌落,表明Nsp12与RNF7蛋白在酵母中存在相互作用。同时,构建p CAGGS-Nsp12-HA和p CAGGS-Flag-RNF7真核表达载体,利用针对不同标签的抗体进行正向和反向免疫共沉淀鉴定,进一步证实PEDV Nsp12蛋白与RNF7蛋白之间存在直接相互作用;激光共聚焦显微镜观察发现Nsp12蛋白和RNF7蛋白在细胞质中存在共定位现象。为了分析宿主细胞中RNF7蛋白异常表达对PEDV增殖的影响,将构建的RNF7真核表达质粒pcDNA3.1-RNF7转染LLC-PK1细胞后,再用PEDV感染过表达RNF7的LLC-PK1细胞,通过western blot检测LLC-PK1细胞中PEDV N蛋白表达量,荧光定量PCR检测PEDV N基因转录水平,采用TCID50方法检测病毒滴度,结果显示,过表达RNF7后LLCPK1细胞内PEDV N蛋白表达量和N基因拷贝数均下降,其子代病毒滴度也明显低于正常对照组,表明过表达RNF7蛋白可以抑制PEDV的增殖。而利用si RNA-178敲低宿主细胞内源性RNF7蛋白的表达,再以MOI 0.01的PEDV感染后,对感染后不同时间的细胞样品进行western blot检测和病毒滴度检测,结果显示在PEDV感染后24 h,细胞内PEDV N蛋白表达量明显增加,PEDV的滴度在感染后18 h和24 h时分别是对照组的1.10倍和1.17倍。本研究结果首次证实了宿主细胞中RNF7蛋白表达对PEDV的复制发挥负调控作用,为深入探究PEDV复制调控的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 Nsp12 RNF7 蛋白相互作用

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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组PRRSV疫苗株rPRRSV-E2的水平传播能力研究

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作者 高飞 姜一峰 +6 位作者 李国新 张玉娇 虞凌雪 周艳君 李丽薇 郑海红 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第6期19-23,共5页

为研究表达猪瘟病毒E2蛋白的重组PRRSV疫苗株rPRRSV-E2能否在猪群中水平传播,本研究将15头PRRSV抗原抗体均为阴性,PRV、CSFV和PCV2抗原阴性的35日龄健康仔猪,随机分成3组,每组5头。A组接种rPRRSV-E2第5代细胞毒,剂量为105.0TCID50/头;B... 为研究表达猪瘟病毒E2蛋白的重组PRRSV疫苗株rPRRSV-E2能否在猪群中水平传播,本研究将15头PRRSV抗原抗体均为阴性,PRV、CSFV和PCV2抗原阴性的35日龄健康仔猪,随机分成3组,每组5头。A组接种rPRRSV-E2第5代细胞毒,剂量为105.0TCID50/头;B组为同居感染对照组,接种DMEM;Mock组接种DMEM,单独饲养。猪体免疫后第7 d采集血清、鼻拭子和肛拭子样品,进行病毒载量和PRRSV、CSFV的抗原抗体含量测定,共持续监测3个月;所有猪只在试验期间每天观察临床症状。结果显示:未接种疫苗的同居对照组猪只各时间点血清中均未检测到PRRSV,也未检测到针对PRRSV和CSFV的抗体。研究结果表明,rPRRSV-E2不能在猪群中水平传播。 展开更多

关键词 基因工程疫苗 水平传播 中和抗体 病毒分离

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折反射周视系统研究进展与展望 被引量：8

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作者 贺宇 王岭雪 +8 位作者 蔡毅 周星光 薛唯 姜杰 刘福平 李洪兵 陈骥 罗永芳 李茂忠 《中国光学》 EI CAS CSCD 2017年第5期681-698,共18页

折反射周视系统作为近十几年发展起来的一种新型周视视觉实现形式,相比相机旋转扫描、多相机图像拼接和鱼眼镜头大视场成像等常规方法,在小型化、结构灵活性、成本和实时性方面具有优势。本文综述了折反射周视系统的成像模型、系统标定... 折反射周视系统作为近十几年发展起来的一种新型周视视觉实现形式,相比相机旋转扫描、多相机图像拼接和鱼眼镜头大视场成像等常规方法,在小型化、结构灵活性、成本和实时性方面具有优势。本文综述了折反射周视系统的成像模型、系统标定、畸变校正和全视场清晰成像等基本问题研究状况,讨论了折反射周视系统在红外成像和立体视觉领域的扩展应用研究现状,最后总结了目前存在的问题,并提出未来折反射周视成像系统将围绕非单视点成像模型、提高空间分辨力的方法和处理算法实时实现开展研究。 展开更多

关键词 折反射周视系统 畸变校正 红外成像 周视立体视觉

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猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定 被引量：8

11

作者 杨德强 李慧春 +10 位作者 陈鹏飞 王康 李先斌 张文超 虞凌雪 姜一峰 高飞 黄勤峰 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第3期18-22,共5页

本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重... 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 杆状病毒 SF9细胞

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海马γ-氨基丁酸A型受体α5亚单位在丙泊酚促进恐惧记忆消退机制中的作用 被引量：1

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作者 康瑜 唐玲 +1 位作者 于布为 薛庆生 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期608-611,共4页

目的检测丙泊酚对小鼠恐惧记忆消退的影响,探讨调控神经细胞再生的海马γ-氨基丁酸A型受体(GABA_A受体)α5亚单位在丙泊酚促进恐惧记忆消退机制中可能的作用。方法将36只C57BL/6小鼠随机分入电刺激丙泊酚组、电刺激对照组和空白对照组,... 目的检测丙泊酚对小鼠恐惧记忆消退的影响,探讨调控神经细胞再生的海马γ-氨基丁酸A型受体(GABA_A受体)α5亚单位在丙泊酚促进恐惧记忆消退机制中可能的作用。方法将36只C57BL/6小鼠随机分入电刺激丙泊酚组、电刺激对照组和空白对照组,每组12只。应用条件恐惧实验建立小鼠恐惧记忆研究模型。在记忆的巩固期,电刺激丙泊酚组小鼠予腹腔内注射丙泊酚150 mg/kg,电刺激对照组小鼠予腹腔内注射相同体积的0.9%氯化钠溶液,空白对照组完成相同训练流程但不予声音和电刺激。在条件恐惧实验结束后1和4周进行恐惧记忆测试(包括情景测试和声音测试),在条件恐惧实验后1周进行高架十字迷宫测试,检测小鼠的焦虑样行为。第4周恐惧记忆测试后,采用Western印迹法检测小鼠海马区GABA_A受体α5亚单位蛋白质相对表达量。结果在条件恐惧实验结束后1和4周的情景测试中,以及在条件恐惧实验结束后1周的声音测试中,电刺激对照组和电刺激丙泊酚组的木僵时间均显著长于空白对照组(P值均<0.05),电刺激对照组又显著长于电刺激丙泊酚组(P值均<0.05);在条件恐惧实验结束后4周的声音测试中,电刺激对照组和电刺激丙泊酚组的木僵时间均显著长于空白对照组(P值均<0.05),但电刺激对照组与电刺激丙泊酚组间的差异无统计学意义(P>0.05)。在高架十字迷宫测试中,3组小鼠的开放臂停留时间比和开放臂进入次数比的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。电刺激对照组的GABA_A受体α5亚单位蛋白质相对表达量显著低于电刺激丙泊酚组和空白对照组(P值均<0.05),后两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论在恐惧记忆巩固期给予丙泊酚能够促进恐惧记忆的消退,这一作用可能是通过丙泊酚抑制海马GABA_A受体α5亚单位表达降低实现的。 展开更多

关键词 丙泊酚 y-氨基丁酸A型受体a5亚单位 恐惧记忆

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稳定表达猪SAMHD1蛋白的MARC-145细胞系构建与鉴定 被引量：1

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作者 杨莘 姜一峰 +5 位作者 虞凌雪 刘欢 周艳君 高飞 黄勤峰 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第4期1-5,共5页

SAMHD1作为宿主的天然免疫限制性因子,参与机体的天然免疫调控,在机体抗病毒感染过程中发挥重要的作用。为了建立稳定表达猪SAMHD1的细胞系,本研究将猪SAMHD1全长编码基因克隆至慢病毒载体pWPXL,构建重组质粒pWPXLpSAMHD1。将重组质粒... SAMHD1作为宿主的天然免疫限制性因子,参与机体的天然免疫调控,在机体抗病毒感染过程中发挥重要的作用。为了建立稳定表达猪SAMHD1的细胞系,本研究将猪SAMHD1全长编码基因克隆至慢病毒载体pWPXL,构建重组质粒pWPXLpSAMHD1。将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒。将该慢病毒感染MARC-145细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得表达猪SAMHD1基因的MARC-pSAMHD1细胞系。经检测发现,该细胞系传至10代,仍能稳定表达猪SAMHD1蛋白。该细胞系的建立为猪SAMHD1抗病毒特性和猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理等研究奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 SAMHD1 猪 慢病毒系统 MARC-145细胞

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