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ACh对COCl2化学缺氧诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及其分子机制 被引量：4
1
作者 吴涛 耿登峰 +2 位作者 符宇 高佳佳 谈智 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期641-648,共8页
【目的】探讨乙酰胆碱(Ach)对抗氯化钴(CoCl_2)诱导H9C2心肌细胞缺氧损伤的作用及其分子机制。【方法】应用600μmol/L CoCl_2处理H9C2心肌细胞12 h以建立缺氧损伤细胞模型,应用ACh 10^(-3) mol/L预处理8 h建立心肌细胞保护模型,实验分... 【目的】探讨乙酰胆碱(Ach)对抗氯化钴(CoCl_2)诱导H9C2心肌细胞缺氧损伤的作用及其分子机制。【方法】应用600μmol/L CoCl_2处理H9C2心肌细胞12 h以建立缺氧损伤细胞模型,应用ACh 10^(-3) mol/L预处理8 h建立心肌细胞保护模型,实验分为1空白对照组(control);2损伤模型组(CoCl_2600μmol/L);3 ACh预处理组(ACh 10^(-3) mol/L+CoCl_2600μmol/L);4ɑ7胆碱能受体(ɑ7n ACh R)拮抗剂组:ACh+甲基牛扁碱柠檬酸盐(MLA)+CoCl_2组(ACh 10^(-3) mol/L+CoCl_2600μmol/L+MLA 10-6mol/L)。应用CCK-8试剂盒检测细胞存活率。双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(ROS)水平。JC-1荧光显微镜照相法检测细胞线粒体膜电位水平改变。Hoechst33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的形态及数量的变化。Fluo4-AM荧光显微镜照相法测定细胞胞质内钙离子水平的改变。Western Blot检测Drp1、caspase-3蛋白水平。【结果】600μmol/L CoCl_2处理显著损伤H9C2心肌细胞,线粒体膜电位丢失,ROS生成、细胞凋亡率、胞内钙离子显著增加(P<0.001),明显上调Drp1、caspase-3表达水平(P<0.001);应用ACh预处理可明显提高H9C2心肌细胞存活率(P<0.001),ROS水平下降,线粒体膜电位丢失减少(P<0.001),细胞凋亡率、胞内钙离子明显下降(P<0.001),显著抑制CoCl_2对Drp1、caspase-3表达的上调作用(P<0.01);ACh+MLA预处理可对抗ACh上述作用过程。【结论】ACh具有保护缺氧H9C2心肌细胞的作用,其机制可能与通过激动ɑ7nAChR抑制钙离子-Drp1通路有关。 展开更多
关键词 乙酰胆碱 H9C2心肌细胞 心肌缺氧 细胞凋亡
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