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人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响
1
作者
张林
朱勇
+3 位作者
仲宁
吴广洲
沈振亚
施舜缤
《蚌埠医学院学报》
CAS
2016年第11期1417-1421,共5页
目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用p GCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧...
目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用p GCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用Brd U法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,Brd U检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。
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关键词
病毒
AURKA基因
慢病毒载体
RNA干扰
A549细胞
长春新碱
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职称材料
题名
人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响
1
作者
张林
朱勇
仲宁
吴广洲
沈振亚
施舜缤
机构
南通大学附属吴江医院胸外科
江苏大学附属昆山医院胸外科
南通大学第四附属医院胸外科
苏州大学医学部
出处
《蚌埠医学院学报》
CAS
2016年第11期1417-1421,共5页
基金
苏州市科学技术计划项目(SYS201301)
昆山市科学基金项目(ks1234)
文摘
目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用p GCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用Brd U法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,Brd U检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。
关键词
病毒
AURKA基因
慢病毒载体
RNA干扰
A549细胞
长春新碱
Keywords
virus
AURKA grene
lentiviral vector
RNA interference
A549
Vincristime
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
Q291 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响
张林
朱勇
仲宁
吴广洲
沈振亚
施舜缤
《蚌埠医学院学报》
CAS
2016
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