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题名基于重叠延伸PCR构建幽门螺杆菌MreB重组载体
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作者
李芳
高婧
马金成
范聪聪
付亚娟
侯晓强
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机构
廊坊师范学院生命科学学院
河北省高校食药用菌应用技术研发中心
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出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期415-420,共6页
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基金
河北省大学生创新创业计划项目("基于PCR sewing高效快速地构建幽门螺杆菌Mre B重组质粒"
No.201510100035)
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文摘
[目的]基于重叠延伸PCR技术,构建串联亲和层析标签(TAP)标记的幽门螺杆菌骨架蛋白Mre B的重组质粒。[方法]将幽门螺杆菌Mre B基因终止密码子TAA前DNA序列(Mre Ba)、TAP和终止密码子TAA后的DNA序列(Mre Bb),通过重叠延伸PCR进行连接,形成大小约3.1 kb的融合片段Mre BCF;Mre BCF片段经XhoⅠ酶切、纯化后,克隆到经SmaⅠ和XhoⅠ双酶切的线性载体p K18mob Sac B上。[结果]PCR、酶切及DNA测序的结果表明,重组质粒p K18Mre BCF包含大小约为740 bp、1 400 bp和1 000 bp的三个片段(Mre Ba、TAP和Mre Bb),并且这三个片段的接头连接及核苷酸序列完全正确。[结论]利用重叠延伸PCR可对多个片段进行无缝连接,简便、高效地构建重组质粒;成功构建了重组质粒p K18Mre BCF,为将来幽门螺杆菌Mre B蛋白功能复合体的分离和鉴定奠定了基础。
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关键词
幽门螺杆菌
骨架蛋白
MREB
重叠延伸PCR
重组载体
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Keywords
Helicobacter pylori, cytoskeletal protein, MreB, overlapping extension PCR, recombinant vector
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分类号
Q784
[生物学—分子生物学]
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